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1、1透析液细菌内毒素的检测方法和探讨【摘要】目的探讨透析液的细菌内毒素正确的采样方法，以减少操作不当而造成阳性率的发生。方法对我院血液净化中心透析液用改良鲎试验检测内毒素。结果内毒素检测的结果跟标本放置时间有关，标本放置时间越长，检测结果越不准确，而对于干预前、后采集内毒素标本差异无统计学意义。结论目前透析用水及透析液存在的内毒素及细菌的污染，定期检测反渗水、透析液的内毒素水平及进行细菌培养，定期消毒反渗水装置及透析液容器，对减少致热源反应至关重要。 【关键词】透析液内毒素反渗水细菌 众所周知，使用不合格的纯化水进行血液透析将会导致透析病人出现透析并发症或慢性中毒甚至死亡，尤其是当病人的中毒症状
2、不表现为急性或亚急性状态时，人们通常将其归咎于终末期肾衰的并发症，而忽略了对水处理系统的维护及水质的监测1。随着透析水平的逐渐提高，透析中心人员对水质的监测越来越重视，但是透析液内毒素的检测往往会由于操作中工作人员的失误或标本放置时间的延长而影响检测结果。此研究表明，透析液内毒素的检测结果跟工作人员的操作方法和标本放置的时间有关，报告如下。 1 资料和方法 1.1 一般资料 血液透析机 25 台，其中贝朗 15 台，费森尤斯 5 台，金宝 5 台。透析器入口处透析液。一次性无菌注射器（10ml），无菌干试管，一次性无菌手套，消毒棉签，安尔碘。1.2 方法 1.2.1 研究方法本组 100 例，
3、设对同一台透析机在同一时间采用相同的方法留取内毒素标本 4 例，共 25 台，放置在不同时间段检测。另取标本 80 例，对透析机进行2干预前和干预后各抽取内毒素标本 40 例。 1.2.2 标本采样方法对无采样口的透析机由 2 人同时操作，1 人戴上一次性无菌手套，先用安尔碘棉签擦拭快速接头表面 3 次。2 人洗手后，1 人将透析液供液管的快速接头从透析器上分离出来，向外拉住快速接头的套环不要释放，使快速接头外层套环的位置低于内层的接头开口，使开口朝上，让供液管的透析液快速冲洗接头约 30 秒，另 1 人迅速将无菌注射器针头的 2/3 插入快速接头内抽取透析液标本；对有采样口的透析机由 1 人
4、操作，操作者戴上一次性无菌手套，先用安尔碘棉签擦拭采样口表面 3 次，洗手后，采用无菌操作的方法用无菌注射器斜刺入进液管抽取透析液样本，然后按常规的无菌标本采样法将透析液标本置于无菌干试管内。另一组是对透析机不做任何措施和采用常规消毒冲洗后运用上述方法分别抽取内毒素标本。 1.2.3 检测方法使用 0.5ml 规格的鲎试剂，取鲎试剂若干支，开启，按标示装量加入检查用水溶解，轻轻摇匀备用。取 1075mm 试管 8 支，其中 2 支作供试品检查管，2 支作阴性对照管，2 支作阳性对照管，2 支作供试品阳性对照管。每支试管加入 0.1ml 的已溶解的鲎试剂，每支供试品检查管加入 0.1ml 供试品
5、；阴性对照管加入 0.1ml 的检查用水；阳性对照管加入 0.1ml 浓度为 2 的内毒素溶液，检品阳性对照管加入 0.1ml 含 2 内毒素的供试品。封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入 371的恒温器中孵育 602 分钟，然后取出观察结果。 试管在孵育期间应避免任何的振动（所有鲎试剂及内毒素标准品均为湛江安度斯生物有限公司合格产品，使用前均进行灵敏度复核，符合规定）。 2 结果 2.1 透析液及透析用水的细菌内毒素限度（L 值）参照 AAMI 标准：反渗水内毒素30.25EU/ml，透析液内毒素2EU/ml，按照这个标准。 3 讨论 内毒素的主要成分是脂多糖类（LPS）的复合物，主要来自 G菌的细
6、胞壁，不仅活的细菌能分泌出来，死亡的细菌溶解后也能释放出来2。血液透析患者每周需要透析 23 次，每次需用透析液为 0.5L604120L，如此大量的透析液只通过半透膜和血液接触，因此透析液质量要求非常高。如果水中含有有害物质，很容易通过透析膜进入患者的血液中，即使是较低浓度的有害物质长期蓄积，也会导致慢性中毒，严重的甚至危及生命3，血液透析室的医院感染在血液净化领域越来越受到重视。70 年代初期曾有报告。 目前，随着透析中心的管理越来越规范，已形成不定期对反渗膜进行检测，由于管理疏忽而造成透析液不合格的几率也越来越少。而造成水质不合格的主要原因是由于采样的不规范和标本检测时间的滞后，从而影响
7、了采样的结果。以往我们对内毒素的不合格标本都是采取重复检测的方法，这样不仅成本增高，耗时过长，而且也延误了对超标透析液的及时干预。为了避免结果不合格，通过实验我们采取跟踪检测的方法，发现标本放置时间过长是直接造成假阳性发生的主要因素。为此透析中心派专人负责，留样前与检测单位联系，由透析中心人员与检测单位人员共同合作，在样本抽取后 3 小时内进行检测，结果均符合标准。标本随着时间的延长，发生阳性的几率越来越大。但临床上往往检测单位和透析中心为两个部门，需要透析中心人员跟踪检测才能达到要求。 标本的抽取应该在常态下进行，一般在早晨第一班病人上机前抽取。早晨开机后，先将机器冲洗 1015min，然后
8、抽取标本，对于不同型号的透析机采用不同的抽取方法抽取标本（方法如上）。如果多次采样进液管溶液被刺破，血液透析机的密封程度受损，不宜长期监测。因此，我们认为因内毒素的检测周期短，监测密集，4最好采用第一种方法进行采样。 表 2 显示，在实践中，检测前的干预和非干预进行对比，结果无显著性差异。以往标本结果不合格时，在重新留样前通常都是加强对透析机器、管道的热消毒和化学消毒后进行抽样，其实这样并不准确，样本的抽取应该在常态干预下进行，只要严格按机器的操作规程，加强两病人之间的消毒、冲洗，监测机器的消毒效果和消毒液的有效浓度，尽可能的减少一切外源性干扰因素影响结果。 通过对资料的总结分析，探讨了透析液
9、内毒素检测标本的正确采样方法，减少因操作不当而造成的阳性率的发生，专人进行留样监测，从而为进一步规范血液透析内毒素监测提供了参考依据。建议定期消毒反渗水装置及透析液容器，采用双极反渗系统，取消储水罐，定期检测内毒素及行细菌培养，以避免热源反应的发生，进一步提高透析质量。 参考文献 1 RebaccaL.Amato.WaterTreatmentforHemodialysis，IncludingthelatestAAMIstandards J.NephrologyNursingJournal，2001，28(6). 2刘惠兰，李国刚，张晓洁，段晓峰，姚咏明.透析用水及透析液中内毒素污染状况的分析J.中华内科杂志，1999，12(38）：806-809. 3殷衡基.血液透析水处理设备的现状与研发，2007，2.
