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1、1 1第八章第八章 临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查 免疫学检查是实验诊断学中的重要组成部分,常用于 一些疾病的诊断与疗效监测,这些疾病主要有:1.感染性疾病,如肝炎、伤寒等;2.自身免疫性疾病,如SLE、类风关、自免溶、ITP等 ;3.变态反应性疾病(超敏),分为四型:4.免疫缺陷病:如AIDS。5.肿瘤 免疫功能包括体液免疫和细胞免疫。2 2第一节 血清免疫球蛋白检测 免疫球蛋白(Ig)是指一组具有抗体活性的球蛋白,由浆 细胞合成与分泌,存在于机体的血液、体液、外分泌 液和部分细胞的膜上。Ig因其功能和理化性质分IgG、 IgA、IgM、IgD和IgE五大类。一、免疫球蛋白G检测 免疫
2、球蛋白G(IgG)为人体含量最多和最主要的Ig,占 总免疫球蛋白的70-80。它对病毒、细菌和寄生虫 等都有抗体活性,也是唯一能够通过胎盘的Ig,通过 自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。参考值 7.016.6gL3 3临床意义1IgG增高 多克隆性增高:即IgG、IgA、IgM均增高。常见 于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核 、链球菌感染以及自身免疫性疾病如系统性红 斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎等; 单克隆性增高:仅有某一种Ig增高而其他种类不 增高。主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多 发性骨髓瘤(MM),可见到IgG、IgA、IgD或IgE 增高,据此可将MM分为IgG型、IgA型、
3、IgD型 和IgE型。其中多为IgG型,其次为IgA型、IgD 型,少见IgE型。4 42. IgG降低 见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联 合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综 合征、病毒感染和免疫抑制剂患者。儿童较成年 人低,女性稍高于男性。 需按年龄组参考值来进行分析和判断。5 5二、免疫球蛋白A检测 免疫球蛋白A(IgA)分为血清型IgA与分泌型IgA(SIgA)两种 。参考值 血清IgA为0.73.58L;SIgA:唾液平均为0.3g L,泪液为3080gL,初乳平均为5.06gL,粪便平 均为1.3gL。临床意义 1IgA增高 见于IgA型MM,SLE、类风湿性关节炎、
4、肝硬化、湿疹 和肾脏疾病等。 2IgA降低 见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、 轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病 等。 6 6三、免疫球蛋白M检测 免疫球蛋白M(IgM)是分子质量最大的Ig,约占血清总 Ig的5-10, IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子,天然同族凝聚素 (抗A、抗B)、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类 。 参考值 0.52.6gL 临床意义 1IgM增高:见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关 节炎、SLE等。此外,在原发性巨球蛋白血症时,IgM 呈单克隆性明显增高; 2IgM降低:见于IgG型重链病、IgA型MM、先天性免 疫缺陷症、免疫抑制疗法
5、后、淋巴系统肿瘤和肾病综 合征等。 7 7四、免疫球蛋白E检测 免疫球蛋白E(IgE)为血清中最少的一种Ig,约占血清总Ig 的0.002;它是一种亲细胞性抗体,与变态反应、寄生 虫感染及皮肤过敏等有关。 参考值 ELISA法为0.10.9mgL。 临床意义 1IgE增高 见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类 风湿关节炎,以及各种过敏性疾病,寄生虫感染等;2IgE降低 见于先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性 肿瘤、长期用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩张症等 。 8 8五、血清M蛋白检测 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白,它是一种单克隆B细胞增 殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白
6、分子及 其分子片段。 参考值 蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法 临床意义 检测到M蛋白,提示单克隆免疫球蛋白增殖病。正常人为阴性。 见于:多发性骨髓瘤:以IgG型最常见,其次为IgA型, IgD和IgE罕见,也有IgM型的报道;巨球蛋白血症 (Waldenstrom症):存在大量单克隆IgM;重链病:出现 Ig重链(、重链);轻链病:出现单克隆游离轻链; 半分子病:系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片 段;7S IgG病:为恶性M蛋白病等。9 9第二节 血清补体检测 补体(complement,C)是一组具有酶原活性的不 耐热的糖蛋白。 有三组分子组成:第一组:它由传统途径的九种成分C1
7、(C1q、C1r 、C1s)C9;第二组:B因子、D因子、P因子、H因子等;第三组:补体调节蛋白,如C1抑制物等。 血清总补体活性或其单一补体成分的变化对某些 疾病的诊断和疗效观察有极其重要的意义。1010一、总补体溶血活性检测 总补体溶血活性(CH50)以溶血素(抗体)致敏的绵羊红细 胞(抗原抗体复合物)激活待测血清中的Cl,进而引起补 体活化的连锁反应,(在绵羊红细胞上形成多分子的聚 合物,影响其膜表面的结构与功能,)最终导致绵羊红 细胞溶解。 溶血程度在一定范围内(2080溶血率)与补体的 活性呈正相关,为S形曲线关系。故一般以50溶血作 为检测终点(CH50),较为灵敏、准确。 参考值
8、 试管法为50100kUL1111临床意义 主要反映补体传统途径9种补体成分(ClC9)的综合水 平。CH50增高:见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤 ;CH50减低:更有意义:见于各种免疫复合物性疾病, 如肾小球肾炎、自身免疫性疾病(如SLE)、感染性心内 膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病,重症营养不良和遗传 性补体成分缺乏症等。1212二、补体C3检测 补体C3(C3)是一种由肝脏合成的2-球蛋白,由和两条 多肽链组成。 C3 在补体系统各成分中含量最多,是传统 途径和旁路途径被激活的关键物质。 参考值 0.81.5gL 临床意义 增高:见于急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等; 减低:见于
9、大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、 狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎等。 因此检测C3对这些疾病诊断有价值。1313第三节 细胞免疫检测 人体的淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体, 可分为T、B、K和NK等细胞群,它们又分别有若干亚群 ,各有其特异的表面标志和功能。 这些淋巴细胞群和亚群在免疫应答过程中相互协作、相 互制约,共同完成对抗原物质的识别、应答和清除,从 而维持机体内环境的稳定。 临床上各种免疫病均可出现不同群淋巴细胞数量和功能 的变化。对它们进行检测可用以判断细胞免疫功能。 1414T淋巴细胞T淋巴细胞执行特异性细胞免疫应答,在机体细胞 免疫和体液免疫中
10、均有重要作用。 u T淋巴细胞作为免疫效应细胞主要行使TDTH介导的 DTH反应和TC细胞直接杀伤靶细胞。 uT淋巴细胞作为免疫调节细胞,具有辅助其他免疫细胞 分化和调节免疫应答(促进和抑制)的功能。1515一、T淋巴细胞的检测 T淋巴细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成, 在形态学上难以区分,但是可借助于其细胞膜表面标 志加以区别,此检测方法众多,现主要介绍下面几种 : (一)T细胞花结形成试验 T细胞表面有绵羊红细胞(SRBC)受体,可与SRBC结 合形成花结样细胞,称为红细胞玫瑰花结形成试验或E 玫瑰花结形成试验(ERFT)。 本试验用于检测T细胞的数量。 显微镜下计数花结形成细胞(
11、以每个淋巴细胞粘附3个 或3个以上绵羊红细胞者为花结形成细胞)占淋巴细胞 的比例,T淋巴细胞的百分率(EtRFC)1616参考值 EtRFC为64.46.7 临床意义 降低:见于免疫缺陷性疾病如恶性肿瘤、某些病毒感染、大面 积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖性疾病; 升高:见于甲状腺功能亢进症、甲状腺炎、重症肌无力、慢性 活动性肝炎、SLE活动期及器官移植排斥反应等。1717T细胞花结形成试验1818(二)T细胞转化试验 体外培养时,T淋巴细胞被丝裂原,如植物血凝素(PHA) 或刀豆蛋白A(ConA)刺激,代谢活跃,增加蛋白质、 RNA和DNA的合成,从而转化为母细胞,部分细胞发生 有丝分裂。 计
12、数淋巴细胞及转化的母细胞数,求出转化的百分率。 其检测方法有: 1.形态学法:母细胞特点体积增大,浆深染,核增大,染色质疏松,核仁明显。19192. 3H-TdR掺入法: T淋巴细胞中加入PHA等发生有丝分裂,且伴有新的 DNA合成,此时若加入氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H- TdR),则3H-TdR可被淋巴细胞作为合成DNA的原料 摄入,根据3H-TdR的摄入量,可判断细胞的增殖程度 。 采用液体闪烁仪测定淋巴细胞的脉冲数分(cpm)值, 计算出刺激指数(SI)。 从而反映T细胞的免疫功能。2020参考值 形态学法:转化百分率为60.17.6。3H-TdR掺入法:刺激指数(S1)测定组cpm均值
13、对照组 cpm均值;正常SI0.25。 临床意义 1前列腺癌时6090患者血清PSA水平明显升高 ;当行外科切除术后,90患者血清PSA水平明显降低 。 2若见PSA水平升高,即有转移或复发的可能。 3良性前列腺瘤、前列腺肥大或急性前列腺炎时,约有14的患者血清PSA水平升高,此时应注意鉴别。4747二、糖脂肿瘤标志物检测(一)癌抗原-50测定 癌抗原-50(CA-50)是一种肿瘤糖类相关抗原,主要由唾液酸 糖脂和唾液酸糖蛋白所组成。它对肿瘤的诊断有广泛性。临床意义 1增高见于87的胰腺癌,80的胆(道)囊癌,73的原发 性肝癌,50的卵巢癌,20的结肠癌、乳腺癌、子宫癌等 。 2动态观察其水
14、平变化对癌肿瘤疗效及预后判断、复发监测 。 3对鉴别良性和恶性胸、腹水有价值。 4在慢性肝病时,CA-50也升高。 4848(三)糖链抗原19-9测定糖链抗原19-9(CAl9-9)是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的 胰腺、胆和肠等组织;在成人的胰、胆等部位也有少量存 在。 临床意义 1.胰腺癌、肝胆和胃肠道疾病时血中CAl9-9的水平可明显升 高。但无早期诊断价值,对早期病人的敏感度仅为30。 2连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有 重要价值。 3急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝 硬化等,血清CAl9-9也可出现不同程度的升高。 4若结合CEA检测,对胃癌诊断符
15、合率达85。4949(四)癌抗原125测定 癌抗原125(CA125)是一种糖蛋白。存在于上皮性卵巢癌组织及患者血清中 参考值: 血清CA125 3.5万uL。 临床意义 1. 卵巢上皮癌病人的CA125的水平可明显升高;对观察疗效和判断复发较为敏感。 2盆腔肿瘤的鉴别。 3其他肿瘤可出现不同程度的升高。 4早孕等。5050三、酶类肿瘤标志物检测(一)异常凝血酶原测定: 在缺乏维生素K的情况下,肝细胞不能合成正常的依赖维生素K的凝血因子(、X),只能合成无凝血功能的异常凝血酶原(APT)。 肝细胞癌时,由于癌细胞对凝血酶原前体的合成发生异常,凝血酶原前体羧化不足,从而生成大量的APT。APT测定是反映肝细胞癌的一种标志物。参考值 1:40为阳性。 临床意义 1ANA阳性 最多见于未治疗的SLE,阳性率达80-100; 活动期SLE几乎100阳性。经皮质激素治疗后,阳性率可降低。 也可见于药物性狼疮(100)、混合性结缔组织病(100) 、全身性硬皮病(85-95)、多发性肌炎(30-90)、 狼疮性肝炎(95-100)、原发性胆汁性肝硬化(95-100 )。 其他还见于干燥综合征、类风湿关节炎、桥本甲状腺炎等 。 62622荧光核型