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1、第一章 常用生物检测试剂的准备- 1 -第一章第一章 常用生物检测试剂的准备常用生物检测试剂的准备1. 常用生物检测试剂的准备常用生物检测试剂的准备1.1 常用玻璃器皿及其清洁方法常用玻璃器皿及其清洁方法1.1.1 常用玻璃器皿常用玻璃器皿实验室用的玻璃器皿应是由中性硬质玻璃制成。能耐受高温灭菌而不致破碎。玻璃器皿的种类繁多，仅就常用的介绍如下。（1）试管：试管的管壁应较厚。为便于加塞并防止异物落入，以直口式试管为佳(即不卷口的)。常用的试管规格有：15mm150mm，用来装 510ml 肉汤培养基或琼脂斜面用；10mml00mm，常用来装含糖培养基及其他生化培养基等；l0mm75mm，常用作
2、血清学试验，如凝集试验或凝集抑制试验等。（2）培养皿：培养皿常用作细菌培养、药敏试验和采集病理标本用。以直径 9cm 大小的较常用。（3）载玻片及盖玻片： 以薄质、光边、无色的为佳，盖玻片有不同的大小，但其厚度应在 0.17mm 以下。如经多次洗涤后玻片表面出现划痕，则应弃去。另需数张凹玻片，以制作悬滴标本用。（4）量筒：共量取各种液体使用。其容量有：10、25、50、100、200、250、500、l 000、2 000ml 等各种规格。（5）烧杯：供加热或煮沸各种液体用。其容量有：100、250、500、1 000ml 等各种规格。（6）三角烧瓶：供加热、煮沸、贮存、消毒各种液体用。其容量
3、有：100、250、500、l 000、2 000ml等各种规格。（7）离心管：常用的有 10、15、20ml 三种，其上有刻度，专供离心机使用。（8）玻璃管：管壁厚 l1.5mm，直径 6l0mm。常作液体、气体导管用，或拉制毛细吸管。（9）玻璃吸管：用来吸取和转移液体，常用的有两种。一种为自己拉制的毛细吸管；另一种为有刻度的吸管，常用的有 0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0ml 等数种规格。（10）玻璃棒：第一章 常用生物检测试剂的准备- 2 -玻璃棒直径有 0.5、0.8、1.0mm 三种，用来搅拌液体，或作标本支架用。（11）玻璃珠：用硬质中性玻璃制成，直径有 34mm
4、和 56mm 两种规格。用于血液脱纤维蛋白或打碎组织或菌落。（12）染色缸：有方形和圆形两种。方形的较大，可容 l0 张载片；圆形的较小，可容 5 张载片。供血液、细菌涂片及病理切片染色之用。（13）玻璃缸玻：璃缸内常盛石炭酸或甲醛之类的消毒剂，以备暂时放置使用过的涂片、吸管、培养基等。以杀灭病原微生物。（14）滴瓶：滴瓶容量有 30ml 和 60ml 两种规格，有无色和棕色两类。供贮存试剂、染色液使用。（15）玻璃漏斗：玻璃漏斗有短颈和长颈两种。漏斗口直径有 60、100 和 150mm 的不同规格。供分装液体或垫上滤纸或纱布作过滤杂质用。（16）广口瓶：广口瓶供盛装蒸馏水或其他液体用。有
5、5 000、10 000、15 000、25 000ml 几种不同规格。（17）下口瓶： 供盛装蒸馏水或消毒液用。有无龙头和有龙头两种，容量有 2 500、5 000ml 两种规格。（18）酒精灯：供细菌检验时固定涂片、烧灼白金耳等用。常用的酒精灯容量有 150 和 250ml 的两种。（19）研钵：研钵有瓷质、玻璃质两种，其直径有 10、16、24cm 三种不同规格。供研磨块状、粒状固体药物或染料等，又作组织材料的研磨。（20）注射器：供鸡胚接种、采血、给动物注射药物用。应备有 1、2、5、10、20ml 不同规格的一次性或玻璃注射器。（21）微量滴定板(96 孔血清反应板)：有“V”型和“
6、u”型两种，供 HA、HI 试验等使用。（22）酶标软板：由聚苯乙烯薄片模压而成，有 410 孔，孔型呈“U”形，供间接凝集试验、EIISA 等试验用。（23）微量移液器：供间接凝集试验、HA、HI 试验等使用。第一章 常用生物检测试剂的准备- 3 -（24）多功能电炉：温度可调，供加热溶液用。（25）接种环：接种环又称铂耳或白金耳，为细菌学检验工作中接种、分离细菌或挑取菌落制作涂片，所必不可少的工具。白金耳常装于铝质的握柄上，用坏后可随时更换。（26）层析柱：生产层析柱的厂商很多，其型号也各不相同，仅就上海精科实业有限公司生产的 z型系列层析柱介绍如下，该系列有 Z-10、Z-16、Z-26
7、、Z-35、Z-55、Z-70 和 Z-95 型七种。其数字为内径(mm)，它们有不同的长度，可根据需要购买，当处理的样品量不大，可购买内径较细，较短的；反之可购买内径较粗，较长的。1.1.2 玻璃器皿的清洁和消毒方法玻璃器皿的清洁和消毒方法（1）新购玻璃器皿的清洁：新购玻璃器皿含有游离的碱性物质，应先将其浸于 12的盐酸中过夜，然后用清水充分冲洗干净，干燥后灭菌备用。 （2）沾染有病原微生物玻璃器皿的清洁：沾染有病原微生物的玻璃器皿，应先在瑞达消毒中浸泡消毒后或经高压灭菌后，才能进行洗涤。灭菌后的玻璃器皿应立即浸入水中或洗衣粉水中进行洗涤；然后，再用温热的清水洗刷两遍，蒸馏水冲洗，干燥后灭菌
8、备用。（3）用过的载片、盖片的清洁：用后可浸泡于 1新洁尔灭或瑞达消毒液中，经数日后用温热的清水洗涤。用蒸馏水冲洗，放入 75酒精中，然后以丝绸或软棉布擦拭干净备用。（4）用过的各种吸管的清洁：用过的各种吸管应随时用清水冲洗。沾有病原体的吸管应在消毒液中反复抽吸数次后，浸泡于消毒液中消毒。取出后以清水冲洗数遍，再以蒸馏水冲洗两次。如吸管内还有污垢未能洗净，可在细铁丝尖端缠少许脱脂棉伸人管内清除之。 （5）较难洗玻璃器皿的清洁：玻璃器皿有时会有云翳、污垢，经过洗涤仍然洗不掉，或用于精细试验的玻璃器皿可用浸酸（清洁液浸泡）的方法除去。浸酸是将玻璃器皿浸泡到清洁液，又称酸液（表-1-1）中，通过清洁
9、液的强氧化作用清除器皿表面可能残留的物质。根据清洁液含硫酸比例，将清洁液分为强酸、次强酸和弱酸三种。根据需要配制、选用不同的清洁液。清洁液对玻璃无腐蚀作用，去污效果很好，是保证器皿洁净的关键一环。一般来说，新的或用过的玻璃器皿都应浸酸，那些无法用毛刷刷洗的用品（如吸管、滴管等）更要靠浸酸去除污物。浸酸时，器皿应完全被清洁液充满和覆盖。浸酸时间不能少于 6 小时，一般要过夜或更长时间。将器皿放入清洁液时，应小心操作，防止伤及皮肤、眼睛或衣服。从清洁液中取出器皿时，应沥干清洁液，并将浸酸的器皿放入合适容器，如塑料盆中运输。第一章 常用生物检测试剂的准备- 4 -表表 1-1 清清洁洁液配方液配方配
10、方成分常用方弱 液次强液强液重铬酸钾（g）清水（ml）浓硫酸(ml)硫酸浓度（v/v）10080020020%501000908%100100016014%6020080080%配制清洁时，操作者必须小心认真，戴耐酸手套和防护眼镜，并严格按下列方法进行： 选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。 按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中。 （用玻棒搅拌助溶，有时不能完全溶解） 。 缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险（绝不可将重铬酸钾液倒入浓硫酸中） 。 自然冷却、备用。新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下） ，配制新
11、的。配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品；目前实验室都定做一种专用耐酸塑料容器。洗涤时，将较难洗玻璃器皿放入清洁液中浸泡 24h 以上，取出后应用自来水反复冲洗，以彻底冲去清洁液。冲净清洁液后，用清水再洗两次，最后用蒸馏水冲洗干净。如用清洁液尚不可洗净者，则此种玻璃器皿不适于实验室使用。清洁液的腐蚀性极大，使用时应注意对衣服、皮肤的灼伤及金属器械的腐蚀。以水冲洗清洁液浸泡过的玻璃器皿时，应戴橡皮手套、围上橡皮围裙。清洁液可重复使用，直至其颜色淡黄色变为蓝绿色或黑色为止。3.510磷酸三钠 (Na3PO412H2O)溶液 可洗去油污。4.510乙二
12、胺四乙酸二钠 (EDTA-Na2)溶液加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色附着物。尿素洗涤液： 为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛蛋白质制及血液样品的玻璃器皿。1.1.3 玻璃器皿的灭菌方法玻璃器皿的灭菌方法试管、三角烧瓶等在灭菌前应加棉塞，瓶口的外面包上一层牛皮纸，并用线绳扎好；其他玻璃器皿洗净后，用牛皮纸或旧报纸包裹后，放置于干热灭菌箱内干热灭菌，备用。第一章 常用生物检测试剂的准备- 5 -1.2 试剂的质量标准与溶液的浓度试剂的质量标准与溶液的浓度1.2.1、试剂的质量标准、试剂的质量标准试剂的纯度对试验结果有很大的影响，试剂中的微量不纯物质，有时足以使试验失败。因此，应根据试验的目的，选择
13、纯度不同的试剂。试剂的纯度按其所含杂质的量，可分为以下五种。（1）优级纯(保证试剂 G.R.)：又称一级试剂，是含有杂质极少的试剂。适合于最精确分析及研究工作用，由于其价格较高，除明确指出需用此种试剂外，一般不选用此级别的试剂。（2）分析纯(A.R.)：又称二级试剂，纯度较高，适用于精细分析，用于配制标准溶液，为实验室中常用的试剂。（3）化学纯(C.P.)：又称三级试剂，其纯度不如分析纯，适用于一般的定性、定量分析。（4）试验试剂(L.R.)：又称四级试剂，杂质含量较多，一般不用于分析试验，染色剂和指示剂多属此类。（5）工业用：杂质较多，在实验室主要用来做洗涤剂、干燥剂等。如清洁液中的工业硫酸
14、、重铬酸钾、干燥剂氯化钙等。选择药品等级，必须根据所配制试剂的标准要求进行。为保证试验的质量，不应降低试剂等级；但也不要盲目的使用等级较高的试剂，以免造成不必要的浪费。1.2.2、溶液浓度的表示方法、溶液浓度的表示方法国家规定，对化学结构和分子量尚不十分清楚的物质，可暂时用 g/L 的浓度表示；对化学结构和分子量已经清楚的物质必须用摩尔每升(molL)来表示。但是，目前在文献中常有一些不十分规范的表示方法为人们所使用。（1）百分浓度为每百分浓度为每 100 份溶液中所含溶质或溶液的量，可以用重量或体积表示。份溶液中所含溶质或溶液的量，可以用重量或体积表示。溶液的百分浓度，一般可用下列三种方式来
15、表示： 重量-重量百分浓度。以 ww 表示，是指 100.0g 溶液中所含有溶质的克数。例如，98硫酸溶液，其中含硫酸 98.0g，水 2.0g。 重量-体积百分浓度。以 wV 表示，是指 l00.0ml 溶液中所含有溶质的克数。一般配制溶质为固体的溶液，即用此法来表示。如经常使用的生理盐水，就是在 100.0ml 溶液中含有氯化钠 0.9g。 体积-体积百分浓度。以 VV 表示，是指 100.0ml 溶液中所含有溶质的毫升数。一般配制溶质为液体的溶液，即用此法来表示。如 75酒精溶液，就是在 100.0ml 酒精溶液中含有纯酒精 75.0ml，水 25.0ml。（2）质量一体积浓度：）质量一
16、体积浓度：第一章 常用生物检测试剂的准备- 6 -以 g/L 表示，是指 1 000.0ml 溶液中所含溶质的克数。这种表示方法在动物医学上，常用于化学结构式和分子量尚不清楚，尚无法用物质的量的浓度单位来表示的物质，如一些酶和蛋白质。（3）物质的量浓度）物质的量浓度(molL)：即在 1L 溶液中所含溶质的量，又称为摩尔浓度(molL)，l 摩尔等于 6.0221023个结构粒子的质量。化学上的结构粒子泛指原子、分子、离子等。物质的量浓度(摩尔浓度)表示方法为：molL=溶质的摩尔数（n）/溶液的体积若以 V 表示溶液的体积(L)，则摩尔的数量为： n = mol.V 摩尔数乘以体积怎么又等于摩尔数,不对溶液摩尔浓度与溶质重量的关系即可由下式算出：mol.v=w/Gm 或 w=mol.v. Gm其中 Gm 可查表(原子量、分子量等表)获得，所配溶液的摩尔数(mo1)及数量(v)确定后，即可算出所需溶质的数量(w)。例如：现需要配制 0.1molL 的氯化钠溶液 500.0ml，
