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1、1田七颗粒质量标准研究【摘要】 目的 建立田七颗粒的质量标准。方法 采用 TLC 法对处方中的三七进行定性鉴别,用 HPLC 法对制剂中人参皂苷 Rg1 与三七皂苷 R1 进行定量测定。结果 在 TLC 鉴别中能检出三七,人参皂苷 Rg1 在 0.6285.652 g(r0.999 8)、三七皂苷 R1 在 0.1551.395 g(r0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为 99.24%(RSD0.84%)和 99.14%(RSD1.13%)。结论 本方法操作简便,准确,重复性好,精密度高,可作为该制剂的质量控制方法。 【关键词】 田七颗粒；薄层色谱法；人参皂苷 Rg1；三七
2、皂苷 R1；高效液相色谱法Abstract：Objective To establish the quality standard for Tianqi Granule. Methods Radix Notoginseng in Tianqi Granule was identified by TLC. The ginsenoside Rg1 and notoginsenoide R1 in Tianqi were determined by HPLC. Result Radix Notoginseng could be identified by TLC. The linear ranges
3、 of ginsenoside Rg1 and notoginsenoide R1 were at 0.6285.652 g (r0.999 8) and 0.1551.395 g (r0.999 8), respectively. The average recoveries were 99.24% (RSD0.84%) and 99.14% (RSD1.13%). Conclusion The method is simple, accurate and with good reproducibility and high precision, and can be used for qu
4、ality control of Tianqi Granule.Key words：Tianqi Granule；TLC；ginsenoside Rg1；notoginsenoide R1；HPLC田七颗粒主要以三七为原料加工制成,具有活血定痛、祛瘀生新的作用。三七主要含人参皂苷 Rb1、Rg1、Re 和三七皂苷 R1 等 20 余种皂苷成分,其中人参皂苷 Rb1、Rg1 和三七皂苷 R1 是含量最高的 3 个成分,三七皂苷 R1 又是三七的特征性成分1。本试验对制剂的质量标准进行了研究,用 TLC 法对处方中的三七进行了定性鉴别,并采用 HPLC 法测定田七颗粒中人参皂苷 Rg1 和三七皂苷
5、 R1 的含量,方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的质量控制方法。1 仪器与试药2Agilent1100 系列高效液相色谱仪：G1311A 四元泵,G1313A 自动进样器,G1379A脱气机,G1314VWD 检测器,Agilent1100 化学工作站；UV-2201 型紫外-可见分光光度仪。田七颗粒,广西玉林制药有限责任公司生产；人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 对照品(供含量测定用,批号：人参皂苷 Rg1 为 0703-9914、0703-9813,三七皂苷 R1 为0745-200109),均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。2 定性鉴别取本品
6、 2 g,研细,加甲醇 20 mL,超声处理 30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 2 mL 使溶解,作为供试品溶液。另取缺三七的阴性对照品 2 g,同法制成阴性对照品溶液。再取人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 对照品,分别加甲醇制成每 1 mL 含 1 mg 的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法2005 年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验,吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液各 2 L,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(415)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与人
7、参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 对照品相应的位置上,显红色的斑点,而阴性对照液无相应斑点。3 含量测定3.1 色谱条件3Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱(4.6 mm250 mm,5 m),流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(1882)；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ；进样量：10 L。理论塔板数按三七皂苷 R1 计算应不低于 3 000。3.2 对照品溶液的制备分别精密称取人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 对照品适量,加甲醇制成每 1 mL 含人参皂苷 Rg1 0.396 mg 和三七皂苷 R1 0.092 mg 的
8、混合溶液,摇匀,即得。3.3 供试品溶液的制备取本品适量,研细,取约 1.2 g,精密称定,加水适量使溶解并转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取 3 次,每次 20 mL,合并正丁醇萃取液,加氨试液洗涤 2 次,每次20 mL,弃去氨试液,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并移入 10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用 0.45 m 滤膜滤过,作为供试品溶液。3.4 空白试验按处方及制备工艺制备不含三七药材的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备并测定。按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各 10 L,分别注入色谱仪,进行测定。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上
9、,分别有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照在此保留时间无干扰(见图 1)。因此,可在此系统条件下对人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 进行定量分析。3.5 线性关系的考察 4精密称取人参皂苷 Rg1 对照品 31.4 mg,置 50 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为人参皂苷 Rg1 对照品贮备液(0.628 mg/mL)。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为 0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL 的溶液。分别精密吸取 10 L,注入
10、液相色谱仪,记录峰面积。以人参皂苷 Rg1 对照品进样量(g)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y209.713X0.260,r0.999 8,人参皂苷 Rg1 在 0.6285.652 g 范围内呈良好的线性关系。精密称取三七皂苷 R1 对照品 7.75 mg,置 50 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为三七皂苷 R1 对照品贮备液(0.155 mg/mL)。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为 0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.1
11、39 5 mg/mL 的溶液。分别精密吸取 10 L,注入液相色谱仪,记录峰面积。以三七皂苷 R1 对照品进样量(g)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y208.065X2.85,r0.999 8,三七皂苷 R1 在 0.1551.395 g 范围内呈良好的线性关系。 3.6 精密度试验取对照品溶液,重复进样 6 次,测定峰面积,人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 的 RSD分别为 0.56%和 0.69%,表明精密度良好。3.7 重复性试验取同一批号(030102)的田七颗粒,共 6 份,按“3.3”项制备,进样,测定峰面积,人参皂苷 Rg1 平均含量为 3.708 mg/
12、g, RSD1.01%；三七皂苷 R1 平均含量为 0.698 mg/g,RSD0.92%。53.8 稳定性考察精密吸取同一供试品溶液,分别于制备后 12 h 内每隔 2 h 进样 1 次,测定峰面积,人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 的 RSD 分别为 1.52%和 1.47%,表明样品溶液在 12 h 基本稳定。3.9 加样回收率测定取已知含量的样品(人参皂苷 Rg1 含量 3.708 mg/g 和三七皂苷 R1 含量 0.698 mg/g)6 份,精密称定,分别精密加入人参皂苷 Rg1 对照品贮备液 4.5 mL 和三七皂苷 R1 对照品贮备液 3.5 mL,挥干甲醇后,按供试品溶液的
13、制备方法制备,根据上面色谱条件测定峰面积,计算回收率,结果见表 1、表 2。 表 1 人参皂苷 Rg1 加样回收率试验结果（略）表 2 三七皂苷 R1 加样回收率试验结果（略）3.10 样品测定分别精密吸取 10 L 对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件,注入色谱仪,测定,结果见表 3。表 3 样品测定结果（略）4 讨论在定性鉴别项下,曾选用氯仿-甲醇-水(653510) 10 以下的下层液作为展开剂,但其相对湿度应控制在 50%左右,湿度过高容易使斑点变形移位,所以选用了本试验的正丁醇-乙酸乙酯-水(415)的上层溶液为展开剂。在含量测定项下,供试品溶液制备中还比较了另外的提取方法：乙醚脱脂和超声提取,结果比本文的含量稍低,所以选择了本试验的提取方法。参考文献2,采用乙腈-0.05%磷酸溶液(2377),人6参皂苷 Rg1 与三七皂苷 R1 分离好,但人参皂苷 Rg1 与其右侧干扰峰分不开,调整乙腈-0.05%磷酸溶液比例为(1882)时,人参皂苷 Rg1 峰形好,跟干扰峰能达到很好的分离效果。【参考文献】1 饶高雄,王兴文.三七皂甙的检测与分析方法J.云南中医学院学报, 2001,24(3)：4.2 冯毅凡,孟 青,梁汉明.田七痛经胶囊质量标准研究J.中成药, 2005,27(10)：1146.
