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1、1IL-1ra 及地塞米松对 IL-1 诱导的人 RPE 增生的抑制作者：庞旭 惠延年 王雨生 彭秀军 【摘要】 目的：观察 IL-1ra 及地塞米松对 IL-1 诱导的 RPE 增生的抑制作用。 方法：通过 MTT 比色实验观察 IL-1ra 及地塞米松对 IL-1 促 RPE 增生的抑制作用。 结果：IL-1ra(20200g/L)对加入 IL-1(2g/L )培养的人 RPE 增生有明显的抑制作用,抑制率为 9.4%24.5% （P 0.05）；地塞米松在低浓度(10mg/L)时刺激 RPE 增生，而在高浓度(3570mg/L)则表现为对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制作用，抑制率为
2、 31.2%43.9%（P 0.05）；IL-1ra（100g/L ）联合地塞米松（35mg/L）对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制率 40.6%，较两者单独使用的抑制率均高（P 0.05）。 结论：IL-1 能促进培养的人 RPE 的增生，而 IL-1ra 及地塞米松可以抑制这种促增生作用。 【关键词】 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 细胞培养 IL-1；IL-1ra 地塞米松 药物治疗Inhibition of IL-1ra and dexamethasone of retinal pigment epithelial cell growth stimulated by I
3、L-1Abstract AIM: To observe the inhibition of IL-1ra and dexamethasone (DX) of retinal pigment epithelial cell (RPE) growth stimulated by IL-1. METHODS: The inhibitions of IL-1ra and DX of RPE stimulated by IL-1 were examined by tetrazolium salt (MTT) assay.RESULTS: IL-1ra (20-200g/L) inhibited 9.4%
4、-24.5% of RPE growth in cultures with IL-1 (P0.05). DX (35-70mg/L) inhibited 31.2%-43.9% of RPE growth in cultures with IL-1 (P0.05), but increased proliferation of RPE at the dose of 10mg/L. DX (35mg/L) combined with IL-1ra (100g/L) inhibited the cell growth up to 40.6% in cultures with IL-1 (P0.05
5、). CONCLUSION: IL-1ra and 2DX can inhibit RPE growth stimulated by IL-1, which may suggest a new approach to prevention and treatment of PVR. KEYWORDS: proliferative vitreoretinopathy ; retinal pigment epithelial cell; cell culture; IL-1; IL-1ra; DX; drug synergism0 引言增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitre
6、oretinopathy，PVR）的本质是机体对损伤的过度修复反应，是与炎症与免疫相关的以时相的程序化过程。视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cell，RPE）是 PVR 的主要细胞成分，其分泌的IL-1，IL-6，IL-8 等炎前因子在 PVR 的形成发展中起重要作用1,2。既往研究发现，IL-1 能上调 RPE 细胞分泌波形蛋白的表达3，其含量在实验性 PVR 玻璃体内的含量随病程明显增加4，均提示 IL-1 在 PVR 发病中有重要作用，因而寻找有效抑制 IL-1 诱导的 RPE 增生药物具有重要的临床意义。我们采用 MTT 法观察 IL-1 受体
7、拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagonist, IL-1ra)和地塞米松(dexamethasone, DX)对 IL-1 诱导的人 RPE 增生的抑制作用，以期为临床应用提供依据。1 材料和方法1.1 材料 第四军医大学西京医院提供第四代 RPE 作为实验细胞，收集单层细胞接种于 96 孔培养板中，接种密度为 2103 细胞/孔，常规培养 24h 换无血清DMEM。1.2 方法 实验组加入 IL-1（2g/L ），分别加入不同浓度的 IL-1ra（20200g/L ），地塞米松（1070mg/L）及联合用药（IL-1ra100g/L，地塞米松 35mg/L）。对
8、照组单加 IL-1（2g/L ）及等量 DMEM。空白组不加 IL-1 及处理因素，仅加等量DMEM。培养 48h 后每孔加入 5g/L MTT 溶液 20L，继续培养 4h，弃上清，每孔3加入 DMSO150L，振荡 10min，在酶联免疫仪 490nm 波长测 A 值。结果以 A 值及细胞抑制率（A 对-A 实）/A 对表示并绘图。每个浓度点设 4 个复孔，重复 4 次。2 结果以加入 IL-1（2g/L ）的第 1 组为对照组，IL-1ra（20200g/L ）对加入 IL-1（2g/L ）培养的人 RPE 增生有明显的抑制作用,抑制率为 9.4%24.5%，证明这一浓度范围的 IL-1
9、ra 能够抑制 IL-1 对 RPE 增生的刺激作用（P 0.05）。地塞米松在低浓度（10mg/L）时刺激 RPE 增生（增殖率 6.2%），而在高浓度（3570mg/L）则表现为对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制作用，抑制率为31.2%43.9%（P 0.05）。IL-1ra（100g/L ）联合地塞米松（35mg/L）用药组分别与两者单独用药组比较，有显著性差异。联合用药组对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制率（40.6%）较两者单独使用的抑制率（12.5%；31.2%）均高（P 0.05）。倒置显微镜下观察细胞近似成纤维细胞样，实验组形态与对照组比较未见明显异常，细胞数量减少。
10、3 讨论免疫组织化学研究证实，眼内参与 PVR 形成的细胞主要有 RPE，成纤维细胞，神经胶质细胞，巨噬细胞等。当有眼外伤，视网膜裂孔存在时，这些细胞从正常位置进入玻璃体内及视网膜表面进行增殖收缩形成 PVR5。既往研究发现 IL-1 能上调 RPE 细胞分泌波形蛋白的表达，其含量在实验性 PVR 玻璃体内的含量随病程明显增加，均提示 IL-1 在 PVR 发病中有重要作用。IL-1ra 是一种在与 IL-1R结合过程中的 IL-1 竞争性抑制物，与受体结合后，本身并无激活作用，可以消除或减轻 IL-1 的生物活性从而影响机体的病理生理现象。由于 IL-1ra 可以与 IL-1竞争 IL-1R
11、，减轻 IL-1 引起的一系列生理和病理反应，IL-1ra 在实验中被用来阻4断 IL-1 的作用。宋宗明等6应用 IL-1ra 能够明显抑制 IL-1 诱导的体外培养的RPE 细胞分泌 IL-6 和 IL-8 的作用，而应用 IL-1ra 也可以降低兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的发生率7。我们观察 IL-1ra 对 IL-1 诱导的 RPE 增生的影响，发现 IL-1ra（20200g/L ）对加入 IL-1（2g/L ）培养的人 RPE 增生有明显的抑制作用,抑制率为 9.4%24.5%，证明这一浓度范围的 IL-1ra 能够抑制 IL-1 对RPE 增生的刺激作用（P0.05）。外源性
12、 IL-1ra 的剂量，给药时机等方面还需要进一步研究，其对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制率有可能进一步提高。地塞米松是一种高效，短效糖皮质激素，既往研究中被用为治疗 PVR 的辅助用药。惠延年等8在对 PVR 患者行玻璃体手术时应用地塞米松行眼内灌注治疗（20mg/L），取得良好效果。本实验中，地塞米松在高浓度（3570mg/L）表现为对 IL-1 诱导 RPE增殖的抑制作用，抑制率为 31.2%43.9%（P0.05），倒置显微镜下观察细胞形态正常。推测地塞米松除可通过抑制有丝分裂直接抑制细胞增殖外，尚可通过抑制效应蛋白的合成阻断 RPE 释放的某些因子对细胞增生的刺激作用，也可抑制
13、IL-1 细胞增生的刺激作用。IL-1ra（100g/L ）联合地塞米松（35mg/L）对 IL-1 诱导 RPE 增生的抑制率较两者单独使用的抑制率均高（P0.05）。说明两者作用机制不同，在抑制 RPE 增生过程中有协同作用。大剂量的皮质类固醇能抑制细胞的有丝分裂，可能对眼组织无毒性，但在全身可能引起各种不良反应。IL-1ra 是一种自然存在的拮抗剂，体内副作用很小，联合应用 IL-1ra 和地塞米松能减少皮质激素用量，可能达到更好的抑制细胞增生及防治由此引起的并发症的效果。由于细胞增生调控的网络机制，中和一种因子的效果可能很小。但如果作用于关键性因子，可能会显示出效果。尤其 IL-1 在
14、启动炎症反应的网络系统中是关键性因子，对 PVR 的发生有明显的诱5发作用，早期应用其受体拮抗剂将来可能成为预防 PVR 的良好手段。【参考文献】1 刘兵,马吉献,惠延年.IL-1 和 TNF- 对体外培养的人 RPE 细胞 FasL 蛋白及mRNA 表达的影响.国际眼科杂志,2005;5(5):916-9182 龚凌,姜德咏.姜黄素对 IL-1 诱导视网膜色素上皮细胞分泌 IL-8 和 sICAM-1 的影响.国际眼科杂志,2006;6(5):1300-13013 刘兵,黄慰,惠延年. IL-1 和 TNF- 对体外培养的人视网膜色素上皮细胞波形蛋白表达的影响.眼科研究,2004;22(4)
15、:393-3944 冯学峰,惠延年,石一宁. IL-1 在实施性增生性玻璃体视网膜病变胶原沉积中的作用.眼科新进展,2003;23(1):5-75 Fastenberg DM, Diddie KR, Dyan SJ. The role of cellular proliferation in an experimental model of massive periretinal proliferation. Am J Ophthalmol ,1982;93(5):565-5726 宋宗明,惠延年,瞿佳,王雨生,马吉献.白介素 1 受体拮抗剂抑制视网膜色素上皮细胞炎前因子的表达.中华眼底病杂志,2002;18(1):49-517 宋宗明,沈丽君,付晓莹,刘晓强,瞿佳,惠延年.白介素 1 受体拮抗剂对兔实施性增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用.眼视光学杂志,2003;5(2):82-858 惠延年,梁厚成,胡丹,王琳,周健.玻璃体手术与地塞米松眼内灌注治疗增殖性玻璃体视网膜病变.第四军医大学学报,1996;17(5):387-388
