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1、南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文一瘦塞丞瘦塞受堡在应癌堑塑生塞达煎珏究是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：迎边园自作者签名：全堡霆日期：乒盆。：聒论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：金鱼! 霞导师签名：扯
2、魄趔南京医科大学硕士学位论文瘦素及瘦素受体在肺癌组织中表达的研究中文摘要目的研究瘦素( L e p t i n ) 和瘦素受体( O B R ) 在肺癌组织中表达的特点。方法采用免疫组化染色方法检测6 0 例肺癌组织及3 0 例肺良性病变组织中瘦素和瘦素受体的表达，并比较瘦素及其受体在这两种不同病变中表达的差异，分析二者在肺癌组织中的表达与肺癌临床病理组织学分类之间的关系。结果在3 0 例肺良性病变标本中，瘦素及瘦素受体的表达率分别为3 3 3 ( 1 0 3 0 ) 和3 0 o ( 9 3 0 ) 。在6 0 例肺癌组织标本中，瘦素和瘦素受体的表达率分别为7 3 3 ( 4 4 6 0 )
3、 和7 1 7 ( 4 3 6 0 ) 。瘦素及其受体在肺癌组织中的表达高于二者在肺良性病变中的表达，其差异具有统计学意义( P 0 0 5 ) ，而在不同程度淋巴结转移和T N M 分期之间其表达的差异有统计学意义( P O 0 5 ) A n dt h ed i f f e r e n c e sa m o n gl y m p hn o d em e t a b a s i sa n dT M Ns t a g i n gw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 5 0 2 胞着黄色；阴性结果为细胞不着色或 0 0
4、 5 ) ；而在淋巴结转移和T N M 分期之间其分别表达的差异有统计学意义( P 6 0 岁性别男 女肿瘤体积 直径_ 5 c m2 23 85 01 03 72 3组织学分型 鳞癌2 8 腺癌2 6 未分化癌( 小细6 癌和大细胞癌)淋巴结转移 N O N 1 N 2临床分型I m a2 02 31 71 6 2 12 31 82 63 862 71 72 02 041 91 51 01 61 51 38 1 86 8 40 3 6 77 6 06 0 00 4 3 37 3 O7 3 90 9 3 67 1 47 6 96 6 70 7 6 69 5 06 5 25 8 80 0 1 5
5、1 0 07 1 45 6 50 0 0 51 82 53 762 71 61 92 l32 01 4 91 51 61 28 1 86 5 80 2 4 17 4 06 0 00 4 4 87 3 O6 9 60 7 7 66 7 98 0 85 0 O0 2 6 71 0 06 0 95 2 90 0 0 19 3 87 6 25 2 20 0 1 51 4南京医科大学硕士学位论文图1 瘦素在肺腺癌中的阳性表达，胞浆内有棕黄色的颗粒( S P x 2 0 0 )图2 瘦素在小细胞肺癌中的阳性表达，胞浆内有棕黄色颗粒( S P x 2 0 0 )1 5南京医科大学硕士学位论文图3 瘦素受体在
6、肺鳞癌中的阳性表达( S P x 2 0 0 )胞浆内有棕黄色的颗粒图4 瘦素受体在肺腺癌中的阳性表达，胞浆内有棕黄色颗粒( S P x 2 0 0 )1 6南京医科大学硕士学位论文 一一图5 瘦素在肺腺癌中的阴性表达，细胞未着色( S P x 2 0 0 )图6 瘦素受体在肺炎性假瘤中的阴性表达，细胞未着色( S P x 2 0 0 )1 7南京医科大学硕士学位论文讨论一瘦素蛋白分布和功能瘦素( 1 e p t i n ) 是由肥胖( o b ) 基因( 位于人类染色体7 q 3 2 ) 所编码的一种由1 6 7 个氨基酸组成的分泌型蛋白质【1 5 】。在分泌入血的过程中，N 末端的2 1
7、个氨基酸的信号肽被去除，形成成熟的瘦素。成熟的瘦素含1 4 6 个氨基酸，分子量为1 60 0 0 。瘦素具有强亲水性，以单体形式存在于血浆中。早期研究认为，瘦素主要由白色脂肪细胞分泌，在血液中含量与体重指数及总的体脂储备相关，但后来研究显示，其他的细胞，如胃黏膜细胞、骨骼肌细胞、骨髓间充质细胞、垂体细胞以及原代培养的成骨细胞也能够合成牙口分泌大量的瘦素蛋白【1 6 1 。瘦素作为一种抗甾体肽，参与脂类代谢的调控，还可通过下丘脑中枢激活交感神经系统，减少食物摄取，增加能量消耗，影响进食行为。瘦素还与下丘脑垂体肾上腺轴相互作用，影响性成熟，在生殖系统发育过程中发挥重要作用【1 7 1 瘦素对心血
8、管系统疾病，如高血压、冠心病、心功能不全等之间有关联【1 8 1 后来的研究表明，瘦素可以影响胚胎发育、性功能、泌乳、促红细胞生成和免疫应答。另外，有研究认为，o b o b 卅、鼠创伤延迟部分原因是缺乏瘦素，从而延缓了皮肤修复过程中的再上皮化，在体内瘦素还可以明显促进o b - o b 小鼠切割伤的再上皮化，影响创伤愈合和组织修复【1 9 1 最近的研究提示瘦素可以干扰多肽生长因子和甾体激素受体功能。二瘦素受体结构和功能瘦素通过与瘦素受体( O B R ) 特异性结合而发挥生理功能。O B R南京医科大学硕士学位论文由d b 基因( 位于人类染色体l p 3 1 ) 编码，该基因突变能够引起
9、早发性的肥胖。糖尿病型d b - d b 小鼠细胞只表达短型的受体亚型，且不能被激活，因此可导致肥胖和糖尿病的发生在人类细胞中O B R 基因的突变很罕见。O B R 属于I 类细胞因子受体家族的成员，在N 端含有一个典型的细胞因子受体同源结构域：四个特征性的半胱氨酸残基，数量不等的m 型纤连蛋白区域，C 端含有一个W S X W S 基序1 2 0 小鼠O B R 包括一个高度保守的脯氨酸富集的B o x l ( f i 立- i f - g , 6 1 7 位氨基酸)和两个半开放的B o x 2 基序( 位于第4 9 6 0 和2 0 2 2 1 3 位氨基酸) 。B o x l和B o
10、x 2 基序是J A K s 的结合位点，然而也有研究表明只有B o x l 和近细胞膜的氨基酸序列对于J A K s 的激活是必需的阱1 。尽管B o x 2 亚基对于J A K 激酶的激活不起作用，但如果没有B o x 2 亚基，中枢神经系统细胞内S T A T s 信号通路就不能被诱导。瘦素受体在下丘脑、脉络丛、脂肪细胞、骨骼肌细胞、甲状腺滤泡上皮细胞、胰岛p 细胞、肾上腺皮质细胞、卵巢滤泡内膜细胞和睾丸问质细胞等均有表达。目前已知的瘦素受体有a 、b 、c 、d 、e 和f 六种异构体，目前研究较多的为a 、b 、c 三种类型。前四个亚型具有跨膜及胞质区域，不同亚型O B R 的胞质区
11、域的长度各不相同。b 型作为一种长型受体，包含由3 0 1 个氨基酸组成的胞质区域，主要由下丘脑细胞表达，在许多组织中位于创伤边缘的角质形成细胞，成骨细胞、子宫内膜、胎盘和脐带也有该受体的表达【2 2 】。然而短型O B R 包括O B R a 、O B R e 和O B R d ，它们的胞质区域则分别由3 4 、3 2 、4 0 个氨基酸组成。短型受体只含有B o x l 基序，能够与J A K s 相结合，激活下南京医科大学硕士学位论文游信号传递，主要功能可能与瘦素蛋白的清除或受体介导的转运有关。第5 个受体亚型( O B R e ) 则缺乏跨膜和胞质部分，是一种可溶性受体。可溶的瘦素受体
12、在血液中能以较高的亲和力与瘦素相结合，在调控血浆中游离瘦素水平及其激活方面发挥重要作用。在肥胖个体体内，可溶性受体含量较少，而在消瘦个体中该受体水平则明显升高伫3 1 。目前对O B R f 的研究甚少三瘦素、瘦素受体与肺癌最近的研究发现，瘦素和瘦素受体在乳腺癌、子宫内膜癌、胃癌、结肠直肠癌等多种恶性肿瘤中分布，提示瘦素可能是肿瘤发生的重要因素之一M 肺癌是当前世界最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率由上升的趋势。已有不少研究表明瘦素在肺癌发病的免疫机制中起作用。吸烟人群的肺癌发病率较不吸烟人群高，吸烟是肺癌的一个危险因素【2 4 】已证实吸烟者肺的慢性炎症和肺功能下降有关【2 5 1 ，并
13、和肺癌的发病机理有关联【2 6 1 。瘦素在肺的生理和病理方面都起着作用不论是胎儿肺的发育，还是正常成人肺细胞的生理和病理增殖都有瘦素的参与 2 7 - 2 8 瘦素影响先天性免疫和获得性免疫。在先天性免疫方面，瘦素直接或间接通过提高白细胞趋化性和氧自由基产物来调节白细胞的活性和功能【2 9 】，提高单核细胞巨噬细胞的吞噬作用，并促进巨噬细胞的趋化性【3 0 】。S a n t o s A l v a r e s 等【3 l 】发现瘦素对外周血中T N F 和I L 6 有刺激作用，外周血这些细胞的增殖和激活是通过瘦素受体介导的。在获得性免疫方面，瘦素通过抑制细胞凋亡来影响胸腺T 细胞的增殖、
14、南京医科大学硕士学位论文成熟和存活t 3 2 1 。瘦素诱导幼稚T 细胞增殖，并向T H l 分化【3 3 1 。正常个体内维持着T H l T H 2 的平衡，但在炎症情况下，这个平衡被打破了。在非小细胞肺癌患者体内，外周血高T H l T H 2 比值提示着不良预后【3 4 1 目前，已有国内外的文献报道了肺癌病人的血浆瘦素水平变化与患者营养状态、体重之间的关系晚期非小细胞肺癌患者的血清瘦素水平下降【3 5 1 。有学者研究认为肺癌患者的厌食和恶病质不是由于瘦素失调引起，在体重下降患者，血清瘦素不升高，而是和炎症强度有关1 3 6 1 。而目前未见瘦素与肺癌组织之间关系的报导。本实验采用免
15、疫组织化学方法对6 0 例肺癌组织标本和3 0 例肺良性病变标本中L e p t i n 及其O B R 的表达进行了检测，目的是观察肺良性病变和肺恶性肿瘤组织标本中L e p t i n 及O B R 的表达是否存在差异，并初步研究L e p l f i n 及O B R 的表达在肺癌临床病理参数( 如患者年龄和性别、肿瘤的体积大小、组织学分型、淋巴结转移和T N M 分期) 之间是否有差异。实验结果显示肺癌组织中存在瘦素及其受体的高表达根据瘦素及其受体在淋巴结转移和T N M 分期中的表达特点，即无转移的比有转移的表达高，转移程度低的比转移程度高的表达高，并随T N M 分期的增高，L e
16、 p t i n 的表达随之降低，我们推测瘦素系统可能参与了肺癌的发生、发展过程。而瘦素是如何促进肺癌生长的? 早期的研究发现：瘦素能够导致培养的内皮细胞聚集、管型形成加速，与血管内皮生长因子( V E G F )作用相似【3 7 1 进一步研究认为：瘦素是一种促血管生成因子，可促进2 1南京医科大学硕士学位论文血管生成和增加血管通透l , 生 3 s l ，且其促血管形成的活性相“ - 3 于V E G F 3 9 1 。有学者研究发现体外用瘦素处理培养的牛视网膜周边细胞可上调V E G F 表达【4 0 】G o n z a l e z 等【4 1 峙艮道，瘦素能促进乳腺癌细胞增殖、V E G F 和V E G F 受体的表达。因此认为，瘦
