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1、第? ?卷第 期!#年!?月实验 生物学报%? 年首先注意到禾本科植物建立胚性细胞系用以制备原生质体进行培养的重要性,对 此已从不 少的例证中得到证实“;。然而如何提高胚性细 胞系的得率和缩短建立优质胚性细胞系 的时间就 成为进一步提高并赶上模 式植物的关键 步骤。八十年代国际上 在原生质体培养研究中提出了要探 索总结“困难植物”原生质体培养的经验,进一步提高并找出规律使整个过程“程 序化”:=? + %507;,。%507,#507=? ,暗 培养。!月后计 算愈伤 组织的诱导频率,再继代培养于各自相 同的培养基上。取第;次继代的 =;和 7培养基上部分愈伤 组织转接到7培养基上。在继代培养
2、第#次时观察不同处 理愈伤组织的细胞状态。二、胚性愚浮系的建立和原生质体的游离选取7培养基上的第?次继代、生长快、结构紧密的愈伤组织!一? ,置于 5? 5培养皿中加=5 一%七。+ 7)。(。):。(。)()。(。( (。(。(一)( ( ( (; ( ( ( ( (0。一。将形成的。?一:大小细胞团移到.培养基#表)上培养)周,挑选 出结构 紧 密的转到%,;一%时一可达 ; 。而矮龙 睛和( ); )对),;一% ,愈 伤 组织 坚 密,分化根 毛在),;一%时,愈伤 组织 生长 快,有粘 液而松散,颜色趋向于 白色。对愈伤组织 的胚性,中间型,非胚性三种类 型的细胞进行比较,从 表;可
3、见,如果培养基中),;一;9裹1 +,=%;水摺不同处理的愈伤组织外观形态 ?,一8%6+ !一?单鉴! 胚性中间型非胚性?一;#一?一;? 一;#一?一; 一 # 一 一 ; 一 ;一 ;一 ? 一;矮龙晴? ?胚性中间型非胚性# 一;一 ?一;一 ;一 # 一;一 一;一 一#; 一 !一?多而 ? ? ?则以7培养基上愈 伤组织所含胚性细胞多。但 随着?,一8浓 度增加,三个品种 的胚性细 胞数量均减少。利 用胚性愈伤组织 游离原生质体要求分散度好,才能得到较好的分离效果。当?,一8浓度低 时,胚性和中间型细 胞虽占多数,但分 散度差,酶解脱壁游 离原生质体困难在?,一8浓度 高时,虽然
4、分散度好,但胚性细胞少,对于原生质体培养不利。由此,试验中采 用在初期诱发愈伤组织时适当提高?,一8浓度,在培养?一;代后,再转 到 低?,一8含量 的培养基 上培养。这样生长 的愈伤组织,不仅分散度好,细 胞生长快,而且胚性和中间型细 胞占绝大多数:表;,表5?5培养皿中进 行培养。几个品种 的原生质体活力均 在 左右:表#所示,原 生质 体悬浮液 的接 种量以#5 。?。!。?。!。?#。;。 ;来以?! 5密度培养于;?5培养皿中。水稻原 生质休 培养华:改良3 #5% 。均超过? 。个。带观察! 个以上视野,细胞总数超过? 个。吐期水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究裹?各品种水稻
5、的原生质体培养及分化 9#;完整植株“ 匕; ;石万一一一丁厂一一一落石一不藏舔厂一矮龙晴;、#?#完整植株苏御糯选_?;?。分化绿点迟红糯_?产“。 二未见分化_;。“!?。分化绿点丙# #一!? _;。?完整植株? ? ?; #完整植株垂红糯单鉴! ;。;。;#以上。将小苗转到无激素7。培养基上继 续培养到!?5大小:图版工,图+,= %/ +4 +6, ,%4 5% 6+,%64 +0+6+4,/%6%4/+ ;。;习= /5,60/一/6608/60一,/,! ? ,3?一;?=/一 。上海植物生理学会,!? #,植物生 理学实 验手册。! ;一? !,上海科学技术出版 社。!孙勇如、
6、安锡培,! !,植物原生质体培 养。 #一?,科学出版社。!陈 东方、夏镇澳,!?,从棒头幼穗培养 获得体细胞胚和再生植株。植物生理学报,!? : ?王凌健倪迪安宛新杉夏镇澳?卷图版说明图扳工3; 胚性细胞 悬浮系! ;3;胚性悬浮细胞游 离的原生质 体! 义;再生细胞的第一 次分 裂! 2;再生的小细胞团!2;再生的愈伤组织!;2 再生愈伤组织的分化!%2 再生的绿色小苗再生的成熟植株利用甘露醇: 。:?,7/42 !1810412/4/50 。#:(= 2。)07/3/0!+ 13121 /!+3957/,7/42 !1810412/4/5 0。= 2?= 2713 ! 9 26212/ 4/53747+39 !?#: (= 2。;+!/!/ 457/+07 /3/0!+ 13。#:(=2?+! +!2 9 726 957/7 /3/0!+ 131?#:?;=2。4 7 +39+!2。#!。(;=!。47+39贝+4357 /07/3/0!+ 13一9 726 9 +!1。= 2?4 7 +390!+43+53737 +45 73/(:#6。0 。=2。?553/5+ 4 423/!#/ 7!8 / 1#+ 1/1/3213+, 2!2 7/ 407 /3/0!+13。#:。;#:(+!27 47+32/457/猪掷
