微生物限度检查方法验证

《微生物限度检查方法验证》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物限度检查方法验证（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、1微生物限度检查方法验证微生物限度检查方法验证本品为中成药制剂，系口服给药制剂，按中国药典 2005 年版要求，需做细菌、霉菌及控制菌检查，同时需对检验方法进行验证，以确保检验方法的准确可靠。一、试验材料及方法1材料11 试验样品：AAAA 片（BBBBBBBBBBB 有限公司）批号：XXXXX，规格：XXX12 实验菌株：金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、枯草杆菌 CMCC（B）63501、白色念株菌CMCC（F）98001，购自中国医学细菌保藏中心。2方法21 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌新鲜培养物至营养肉汤中 3035，培

2、养 1824 小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中 25，培养 1825 小时，上述培养物用%.9 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 50100CFU 的菌悬液，备用。2. 2 试液制备：取本品制成 1：10 的供试液备用。2. 3 试验组：取 1：10 的供试液 1ml，置平板中，加入营养琼脂培养基1520ml，放冷，倒置平板，3035温度培养 2428 小时，白色念珠菌用改良马丁培养基，于 25培养 72 小时，观察结果。根据药典要求药品微生物学检查方法验证主要用规定的已知菌数的试验菌加入到已制备处理好的样品溶液中，测定其数据，同时测定样品本底菌数，并设置稀释对照组。根

3、据已加入的菌数及测得菌数，计算回收率，规定要求：试验组及稀释组的菌回收率均不得低于 7%，否则需重新选择样品处理方法，再进行回收率直到所采取的方法回收率试验达 7%以上方可认为验证试验符合要求。24 菌液组 按中国药典 2005 年版微生物限度菌落计数方法测定每 1ml 中菌数。25 供试品对照组：取规定量的供试液，按中国药典 2005 年版微生物限度菌落计数方法测定本品的本底数。226 稀释剂对照组 取 ph7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 1ml，余下同试验组。27 验证试验至少应进行二次独立的平行试验，并分别计算各次试验的菌回收率。28 菌回收率计算试验组平均数供试品对照组平均数试验组的

4、菌回收率（.9）= 菌液组的平均菌落数稀释剂对照组平均菌落数稀释剂对照组菌回收率（.9）=菌液组的平均菌落数29 结果判断：对照组的菌回收率不低于 7%，若试验组及稀释组的菌回收率均不低于 7%，则符合验证试验，可按此方法进行微生物限度测定；若任一次平行试验组的菌回收率低于 70%，则不符合验证试验要求，应建立新的方法并重新进行验证。31AAAA 片大肠埃希菌回收率测定结果见表 1表 1 AAAA 片大肠埃希菌回收率测定试验次数 供试品稀释倍 数 菌落计数 回收率试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 试验组 稀释剂对照组1 1：10 40 53 0 49 75% 92%2 1：10 41

5、 53 0 49 77% 92%32AAAA 片金黄色葡萄球菌回收率测定结果见表 2表 2 AAAA 片金黄色葡萄球菌回收率测定试验次数 供试品稀释倍 数 菌落计数 回收率3试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 试验组 稀释剂对照组1 1：10 281 293 0 290 96% 99%2 1：10 296 293 0 284 101% 97%33AAAA 片枯草芽孢杆菌回收率测定 试验次数 供试品稀释倍数 菌落计数 回收率试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 试验组 稀释剂对照组1 1：10 73 78 0 68 94% 87%2 1：10 66 78 0 69 85% 88%3

6、4AAAA 片白色念珠菌回收率测定，见表 4表 4 AAAA 片白色念珠菌回收率测定结果试验次数 供试品稀释倍数 菌落计数 回收率试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 试验组 稀释剂对照组1 1：10 107 120 0 102 89% 85%2 1：10 104 120 0 114 87% 95%3 验证试验小结上述试验表明：本品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌生长无影响，其试验组、稀释剂对照组回收率均达 70%以上，符合中国药典2005 年版一部微生物限度检查验证试验要求。以此确定本品微生物限度检查如下：取本品 10g 研磨均匀，加灭菌 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml 制成1:10 混悬液，采用常规法，照中国药典2005 年版一部微生物限度检查项下进行检查、判断。