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1、6 8 8 中国糖尿病杂志 2 0 0 8年第 1 6 卷第 1 1期C h i n J Di a b e t e s ， No v e mb e r 2 0 0 8 ， V o l 1 6 ， N o 1 1 辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用 及对尿 VE GF排泄的影响 杨光伟 李秀财 叶山东 范爱红 陈燕 胡闻 陈柯 王迎新 基 础 论 著 【 摘要】 目的 观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用及对尿中血管 内皮生长因子( VE GF ) 排 泄 的影 响。 方法Wi s t a r 大鼠 2 4只， 分为正常对照 ( N C ) 组 、 糖 尿病 ( D M) 组 、 辛伐他汀组 (
2、S i m) 组 。于成 模后第 2 、 4 、 8周时 ， 检测各组 的血糖 、 1 2 小时尿视黄醇结合蛋 白( R B P ) 、 白蛋 白( A l b ) 、 VE GF排泄率 ， 第 8 周时用透视 电镜检查。肾小球基底膜 、 系膜 区的病理改变 。 结果 ( 1 ) 第 2 、 4 、 8周 时， D M 组 和 S i m 组尿 A l b 、 R B P、 VE G F排泄率均高于 NC组 ( P 3 3 3 mmo l 1 ) 予长效胰岛素 0 5 U皮下注射 ， 视情 况每周注射 2 3 次。模型建立一周后， S i re组以辛伐 他 汀( 默沙东 中国公 司) 2 0
3、rag k g d _ 。 ， 溶 于蒸 馏 水 中灌 胃给药 ， NC组 、 D M 组 喂 以等量 蒸馏 水 。于成 模第 8周处死各组大鼠， 取肾组织标本。 三 、 标 本 的收集 和检 测指 标 各组均于成模后第 2 、 4 、 8周 时 以代谢笼 收集 1 2 h尿液 ， 准确计 量 ， 混匀后 留取 5 ml ， 保 存 于 一4 0 冰箱 中待测尿 A l b 、 R B P、 VE GF排泄率 。取双 肾以 生理盐水反复灌洗去包膜后称重 ， 分离皮 、 髓质 ， 石 蜡包 埋 ， 制 成 3 z m 切 片 ， HE 染 色 ， 右 肾 皮 质 予 2 1 5 戊二醛固定后行透
4、视 电镜检查 。以肾重 体 重 ( mg g ) 计 算各 组 肾脏 肥 大 指数 。用 E L I S A 法测 尿 VE GF( VE GF 1 6 4试 剂 盒 ， 武 汉 博 士 德 生 物 公 司) 、 尿 R B P ( 试 剂 盒 ， 上 海 德 波 生 物 公 司 ) ， 竞 争 放 射免 疫分 析 法 测 尿 Al b ( 试 剂 盒 ， 天 津 协 和 医 药 公 司) ， 罗氏血糖仪测大 鼠外周血血糖 。 四、 统计学处理 数据以 i S 或中位数表示 ， 采用 S P S S 1 0 0统 计软件 ， 尿 Al b 、 R B P、 V E GF经对数转换 ， 组 间差
5、异 比较用 方差 分析 。 结 果 一、各 组 血 糖 以 及 尿 Al b 、 R B P、 VE GF排 泄 率 变化 成模 后 第 2 、 4 、 8周 时 ， D M 组 尿 Al b 、 R B P 、 VE G F排泄率均显著高于 NC组 ( P0 0 1 ) ， 并随病 程延长不断增高 。S i re组上述指标较 D M 组明显下 降， 但仍高于 NC组 。( 表 1 ) 二、 各组肾脏肥大指数 比较 成 模后 第 8周 D M 组 肾脏肥 大 指数 约 是 NC组 的 2倍 ， 差异有统计学意义( P 0 0 1 ) 。S i re组虽仍 高于 NC组( PO 0 1 ) ，
6、但 比 D M 组明显降低 ( P 0 0 5 ) 。 ( 表 2 ) 三 、 尿 VE G F排泄率相关 因素分析 尿 VE GF排泄率与尿 Al b 、 R B P及 肾脏肥 大指 数明显线性相关。( 表 3 ) 表 1 各组 血糖 以及 尿 Al b 、 VE G F、 R B P排泄率 比较 ( i s ) G删r o u p “ time麟n 墨Glucos e Alb U ary U r inary RI (mml L ) 、 ( ( D ( r 1 2 h ) ( p g 1 2 h ) S i m： S i mv a s t a t in Rx ； 与 N C组 比较 ， s
7、Gr o u p NC P O O 1 ； 与 DM 组 比较 ， 口 s Gr o u p DM # P O 0 1 表 2 成模第 8 周 时各组 肾脏肥 大指数 比较 ( s ) T a b 2 C o mp a r i s o n o f k i d n e y hy p e r t r o p h y i n d e x a mo n g t h r e e g r o u p s ( - - I- s ) 组别 鼠数 肾脏肥大指数 Gr o u p Kid n e y h y p e r t r o p h y i n d e x ( mg g ) 与 N C组 比较 “0 5 N
8、C g r o u p P0 O 1 ； 与 D M 组 比较 ， s DM g r o u p # P 0 0 5 表 3 尿 V E G F排泄率与尿 A l b 、 R B P及肾脏肥大指数的相关性 Ta b 3 The c o r r e l a t i o n o f ur i na r y VEGF e x c r e t i o n wi t h u r i n a r y a l b u mi n，r e t i n a l b i n d i n g p r o t e i n a n d k i d n e y h yp e r t r op hy i nd e x u F
9、 o s 。 z o - o 0 9 1 8 o o 四 、 各 组大 鼠肾脏 病理 学 改变 NC组 肾小球毛细血管腔均匀一致 ， 无狭 窄， 肾 小管一 问质无炎症细胞浸润 。D M 组病变较明显 ： 肾 小球毛细血管袢塌 陷， 管腔 闭塞 ， 系膜 区增宽 ， 基膜 增厚和系膜基质增多 ， 肾小球体积增大 ， 淋巴细胞数 量增多， 出现玻璃样变 ； 肾小管尤 其是近 曲小管肿 胀 、 变性、 空泡形成 ， 肾间质可见大量淋 巴细胞和单 核巨噬细胞浸润 。S i m组病 变较轻， 可见肾小球毛 细血管腔轻度狭窄， 肾小管一 间质见少量淋 巴细胞浸 润 。( 图 1 ) 成模后第 8周 NC
10、组基底膜均匀一致 ， 无 明显 中国糖尿病杂志 2 0 0 8年第 l 6卷第 1 1 期C h i n J D i a b e t e s ， N o v e mb e r 2 0 0 8 ， V o l 1 6 ， No 1 1 增 厚 ， 有少 量足 突细 胞融 合 。D M 组 基 底膜 增厚 ， 结 构模糊 ， 足突破坏 、 融合 、 消失 、 结构不清 ， 系膜基质 增多、 肿胀， 系膜细胞肿胀 。S i m 组部分足 突融合 ， 系膜区细胞轻度增生 ， 胞浆肿胀变性； 与同期 D M 组 比有明显减轻 。( 图 2 ) DM S 图 l 各组大 鼠肾脏光镜观察结果( HE2 0
11、0 ) F i g 1 Th e l i g h t mi c r o s c o p i c r e s u l t s i n g r o u p o f NC， DM a nd s i mv a s t a t i n( H E 2 0 0 ) NC DM S i m 图 2 各组大 鼠肾脏电镜观察结果( 1 5 0 0 0 ) F i g 2 Th e e l e c t r o n m i c r o s c o p i c r e s ul t s i n g r o u p NC，DM a n d s i mv a s t a t i n( 1 5 o o o ) 讨 论 本研究
12、表明， 与 D M 组相 比， 辛伐他汀治疗可有 效降低 D M 大鼠尿 Al b ( 反 映肾小球病变的敏感指 标) 和尿 R B P ( 反映肾小管一 间质损害的敏感指标) 排 泄率 ， 同时降低肾脏肥大指数( 糖尿病 肾病发生的重 要危 险 因子 ) 。在 病 理方 面 ， 辛 伐 他 汀 可 减 轻 D M 大 鼠肾小球 基底 膜 增 厚程 度 ， 抑 制 系 膜 细胞 增 殖 和 系膜区扩张 ， 减少足突细胞损伤。上述结果显示辛 伐他汀对 D M 大鼠肾脏有明确的保护作用 。 他汀类药物保护 DM 大鼠肾脏损害作用的机制 比较复杂， 除调脂外 ， 还有许多其他 的作用， 如抑制 多种
13、炎症介质合成和分泌 ， 抑制细胞生长因子， 抗氧 化 ， 改 善 内 皮 细 胞 功 能 和 血 流 变 学 等 。VE G F 与 DN之间关系近年来 渐受重视， VE GF是 由两个相 同的亚基经二硫键连接而成的同二聚体糖蛋白， 目 前发现有多种单体形式： VE GF 1 4 5 、 1 6 5 、 1 8 3 、 1 8 9 及 2 0 6等。研究表明 VE GF在肾脏主要定位于肾小球 脏层上皮细胞 ， 远端小管细胞也有少量表达 。上皮 细胞产生的 VE G F可能经旁分泌形式作用于其靶 细胞如 内皮细胞和 系膜 细胞。生理条件 下 VE G F 表达量很低， 而 D N发展过程中如高血
14、糖 、 AGE s 、 血 管紧张素 1 I 、 T GF - fl 等刺激下， 足突细胞的 V E GF 表达和分泌增加。一方面增加肾小球滤过膜 的通透 性 ， 参与蛋白尿 的形成 ； 另一方面 ， 导致 肾小球 内的 单核 巨 噬 细 胞 迁 移 活 性 增 加 ， 系 膜 细 胞 活 化， TG F J3 1产生增加， 促进肾小球硬化 】 。叶健华等 发现糖尿病患者 V E GF水平较正常人显著升高，与 D N关系密切。C o h e n等_ 3 报道 d b d b小 鼠。肾小球 内 VE GF表达 和尿蛋 白排泄率增加明显相关。本 研 究显示 ， D M 大 鼠在成 模 2 周 后尿
15、 V E GF 1 6 4的排 泄显著增加 ， 并随着病程 的延长， 进一步升高 ， 提示 VE GF参与 D N病理过程。 本研究进一步观察显示 ， 与 DM 组相比， 辛伐他 汀显著抑 制 DM 大 鼠尿 VE G F的排 泄， 其机制 不 清。可能为： 竞争性阻断 HMG C o A还原酶的结合 位 点 ， 抑 制胆 固醇 的生 物合成 ， 减少 甲羟戊 酸 及其 下 游产 物 的生成 ， 抑 制小 G蛋 白如 R a s 和 R h o的异戊 二烯化 ， 使小 G蛋 白不能定位在细胞膜上而失活， 于扰 了小 G蛋 白介导的细胞内信号转导， 从而影响 细胞 的生 长、 增生、 分化 及细胞 外基 质 的代谢 。 P a r k等 5 报告辛伐他汀可干扰小 G蛋 白 Rh o A 的 异戊二烯化， 从而抑制 VE G F表达的信号通路 。 总之 ， 本研究结果显示， 辛伐他汀对 DM 大鼠肾 脏有 明 确 的保 护 作 用， 其 机 制 可 能 与 抑 制 肾 脏 VE G F的表达有关 ， 但治疗组 VE GF排泄率未恢复 至 正常水 平 ， 这 可 能 与 上 调 VE GF因素 众 多 ， 实 验 时间较短等有关 ， 尚待进一步研究。 参 考 文 献 l Z e n g L， Xu H ，Ch e w TL， e
