《MMP-2和TIMP-2在胃癌组织中的表达及预后（生存时间的关系）研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《MMP-2和TIMP-2在胃癌组织中的表达及预后（生存时间的关系）研究（34页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中文摘要目的：探讨基质金属蛋白酶( M M P 2 ) 和基质金属蛋白酶抑制剂( T I M P 2 ) 在胃癌组织中的表达特点及其与胃癌侵袭、转移及预后的关系。方法：选取随访资料完整的胃癌术后病例8 3 例，采用免疫组织化学S - P 方法，检测8 3 例胃癌组织M M P 2 、T I M P 一2 的表达。结果：M M P 2 ，T I M P 一2 主在胃癌细胞胞浆内表达，阳性细胞呈散在点状或灶状分布，少量间质细胞也有表达。胃癌组织的M M P - 2 、T I M P 2 的阳性表达率分别为5 2 4 ( 3 3 6 3 ) 和5 4 ( 3 4 6 3 ) 。M M P - 2 的
2、表达强度随着分化程度的升高而降低( P 两年，2 4人生存期 6 0 岁2 7 例；胃腺癌4 0例，印戒细胞癌4 例，实体癌1 例，黏液癌2 例，腺鳞癌2 例，正常组1 0 例，淋巴转移者2 9 例，未转移者2 7 例，远处转移6 例；肿瘤分化程度中、高者2 2 例，低分化者3 0 例，未分化者8 例；侵入黏膜及黏膜下层者3 例，侵入朋层者3 1 例，侵入浆膜层者2 9 例。所有组织块经4 u m 厚连续切片4 张，一张经H E 染色后由病理医师复核，其余3 张作免疫组化。6 3 例胃癌患者中，男5 0 例，女1 3 例，平均年龄5 5 7 岁，两组比较，性别、年龄、无统计学差别( p 0 0
3、 5 ) 。二主要试剂1 即用型鼠抗人M M P 2 ( 克隆号：C A 4 0 0 1 ) ：美国M a x i mB i o t e c h公司生产2 T I M P 2 ( C l o n e ：T 2 1 0 1 ) 即用型美国M a x i mB i o t e c h 公司生产3 超敏S P 免疫组化试剂盒自福州迈新生物技术开发公司；4 D A B 酶底物显色试剂盒自福州迈新生物技术有限公司5 E D T A 抗原修复缓冲液( 1 M m ，P H 9 。O ) 美国M a x i mB i o t e c h 公司生产，购自福州迈新生物技术有限公司，工作浓度l ：5 06 柠檬酸
4、抗原修复缓冲液：美国M a x i nb i o t e c h 公司生产，将一小包组织抗原修复液溶于2 0 0 0 m l 蒸馏水中( 1 0 M m ，P H 6 。0 + o 。1 ) ，购自福州迈新生物技术有限公司7 多聚赖氨酸防脱玻片，购自福州迈新生物技术有限公司主要仪器l 。石蜡包块机德国徕卡E G11 6 02 冷台Histoblock3 切片机R M2 1 4 51 44 捞片机5 摊片机6 自动脱蜡机7 冰箱8 电热恒温水浴箱9 显微镜1 0 摄像显微镜1 1 其他实验用品三实验方法H I1 2 1 0H I1 2 2 0A U T O S T A I N E RX L青岛海
5、尔电子仪器有限公司温州永强医疗器械场日本O l y m p u s i m 公司日本O l y m p u s i m( 一) 常规病理学检查：手术切除标本用中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 u m 连续切片3 张，其中一张H E 染色，行常规病理学检查，其余2 张做免疫组化染色。其余切片封存待用。病理诊断按我国胃癌协作组：胃癌的组织学分型，分为乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌、黏液细胞癌、黏液腺癌。另外按分化程度分高、中、低分化三组。按有无淋巴结转移分淋巴结阴性组、淋巴结阳性组。按照病变：分为早、中、晚三期胃癌后两者为进展期癌，本实验亦按此分期分为两组：早癌组和进展期癌组。( - - ) 应用
6、免疫组织化学S P 法染色1 主要步骤：( 1 ) 石蜡切片脱蜡和水化。( 2 ) 抗原修复：( P H = 6 o ) o 0 1 m m o l L 柠檬酸缓冲液为修复液，高压修复2 分钟。P B S ( P H = 7 2 ) 振荡清洗3 分钟X3 。( 3 ) 3 双氧水阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下湿盒孵1 0 分钟。( 4 ) P B S 液振荡清洗3 分钟X 3 。( 5 ) 每张切片加5 0 u l 非免疫动物血清封闭，室温下湿盒孵育1 0 分钟。( 6 ) P B S 液振荡清洗。3 分钟Xl( 7 ) 分别加入一抗( 鼠抗人M M P 一2 、T I M P 2 单克隆
7、抗，均为即用型) ，湿盒内4 。C冰箱过夜，室温下再孵育1 小时。( 8 ) P B S 液振荡清洗。3 分钟X 3( 9 ) 每张切片加入5 0 u l 生物素标记的二抗，室温下湿盒孵育1 0 分钟。l S( 1 0 ) P B S 液振荡清洗。3 分钟3( 1 1 ) 每张切片加入5 0 u l 链亲和素过氧化物酶溶液，室温下湿盒孵1 0 分钟。( 1 2 ) P B S 液振荡清洗。3 分钟3( 1 3 ) 新配制的D A B 液显色，显微镜下控制。( 1 4 ) 自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，自来水冲洗还蓝，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，树胶封固。显微镜下观察结果。阳性对照使用
8、M M P 2 、T I M P 2 表达良好的正常胃组织。用P B S 液代替一抗作为阴性对照。2 结果判断根据肿瘤细胞胞浆染色的程度及染色细胞百分率进行评分：基本不着色者为0分；着色淡黄色为1 分；棕色为2 分；深棕色为3 分。着色细胞占计数细胞百分率5 为0 分：6 2 5 为1 分：2 6 5 0 为2 分： t 5 1 为3 分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0 1 分为阴性( ) ；得2 3 分为弱阳性( + ) ；得4 6 分为中等阳性( 抖) ；6 分以上为强阳性( 卅) 。四、统计学处理：计量资料用均数标准差，用S P S S l l 5 软件
9、进行统计学处理，进行随机化配对资料均数的t 检验。当P 5 c m 着和肿瘤直径5 c m 者，其M M P 2 阳性表达率分别为7 9 7 8 和6 0 5 5 。两者相比较无明显差异( P 0 0 5 ) ，T I M P 2 阳性表达率分别为3 0 和5 4 5 5 。两者比较也无显著差异( P 0 0 0 5 ) ；高、中度分化者、浸润至黏膜和肌层者、无淋巴结转移者，其M M P 2 阳性表达率分别为7 0 5 2 ，4 2 1 2 ，3 3 3 2 ，而低和末分化、浸润至浆膜层者、有淋巴转移者，其M M P 2 阳性表达率分别为8 0 O O 、8 1 ，2 4 、4 5 0 0 ，
10、后者阳性表达明显高与前者，( P 0 0 5 ) 。四M M P 2 、T I M P 2 的表达与生存时间的关系( 图1 、2 )K p l a n M e i e r 分析显示，M M P 2 高表达( 2 4 分) 的患者2 4 例，中位生存期为3 3 个月，M M P 2 低表达( 帖1 分) 的患者有3 9 例，中位生存期为4 2 个月，经L o g - r a n k 检验，两组有高度显著性差异( p 1 者中位生存期为2 9 个月，而M M P 2 T I M P 2 1 者中位生存期为4 6 个月，两组差异有高度显著性。表明胃癌患者M M P 2 和T I M M P 2 的表
11、达与患者预后有密切关系。图l ：M M P 2 的表达与生存时间的关系生 存 率( )1 02 03 04 05 06 07 0时间( 月)图胃癌组织M M P 2 高表达和低表达的K a p l a n M e i e r + l ：存曲线图2T I M P 2 的表达与生存时间的关系1 02 03 04 05 06 07 0时间( 月) 圈胃癌组织TIMP - 2 高表达和低表达的K a p l a n M e i e r 生存曲线1 9加柏约0伽伽柏o生存率嘲，讨论胃癌的生物学行为和预后与肿瘤细胞的侵袭程度及淋巴结转移密切相关。肿瘤细胞在侵袭转移过程中必须破坏由细胞间基质及基膜构成的细胞
12、外基质屏障( E C M ) ，在参与破坏E C M 的酶类中基质金属蛋白酶M M P s 与肿瘤侵袭转移的关系最为密切。M M P s 是l 类Z n 2 十依赖的细胞外蛋白水解酶，能降解细胞外基质，促进恶性细胞的侵袭转移。根据其作用底物不同主要分为间质胶原酶( M M P 1 ) 、明胶酶( M M P 一2 、M M P 一9 ) 、基质溶解素( M M P 3 ) 和膜型基质金属蛋白酶( M T M M P ) 4 种。肿瘤发生侵袭和转移的重要步骤是肿瘤细胞突破细胞外基质及基膜，而型胶原为基膜的组成成分之一，型胶原为具有独特螺旋结构的蛋白质，只有型胶原酶能降解型胶原等成分，破坏基膜的完
13、整性。型胶原酶有2 种分子型：分子量为7 2 k D的M M P 2 和9 2 k D 的M M P 9 。在肿瘤侵袭和转移过程中尤以M M P 2 为重要。多项研究表明，M M P 2 的表达与肿瘤转移及侵袭程度密切相关，是肿瘤恶性进展的标志。本组研究表明，M M P 2 随着肿瘤侵袭程度加深及淋巴结转移，其阳性表达率显著增高，呈正相关。说明M M P 2 与胃癌组织的生物学及预后有关。因此通过对胃癌组织中M M P ，2 的检测，可了解与判断胃癌侵袭及转移的能力和程度。T I M P s 是组织中一些调节M M P 活性的抑制分子，目前报道的至少有4 种：T I M P 1 、2 、3 、
14、4 ，它们可与M M P 以共价健形式结合成1 ：1 复合体，抑制M M P 的活性。T I M P 2 是M M P 2 的特异性抑制剂。T I M e 2 可与活化的或无活性M M P 2 结合，终止M M P 2 活动，有效的抑制M M P 2 的胶原及明胶分解活性，达到抑制癌细胞转移及侵袭。本研究表明，胃癌组织中T I M P 2 的表达与其转移、侵袭程度呈负相关。提示T I M P 2 有抑制肿瘤细胞的侵袭及转移的能力。基质金属蛋白酶2 ( M M P 2 ) 和组织基质金属蛋白抑制剂2 ( T I M e 2 ) 是2 个与肿瘤侵袭性有关的指标，在细胞外基质合成及降解代谢平衡中起着
15、至关重要的作用。本研究发现，胃癌组织T I M P 2 的阳性率明显较M M P 2 低，两者表达呈负相关。而在侵袭程度强、伴淋巴结转移的胃癌组织中其M M P 2 的阳性率高于T I M P 2 ，说明本组胃癌组织T I M P 2 对M M P 2 的分泌及活性的抑制作用强，正是由于某种因素的存在使胃癌组织中M M P 2 表达总要高与T I M P 2 ，正是这两者之间的平衡被打破，才导致了肿瘤的侵袭与转移。侵袭和转移是恶性肿瘤最本质的特性受各种因素的调控。在M M P s T l M P s 与胃癌侵袭、转移关系方面的研究虽已取得一定的成果。而其作用机制尚不十分清楚不少问题有待探索，如
16、在不同类型和分化程度的胃癌发生、发展过程中M M P s TIM P s 表达调控的精确机制，在M M P s T l M P s 的表达中胃癌细胞与间质细胞间的信号传导及途径等，另外T I M P s 作为强有力的抑制剂具有使M M P s 失活在作为临床用药治疗时应兼顾考虑其对人体正常生理功能的影响使取得较高治疗效果的同时将不良反应降至最低。相信随着医学科学的进步与发展，这些问题的逐渐解决。M M P s TIM P s 这一系统无论是作为胃癌的血清检测标志物、基因治疗的手段和临床治疗用药。还是胃癌预后的预测指标都具有广阔的研究前景。对于胃癌的转移而言，单独的M M P s 表达或者T I M P s 表达降低的意义远远不如M M P S T I M
