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1、农业生物技术学报，2010年，第4期，第746752页 010，8，74 二 研究报告 C爱朋 王守志 王启贵 胡晓湘 李辉 1东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030；2中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100193 通讯作者1要G,脂肪细胞分化过程中起 重要作用，是生长和体组成性状的重要候选基因。以东北农业大学肉鸡(、低腹脂双向选择品 系的第9、10世代肉仔鸡为材料。采用测序方法对鸡C翼区、编码区和部分3 侧翼 区序列进行多态性检测，研究该基因多态性与鸡生长和体组成性状之间的关系。研究发现在C区552 552GA。统计分析结果表明，该突变对肉鸡的腹脂重、腹脂率、肝脏 重、肝
2、脏率、胫围、胫骨重等性状具有显著影响(PA)at 52 of to 名为c*552GA(表2)。针对于c*552G引物脂双向选择品系第9和第代个体基因组的片段的 扩增结果良好，片段大小为5481)。 图c 552G：阴性对照；2：000分子量标准；3l CR of 52GA l：000 CR 2 对C552G用 生的3种 基因型分别命名为位基因内切酶识别，所以纯合子为548 位基因 内切酶识别，所以纯合子条带；杂合子43和204 条带(图2)。 表2多态位点检测 3 C关分析 在高、低腹脂双向选择品系第9和第10两个世 代的合并群体中对该位点与生长和体组成性状进行 相关分析。结果表明，该位点的
3、多态性对肉仔鸡的腹 脂重、腹脂率、肝脏重、肝脏率、胫围、胫骨重等性状 具有显著影响( 05)(表3)。最小二乘分析结果表 明，相对于的腹脂重和腹脂率(5)。 A A A M A 2不同个体的伽 基因 of 鸡C3 C值) on in of 0 状 性状 出生体重g S 腿肌率S 3周龄体重儋S 脾脏重g S 腹脂重 021 脾脏率W 脂率W 0033 睾丸重佗S 肝脏重儋020 睾丸率W 脏率W 0019 胸宽S 大胸肌重g S 胫围0015 大胸肌率W 骨重g 0021 肌胃重儋S 股骨长13 肌胃率W 爪重g 097 腿肌重g S 胫爪率W 0070 02) NS no of on 02
4、表4不同基因型对高低脂系第9和第1 on in 0 同一行中没有相同字母表示差异显著(实 验结果从一个侧面为C具有高度保守性这一观点提供了证据。 c船 基因对于脂肪细胞的分化调控起着十 分关键的作用。C转录之前就已经得以表达(et 1998； 王娉等，2007)。此外，C形式识别并结合脂肪细胞特异表达基因调控元件 内的特异序列，进而启动脂肪细胞特异表达基因的 转录。如 P、 R 、焰础，高 民， 2008)。研究发现，当敲除C鼠出现 农业生物技术学报 75u 酸烯醇丙酮酸羧激酶(因功能丧失的现 象，影响糖原的合成，进而影响糖类代谢和脂肪生成 (et 2002)。995)研究发现在小鼠体 内干扰
5、C白色脂肪组织发育停滞。 008)的研究结果表明，将小鼠脂联素 基因启动子区内的C 肪细胞中脂联素基因的表达量明显降低。本实验发 现鸡 c*552G脂 率等脂肪沉积相关性状具仃显著影响。结合已有的 文献报道和本实验研究 果初步推断C能是控制腹脂沉积的主效基因或与主效基因紧密 连锁。 鸡体内约90的脂质合成是在肝脏中完成的 (et 1972)。005)将C除后，小鼠的肝脏结构发生严重的紊乱。另外， 998)研究结果表明，部分肝脏切除后，C达量的减少降低肝细胞去分化和增殖的能力之 后随着C细胞增殖能力加 强，完成肝脏的再生过程。最近，有研究发现鸡的肝 脏、腹脂、脾脏、心脏等组织中的 因蛋白表 达量
6、较高。同时还发现C脂系公 鸡肝脏组织中表达量存在差异(刘冰等，2009)。本研 究发现c*552G 脂率有显著相关，而且对肝脏重，肝脏率有显著的影 响。该结果也支持C主效基因或与主效基因紧密连锁这一推测 此外，在较早的研究中，982)发现骨 髓也是鸡脂质合成的一个重要场所。997)研 究发现，糖皮质激素能够诱导骨髓间质干细胞向脂 肪细胞分化，同时减少其向成骨细胞分化，此过程受 、C基因的调控。之后， 998)发现骨髓间质干细胞在无任何 条件干预下也可自然分化为成骨细胞系和脂肪细胞 系，二者的分化维持一种动态平衡。最近。2008)的研究表明人C发育具有重要影响的转录调控因子调控来影响这种平衡。在
7、本研究中，该基因突变对 肉鸡的胫围、胫骨重等骨骼生长发育性状具有显著 影响，并且对其他一些骨性状具有接近显著水平的 影响。这一结果提示。鸡C骨髓间质干细胞成骨分化和成脂分化平衡的调 控。 综上所述，C552G腹脂重、腹脂率、肝脏重、肝脏率、胫围、胫骨重等 性状具有显著影响。因此，初步推断C是控制腹脂沉积、骨骼生长发育的主效基因或与 主效基因紧密连锁。此外，本研究结果还提示：鸡c 成脂分化平衡的调控，将进一步深入研究C因以及该突变位点的生物学功能，以期获得更为 明确的结论，使之可以作为分子遗传标记应用于鸡 的育种实践。 3材料与方法 31实验鸡群和性状度量 以东北农业大学选育的肉鸡高、低腹脂双向
8、选 择品系的第9和第10世代的肉仔鸡(为材料(00、27)。鸡群按常规方法进行饲 养管理。测量出生重、l、3、5、7周龄体重及7周龄的 胫长和胫围；7周龄时屠宰，测(称)量胸宽、屠体重、 肝脏重、心脏重、脾脏重、肌胃重、腺胃重、睾丸重和 腹脂重等性状，并计算肝脏率、心脏率、脾脏率、肌胃 率、腺胃率、睾丸率及腹脂率。 32序列分析 根据p：站上提供的鸡Co序列，利用0设计2对引物，即：1)。 用这2对引物分别对C翼区、 编码区和部分3 侧翼区进行测序列 变异。弓【物由北京英骏生物公司合成。 33 均含量在70 左右，利用常规目的片段。因此本实验通过在反应体系中添基亚砜(甘油，使用高效率的用热启动 反应程序等多方面措施的改进，扩增出目的片段，用 于后续实验。 25 0 L、10 pL、105 L、 125 U 0 825 L。 c*552G47 鸡Cf Cssocia
