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1、HPLC 法测定前列安通胶囊中盐酸小檗碱连云港市一院前列安通胶囊由黄柏、 赤芍等八味中药组成， 具有清热利湿， 活血化瘀的功效，用于湿热瘀阻证，症见：尿频、尿急、排尿不畅，小腹胀痛等症，临床疗效确切。处方中黄柏为君药， 盐酸小檗碱为活性成分。 目前文献报道测定方法有薄层扫描法3和 HPLC 法2。由于薄层扫描法存在准确性差， 重现性差等缺点， 因此，本实验采用 HPLC 法测定黄柏中的盐酸小檗碱，为有效地控制复方的质量标准提供依据。1 仪器与试药Agilent 1100高效液相色谱仪， MWD 紫外检测器。 Sartorius BP211D型电子天平。HENGAO-HU10260B型超声仪。盐
2、酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所（批号： 110713200208） ，乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余试剂匀为分析纯，前列安通胶囊由连云港人民医院药房提供。2 方法与结果2.1 色谱条件：色谱柱： XTerra C18 （2504.6mm ，5 m ） ，WATERS公司；流动相：乙腈 0.5 磷酸水溶液（ 27：73） ；检测波长： 265nm ；柱温： 30。2.2 系统适应性试验： 在上述条件下， 测定样品中盐酸小檗碱的含量，以盐酸小檗碱峰计算理论塔板数大于6000，分离度大于 2，已达到基线分离。 为确保定量分析的准确，在系统实验中盐酸小檗碱的理论塔板数不得低于4000。2
3、.3 对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml 含35g 的溶液，即得。液相图谱见图1。2.4 供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中 , 密塞，精密加入 50% 甲醇 50ml，称定重量，超声（功率250W ，频率40KHz ）处理 30分钟，放冷，称定重量，加50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过, 弃去初滤液 , 取续滤液作为供试品溶液。液相图谱见图2。2.5 阴性供试品溶液的制备 : 按处方比例，除去黄柏药材，相同制备方法制得阴性供试品溶液。进样，记录。结果其他药材对盐酸小檗碱含测无干扰。液相图谱见图 3。2.6 标准曲线的制备
4、精密称取盐酸小檗碱对照品8.94mg，置 50ml 量瓶中，加 50% 甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。得浓度为0.1788mg/ml 的标准品储备液，分别精密吸取上述溶液1ml， 2ml ， 4ml ，6ml，10ml，置 100ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别取10l 注入液相色谱仪，记录相应的峰面积。以进样浓度为横坐标（ x） ，峰面积为纵坐标（ y） ，绘制标准曲线，得回归方程 y = 35.949x 15.135，r=0.9998 。结果表明，盐酸小檗碱在17.88g/ml 178.8 g/ml 范围内呈良好线性关系。2.7 精密度试验精密吸取对照品溶液（ 35.76g
5、/ml ）10l ，重复进样 6 次，测得峰面积，计算 RSD为 0.22%（n=6） 。2.8 稳定性试验取本品（批号： 050615）内容物0.1g ，精密称定，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10l ，分别第0、1、2、3、6、12 小时进样一次，共进样6 次，测定峰面积，计算 RSD 为 1.66%（n=6） 。结果表明盐酸小檗碱峰面积在12 小时内基本稳定。2.9 重复性试验取本品（批号： 050615）内容物 0.1g，精密称定 5 份，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定，结果盐酸小檗碱平均含量为 17.01m
6、g/g，RSD 为 0.31%（n=5） 。2.10 加样回收率试验取已知含量的本品内容物（ （批号： 050615；含量： 17.01mg/g）0.05g，精密称定 5 份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（36.8 g/ml ，50% 甲醇溶解）25ml 及 50% 甲醇 25ml，超声处理 30min，放冷，称重，50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液，进样，测定。结果盐酸小檗碱平均加样回收率为 99.74%，RSD 为 0.96%。结果见表 1。表 1 加样回收率试验序号取样量（g）样品含量（mg）加对照品量（ mg ）实测量（mg ）加样回收率（% ）平均加样
7、回收率（% ）RSD （ % ）1 0.05339 0.908 0.92 1.814 98.48 99.74 0.96 2 0.05483 0.933 1.863 101.09 3 0.04836 0.823 1.734 99.02 4 0.05127 0.872 1.797 100.54 5 0.05836 0.993 1.909 99.56 6 0.05198 0.884 1.802 99.78 2.11 样品含量测定取 5 批前列安通胶囊，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10l ，注入高效液相色谱仪，测定，计算含量，结果见表2
8、。表 2 样品中盐酸小檗碱的含量测定结果样品批号盐酸小檗碱含量（mg/粒）RSD （% ）050615 6.46 0.11 050620 6.26 0.57 050625 6.53 0.22 050701 6.54 0.76 050707 6.70 0.53 3 讨论3.1 提取方法的选择分别采用甲醇、 50% 甲醇、乙醇、 50% 乙醇、水，超声、回流的不同方法对样品进行提取考察，以选择合适的提取方法，结果几提取方法中以50% 甲醇超声提取效果最佳，方法简便，可靠。3.2 流动相的选择参考中国药典标准1对乙腈 -磷酸的不同比例进行考察， 结果表明乙腈 0.5 磷酸水溶液（ 27：73）对样品
9、的分离效果最佳，保留时间适宜。3.3 结果评价试验结果表明 , 本实验所采用测定方法测定盐酸小檗碱, 重现性良好, 回收率较高 , 且在该色谱条件下 , 盐酸小檗碱进样精密度良好, 故该法结论可靠, 可作为前列安通胶囊的质量控制标准。参考文献：1 中国药典一部 s.2005. 2 宋霄宏 , 等.HPLC测定胃炎平颗粒剂中盐酸小檗碱的含量J. 中国实验方剂学杂志 ,2003,9(1):14 3 刘安昌 , 赵丽霞, 等. 薄层扫描法测定苦黄软膏中盐酸小檗碱的含量J.中国 医药学报 ,2002,17(11):695. 附图：min02.557.51012.51517.5mAU-20-100102030405060 111.1991、盐酸小檗碱对照品溶液色谱图2 供试品溶液色谱图min024681012141618mAU0102030405060MWD1 A, Sig=346 Ref=off (QLATXBJ-A-05.D)211.2063 阴性供试品溶液色谱图min024681012141618mAU0102030405060MWD1 A, Sig=346 Ref=off (QLATXBJ-A-06.D) 3
