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1、1糖链的序列测定Smith 降解法摘要： Smith 降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。 然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以 12 位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放； Smith 降解后产生甘油。以 14 位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith 降解后产生赤藓醇。以 13 位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith 降解后仍为原来糖。以 16 位键和的糖基或非还原末端基（1
2、6）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸 ；Smith 降解后产生甘油。Smith 降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以 12 位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith 降解后产生甘油。OOHOHCH2OHO.O.OHCOO.OHCCH2OHO.OO. O.CH2OHHOH2CKBH4CH2OHCHOHCH2OHH+ 2IO4- CH2OH以 14 位键合的糖基经高碘
3、酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith 降解后产生赤藓醇。2OO.OHCH2OHO.KBH4H+OHCHO OHCOCH2OHO.O.HOH2CHOH2COCH2OHO.O.赤赤鲜鲜醇醇 乙乙二二醇醇IO4-以 13 位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith 降解后仍为原来糖。OOHO.CH2OHO.KBH4H+OHOOHOHCH2OHOHOHIO4-以 16 位键和的糖基或非还原末端基（16）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸； Smith 降解后产生甘油。OOHOHCH2O.O.KBH4H+OHOHCOCH2OHO.HOH2COCH2OHO.IO4
4、-CHO+HCOOHCH2OH甘甘油油乙乙二二醇醇本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖。 【实验材料】 0.1mol/L 醋酸。 2mol/L 硫酸。 硼氢化钾。 纸层析试剂及器材：除显色剂外，同实验二。 3硝酸银显色剂： A: 16%硝酸银水溶液: 丙酮为 1：9（V/V）。 B: 1%NaOH 乙醇溶液(W/V)。 C: 6mol/L 氢氧化铵。 【实验操作】 1. 还原和水解 高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析 48 小时，蒸馏水透析 24 小时，于 40以下减压浓缩至 10ml 左右，加入 70mg 硼氢化钾于室温、暗处搅拌18 小时24 小时以还原多糖醛。用 0.1 molL 醋酸中和至 pH67，对流水透析 48 小时，蒸馏水透析 24 小时，减压蒸干，加 1 molL 硫酸 2ml，封管，100水解 8 小时，用碳酸钡粉末中和，定量滤纸过滤，滤液减压浓缩后，通过纸层析方法检测。 2. 纸层析 操作详见实验 2（单糖组成分析）。展层后，将滤纸取出，自然干燥，喷上试剂 A ，自然干燥，将滤纸浸入试剂 B 中，待斑点显出后，再浸入试剂 C 中以洗去滤纸上的氧化银，然后用水冲洗 1 小时左右，风干。以正丁醇：乙酸：水=4：l：5 为展层剂时，甘油的 Rf为：0.48，赤藓醇的 Rf为：0.35。
