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1、微生物微生物 药物敏感实验药物敏感实验 一、实验目的一、实验目的1、熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判断方 法。 2、了解药敏试验在实际生产中的重要意义 二、实验原理二、实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部 位。药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂形成了随着离纸片距离加大，琼脂 中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。其纸片周围一定区域琼脂内的药物浓度高于抑 制待检菌所需浓度时，则该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。抑菌圈的大小抑菌圈的大小 可以反映待检对测定药
2、物的敏感程度可以反映待检对测定药物的敏感程度，抑菌圈愈大，说明该菌对此药物越敏感 三、实验器材三、实验器材 1菌种 大肠埃希菌。 2培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。 3试剂 无菌生理盐水，抗菌药物纸片： 包括青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素等。 4其他 无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。 四、实验方法和步骤四、实验方法和步骤 1菌液制备菌液制备菌浓合适，一般为菌浓合适，一般为 106 2接种接种 细菌悬液制备后细菌悬液制备后 15min 内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量 0.1- 0.2mL。涂布均匀。涂布
3、均匀。3贴药敏纸片贴药敏纸片 涂布后的平板在室温下干燥涂布后的平板在室温下干燥 35min，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表 面并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。各纸片中心相距应大于面并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。各纸片中心相距应大于 24mm，纸片贴上，纸片贴上 后就不能再移动位置。后就不能再移动位置。 4培养培养 将平板倒置放入将平板倒置放入 37培养箱培养，培养箱培养，1618h 读取结果。读取结果。 五、实验结果五、实验结果抑菌圈大小（单位，抑菌圈大小（单位，mm）抗生素抗生素0.05moL/L 0.1moL/L青霉素青霉素 链霉素链霉素 土霉素土霉素 氯霉素氯霉素 红霉素红霉素 量取不同药物的各抑菌圈大小，记录量取不同药物的各抑菌圈大小，记录 六、思考题六、思考题 1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？ 2. 试述药敏试验的意义试述药敏试验的意义
