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1、 第 页微生物质控考核菌种的鉴定常州市疾病预防控制中心 杜强 徐晓怡 王小萍等菌种鉴定是疾病预防控制中心实验室常见的考核方式之一。它不但证明了该实验室有 能力进行规定类型的检测和（或）校准，而且对于该实验室管理和技术的提高也具有十分 重要的促进作用。本中心于今年 8 月份接受了省疾控的微生物质控考核并获得了较好的成 绩，现将情况简述如下。1 材料和方法 11 考核材料：一支带有未知致病菌的肛拭子。 12 考核要求：假设此肛拭子是来源于一腹泻病人，要求从中检出一至数种致病菌，提 示可能菌种范围限定于申报的数种腹泻致病菌。时间要求 3 天。 13 检验试剂： 本次检测培养基为宜兴万石培养基厂产品，
2、微量生化管由浙江省军区后 勤卫生防疫检验所提供，沙门菌诊断血清（56 种）由成都生物制品研究所提供，志贺菌诊 断血清（50 种）和出血性大肠杆菌 O157 由兰州生物制品研究所提供，均在有效期内。 14 检验依据：GB/T 4789-2003 食品卫生国家标准、 食品卫生检验方法注解（微生物 部分） （孟昭赫）2 检验步骤及结果判断 21 确定检测目标：首先根据检测要求，确定可能的菌种有沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄 色葡萄球菌、溶血性链球菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致病性大肠埃希氏菌共 7 种。 22 增菌及平板划线分离：无菌操作，取肛拭子接种于营养肉汤内，37培养 24h 后 分别划线接种于以
3、下各类选择性平板： 两块 SS 平板（编号为 1-A 和 1-B） ， 37，培养 24h； 两块血平板（编号为 2-A 和 2-B） ， 37，培养 24h。 两块氯化钠蔗糖平板（编号为 3-A 和 3-B） ， 37，培养 24h。 两块 4 号琼脂平板（编号为 4-A 和 4-B） ， 37，培养 24h。 23 平板生长情况： 两块 SS 平板（编号为 1-A 和 1-B）上有三类菌落，一类为无色半 透明，中等大小，圆整润滑，中心黑色的菌落生长（编号为 A） ，一类为中等大小，略微泛 红，湿润，光滑的菌落（编号为 B） 。一类为较小，扁平，生长不良，有粘性但不易挑起的 菌落（编号为 C
4、） 。革兰氏染色均为阴性无芽胞杆菌。 两块血平板（编号为 2-A 和 2-B）上菌落较多且杂，很难区分，但可观察到没有金 黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的明显典型的菌落，及其两者较典型的溶血现象。 两块氯化钠蔗糖平板（编号为 3-A 和 3-B）上有一类菌落，为中等大小，不透明， 光滑，湿润的菌落，因不发酵蔗糖而呈绿色（编号为 D） 。革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌， 悬滴法镜检运动活泼， 两块 4 号琼脂平板（编号为 4-A 和 4-B）上无菌落生长。24生化鉴定：241 A 号菌株，因产 H2S，初步怀疑为沙门菌，进行进一步的的生化反应。结果见表 1。第 页表 1 A 号菌株生化检测项目结果生化项
5、目结果生化项目结果生化项目结果葡萄糖肌醇赖氨酸脱羧酶乳糖侧金盏花醇精氨酸水解酶麦芽糖卫矛醇鸟氨酸脱羧酶木糖山梨醇尿素阿拉伯糖葡萄糖铵KCN蔗糖甲基红丙二酸钠甘露糖VP明胶鼠李糖靛基质七叶苷棉子糖西蒙氏枸椽酸盐硝酸盐还原ONPG水杨素苯丙氨酸甘露醇+覃糖动力+ 根据生化反应结果，不符合沙门氏菌的生化反应定义，且血清凝集实验也为不典型的 弱阳性，查对生化反应结果，最后确定为条件致病菌弗劳地枸椽酸杆菌1 。242 B 号菌株，因在 SS 上略微泛红，初步怀疑为致病性大肠埃希氏菌，进行进一步 的生化反应。结果见表 2。表 2 B 号菌株生化检测项目结果生化项目结果生化项目结果生化项目结果氧化酶-阿拉伯
6、糖+明胶-动力+谷氨酸-侧金盏花醇-靛基质+赖氨酸脱羧酶+苯丙氨酸-尿素-精氨酸水解酶-硝酸盐还原+硫化氢-鸟氨酸脱羧酶+西蒙氏枸椽酸盐-甲基红+木糖+七叶苷-VP-水杨素-KCN-乳糖+葡萄糖+甘露糖+动力+麝香草酚兰抑制根据生化反应结果，符合出血性大肠杆菌 O157：H7 的生化反应定义，血清凝集实验 结果强阳性。最后确定为出血性大肠杆菌 O157：H72243 C 号菌株和 D 号菌株，因 C 号菌株生长不良，有粘性但不易挑起，符合副溶血性 弧菌在 SS 上的生长特征。而 D 号菌株带有典型的副溶血性弧菌特征。所以怀疑 C 号菌株和 D 号菌株是同一种菌，即副溶血性弧菌。C 号菌种和 D
7、 号菌株，进行盐浓度曲线实验，结果 0NaCl、11NaCl 肉汤中不 生长、3NaCl、7NaCl 肉汤中生长，符合副溶血性弧菌定义，进行进一步生化反应，结 果见表 3（注：以下微量生化管均为嗜盐菌专用）：第 页表 3 C 号菌株和 D 号菌株手工生化检测项目结果生化项目结果生化项目结果生化项目结果葡萄糖肌醇赖氨酸脱羧酶乳糖侧金盏花醇精氨酸水解酶-麦芽糖卫矛醇鸟氨酸脱羧酶+木糖-山梨醇-尿素-阿拉伯糖西蒙氏枸椽酸盐硝酸盐还原蔗糖甲基红丙二酸钠覃糖VP明胶+鼠李糖-靛基质+七叶苷棉子糖水杨素苯丙氨酸甘露醇+动力+ C 号菌株和 D 号菌株生化反应结果完全相同，且符合副溶血性弧菌生化反应定义。因
8、 此最后确定为副溶血性弧菌。30 结论与体会： 301 此次样品中共检出三种致病菌，分别是：出血性大肠杆菌、副溶血性弧菌和条件 致病菌弗劳地枸椽酸杆菌。但因考核要求是腹泻致病菌，所以去除了条件致病菌弗劳地枸 椽酸杆菌。上报后得到了满分评价。 302 此次菌种鉴定考核，采用的是混合菌株，和通常的单菌株考核相比，难度增大。 因此菌种的分离纯化显得尤为重要。首先应根据考核要求选用具有较好选择性培养基。其 次应抓住一些菌独有的生长特征进行相应的生化反应，这样不仅可以减少盲目性和工作量， 而且能提前作出正确的判断。 303 在鉴定过程中，最忌的是根据一两种特殊反应就过早作出先入为主的判断。如这 次鉴定考
9、核中，出现了近来考核中比较流行的弗劳地枸椽酸杆菌3 。此菌因在 SS 平板 上 H2S 呈阳性且易与沙门氏血清凝聚实验产生交叉反应，因此容易与沙门氏菌混淆。如遇 这种情况，完备的生化反应就显得相当重要。此外，这次鉴定考核中所使用的血琼脂平板 虽然选择性不强，在分离选择上效果不佳，但可用于菌种溶血性的鉴定，也是比较重要的。参参 考考 文文 献献 1何晓青主编，卫生防疫细菌检验，人民卫生出版社，1990 2郭玲，李冶悦，李国兰等，O157：H7 大肠杆菌的调查及检验方法研究，中国卫生 检验杂志 2000，10（5）：550-552。 3曹玉芹，崔西超，彭武梅，室内细菌鉴定质控报告，中国卫生检验杂志 2002，12（5）：559-560。第 页2005 年 8 月 28 日
