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1、 戦略的創造研究推進事業 研究領域免疫難病感染症先進医療技術 研究課題 制御性 T 細胞新免疫制御法開発 研究終了報告書 研究期間 平成年月平成年月 研究代表者：坂口志文 （京都大学再生医科学研究所 生体機能調節学 教授） 1 研究実施概要 研究実施概要 1.1 研究構想 制御性 T 細胞（Regulatory T cells、以下 Treg 略）、含哺乳動 物正常個体中存在、免疫応答対“負”制御司。異常、 正常自己組織対異常免疫応答自己免疫病（例型糖尿病、 甲状腺炎） 、過剰免疫反応、炎症性腸疾患様免疫病 原因。一方、Treg 操作、免疫病治療予防可 能。、Treg 数減少、機能減弱化図、癌
2、細胞対免疫 応答惹起、強化、逆、Treg 数増加、機能強化、移植臓器対 拒絶反応抑制、安定移植免疫寛容導入。即、免疫系 生理的備免疫制御機構 Treg 標的、病的生理的 免疫応答制御可能。本研究狙、Treg 免疫制御 新概念基、自己免疫疾患、難治感染症、悪性腫 瘍治療予防、移植免疫寛容誘導、新免疫治療法基礎確 立。 1. 研究実施成果 本研究、現在以下成果上。 （） Treg 発生機能 Foxp3 役割。 CD25+CD4+Treg 発生 分化 Foxp3 遺伝子必須見出。 Foxp3 転写因子、遺伝性免疫疾患 IPEX（immune dysregulation, polyendocrinop
3、athy, enteropathy, X-linked syndrome）原 因遺伝子。Foxp3 、胸腺、末梢 CD25+CD4+Treg 特異的発現 、通常細胞 Foxp3 強制発現、機能的表現型 Treg 様転換、作製 Treg 生体内自己免疫性炎 症抑制（Hori et al., Science, 2003） 。即、Foxp3 、Treg 発生 機能制御遺伝子。 FOXP3 遺伝子、 Treg 特異的 発現、細胞 FOXP3 遺伝子強制発現機能的 Treg 様 転換（Yagi et al., Int. Immunol., 2004） 。結果、Foxp3 遺伝子 操作自己免疫病、炎症性疾
4、患治療可能意味。 Treg 発生、機能解明、Foxp3 制御遺伝子群 法網羅的探索、Gpr83、Helios 、制御性細胞特異 的発現創薬標的興味深分子同定、分子 対単抗体作製試（Sugimoto et al., Int. Immunol., 2006） 。 、 Yeast-two-hybrid 法用、 Foxp3 結合分子探索、 転写因子 AML1/Runx1 Foxp3 特異的会合見出（Ono et al., Nature, 2007） 。AML1/Runx1 、通常細胞 IL-2、IFN 遺伝子発現亢進、Treg Foxp3 結合 産生抑制抑制能発現働。分子会 合介入 Treg 機能制御
5、可能性示。 Foxp3 直接結合遺伝子群 100-200 個考、中2 Treg 機能重要分子 IL-2 CTLA-4（下記）解析進。即、 正常、抗 IL-2 抗体投与、IL-2 一定期間中和、Treg 減少、Treg 除去誘導同様自己免疫病誘導 （Setoguchi et al., J. Exp. Med., 2005） 。結果、CD25 (IL-2R 鎖)分 子、Treg 単分子、Treg 機能不可欠、IL-2 末梢 Treg 生存必須意味。 （）Treg 機能分子機構 Foxp3 発現正常細胞、 Treg 機能有細胞転換。 Foxp3 遺伝子発現制御抑制活性発揮解析 進。Foxp3 pro
6、moter 制御下 Cre 蛋白発現、 CTLA-4 遺伝子 loxP 部位挿入作製、 掛合、 Treg 特異的 CTLA-4 欠損条件的 作製、致死的自己免疫病、発症（Wing et al., Science, 2008） 。 Treg 抑制活性大幅失。 腫瘍免疫亢進、大部分自家腫瘍拒絶。 制御性細胞 CTLA-4 役割解析、重要機能、CTLA-4 抗原提示細胞上 CD80/CD86 分子相互作用結果、 CD80/CD86 分子発現 抑制、結果、他細胞活性化阻害結果得。 （Fehervari et al., Int. Immunol. 2004、Onishi et al., PNAS 200
7、8） 。 （）Treg 分子操作免疫応答制御 CTLA-4 分子含、Treg 発現分子操作免疫応答抑制 亢進可能。例、Treg 特異的発現分子群対単 抗体作製、型葉酸受容体(FR4)認識 。、FR4 葉酸結合阻害単抗体投与 、活性化 Treg 減少、結果、強力腫瘍免疫惹起 （Yamaguchi et al., Immunity, 2007） 。、FR4 強発現細胞調整 、増移植臓器対免疫寛容誘導。即、FR4 、Treg 特異的、Treg 標的創薬期待 。Treg GITR (glucocorticoid-induced TNF receptor- family-related gene/pro
8、tein)高発現（Ono et al., J. Immunol., 2006） 。抗 FR抗体 同、抗 GITR 抗 GITR 抗 CTLA-抗体全身的制御、腫瘍内 局所投与 Treg 抑制解除、強腫瘍免疫惹起示 （Ko et al., J. Exp. Med. 2006、他） 。、臓器移植、Treg 試験管内抗原特異的増殖増殖宿主戻移植免疫 寛容誘導（Nishimura et al., Int. Immunol. 2004、他） 。 1.3 今後展望 Foxp3+Treg 免疫応答“負”制御関与。今後、 発生機能分子、細胞研究進、病的、生理的免疫 応答制御応用図。 3 研究構想及実施体制 研
9、究構想及実施体制 (1) 研究構想 免疫応答抑制的制御、免疫自己寛容、生体恒常性維持重要 。CD25+CD4+制御性 T 細胞、正常個体末梢生理的存在特異 T 細胞集団、 免疫応答抑制的制御。 細胞集団機能的異常、 自己免疫疾患、直接原因。従、制 御性 T 細胞群機能明、自己免疫病新治療法 。、制御性 T 細胞機能人為的弱免疫応答増強、難治 感染症悪性腫瘍対免疫応答増強免疫療法開発可能。 一方、制御性 T 細胞抗原特異的増強、移植片対特異的免疫 寛容状態誘導。、本研究、CD25+CD4+制御性 T 細胞産 生機構、抑制機能、分子、細胞、個体解明 目標。即、制御性 T 細胞上発現抑制機能分子、増
10、殖活性 化関与分子同定、抑制機構、増殖活性化機構解明。、 胸腺内、末梢発生分化機構解明。展開、制御 性 T 細胞自己免疫病治療法開発、制御性 T 細胞機能強化移植 免疫寛容導入法、減弱腫瘍免疫誘導法、制御性 T 細胞機 能操作感染症治療法開発。方法用 前臨床的研究。 (2)実施体制 名 研究代表者又 主 共同研究者氏 名 所属機関部署役職名 研究題目 坂口志文 坂口志文 京都大学再生医科学研究所生体機能調節学分野教授 制御性細胞新免疫制御法開発 研究実施内容及成果 研究実施内容及成果 （）制御性 T 細胞上発現抑制機能分子同定。制御性 T 細胞上発現抑制機能分子同定。 制御性 T 細胞発生、分
11、化重要分子同定、解析、抑制機 能解析分子進。 1. Foxp3.Foxp3. FOXP3 、 遺 伝 性 疾 患 IPEX (Immune dysregulation, polyendocrinopathy, enteropathy, X-linked syndrome)原因遺伝子。 本疾患、制御性 T 細胞除去自己免疫疾患酷似、 Foxp3 制御性 T 細胞発生、機能果役割解析。結果、Foxp3 、胸腺、末梢 CD25+CD4+T 細胞特異的発現、 用正常、 T 細胞 Foxp3 導入制御性 細胞転換示。 以上結果、 Foxp3制御性T細胞発生、 機能遺伝子意味。、Foxp3 遺伝子4 操作自己免疫病炎症性疾患治療可能示唆。 2. CTLA-4.CTLA-4. Foxp3 遺伝子発現抑制機能発現、Foxp3 制御下流遺伝子産物抑制機能担考。 分子 CTLA-4 (cytotoxic lymphocyte-associated antigen-4) 焦点当。 我以前実験、 抗 CTLA-4 抗体一定期間投与、 制御性細胞除去相同自己免疫病誘導、試験管内 CTLA-4 抑制解除。 、
