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1、I C S1 1.1 0 0 C5 0中华人民共和国卫生行业标准W S/T4 6 32 0 1 5血清低密度脂蛋白胆固醇检测M e a s u r e m e n t o f s e r u ml o wd e n s i t y l i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l2 0 1 5 - 0 6 - 2 3发布2 0 1 5 - 1 2 - 3 1实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布前 言本标准按照G B/T1.12 0 0 9给出的规则起草。 本标准主要起草单位: 武汉大学中南医院、 北京医院老年医学研究所、 北京医院。本标准起草人:
2、 周新、 郑芳、 陈永梅、 陈文祥、 王抒、 董军。W S/T4 6 32 0 1 5血清低密度脂蛋白胆固醇检测1 范围本标准规定了血清低密度脂蛋白胆固醇测定及其质量保证的基本原则。本标准适用于实验室的血清低密度脂蛋白胆固醇测定, 也供有关体外诊断厂商参照使用。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 分析系统 a n a l y t i c a l s y s t e m适合对某检验项目在规定浓度范围内给出分析结果的一组按规定条件使用的仪器和装置, 包括试剂和物品。注1:对于临床生物化学检验, 分析系统主要由按规定条件使用的仪器、 试剂和校准物组成。注2:其他标准( 如G B/T2
3、2 5 7 62 0 0 8) 中的类似概念为“ 检验程序” , 但检验程序包括更广泛内容, 对于本文件, 分析系统相当于检验程序的分析部分。注3:改写I S O/I E C导则9 9:2 0 0 7, 定义3.2。2.2 验证 v e r i f i c a t i o n提供客观证据, 考虑任何测定不确定度, 说明给定事物满足规定要求。I S O/I E C导则9 9:2 0 0 7, 定义2.4 4注1:本标准主要是指分析系统的验证, 即某分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能指标一致。注2:有关概念是“ 确认” (v a l i d a t i o n) , 即“
4、规定要求” 满足指定用途的验证, 本标准的验证包含确认的含义。2.3 低密度脂蛋白胆固醇 l o wd e n s i t y l i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l;L D L - C应用经典的分离和定义脂蛋白的超速离心法, 按密度从低到高将脂蛋白分为乳糜微粒(C M) 、 极低密 度脂蛋白(V L D L) 、 中间密度脂蛋白(I D L) 、 低密度脂蛋白(L D L) 和高密度脂蛋白(H D L) 等。血清L D L是 指密度1 .0 1 9k g/L 1 .0 6 3k g/L的脂蛋白, 以L D L中的胆固醇(L D L - C) 物质
5、的量浓度(mm o l/L) 表示。血清L D L - C浓度的传统单位是m g/d L,m g/d L换算为mm o l/L的换算系数为0.0 2 59(1 mm o l/L=1m g/d L0.0 2 59) 。3 L D L - C的生物学特性和临床意义我国人群血清L D L - C第5百分位数和9 5百分位数分别约1.5mm o l/L和4.3mm o l/L。L D L - C个体内生物学变异约8%, 个体间生物学变异约2 6%。L D L - C主要用于动脉粥样硬化性心血管病危险分析。L D L - C升高是心血管病危险因素。国内外 成人血脂异常防治指南都以降L D L - C作为
6、心血管病患者降脂治疗的第一目标。划分L D L - C采用固定切点,L D L - C4 0 0m g/d L(4.5 2mm o l/L) 或某些异常脂蛋白血症的标本。显然, 用此公式计算L D L - C的可靠性受T C、T G、HD L - C三项指标测定质量的影响。5 样品采集与处理5.1 采用血清进行L D L - C分析。5.2 患者准备和血液样品采集应满足以下要求:a) 患者在采集样品前应处于稳定代谢状态;b) 患者在采集样品前至少2周内保持通常饮食习惯, 保持体重稳定;c) 患者在采集样品前2 4h内不进行剧烈体育运动;d) 患者在采集样品前禁食约1 2h;e) 患者在采集样品
7、前坐位休息至少5m i n;f) 静脉穿刺过程中止血带使用不超过1m i n。5.3 样品处理与存放应满足以下要求:a) 血液样品保持密封, 样品管处垂直状态, 封口朝上;b) 血液样品管轻取轻放, 避免剧烈震荡, 防止引起溶血;c) 血液样品在采血后1h2h内离心, 分离血清, 含促凝剂采血管可在更短时间内离心( 参照采2W S/T4 6 32 0 1 5血管说明书) ;d) 分离的血清样品在分析前保持密封;e) 血清在室温下的存放时间不大于4h, 若需贮存4h4 8h, 应存于4环境, 若需更长时间贮 存, 应置于-7 0以下环境; 血清不可反复冻融。6 分析系统6.1 分析系统选择6.1
8、.1 根据实验室实际情况选择适宜类型分析系统, 主要包括仪器、 试剂和校准物, 若采用半自动仪 器, 还包括适宜的移液设备和温育设备等。注1:仪器主要分自动和半自动仪器, 目前多数实验室采用自动生化分析仪, 小型实验室可能采用半自动分析仪。注2:可见下列类型分析系统: 封闭系统, 仪器、 试剂和校准物来自同一厂商, 供配套使用, 见于部分使用自动分析仪的情况; 开放系统, 试剂和校准物来自同一厂商, 供配套使用, 仪器另选, 见于部分使用自动分析仪的情况和使用半自动分析仪的情况; 组合系统, 仪器、 试剂和校准物来自不同厂商或机构, 由实验室自己组合, 见于部分使用自动和半自动分析仪的情况。6
9、.1.2 宜尽量选用封闭系统或开放系统, 必要时, 可使用组合系统。注:使用组合系统的理由, 可能是有证据表明配套校准物缺乏可靠性, 也可能是其他合理原因。6.1.3 宜尽量选用分析结果可溯源至公认参考系统( 参见附录A) 的分析系统。注1:美国疾病控制预防中心(C D C) 胆固醇参考方法实验室网络(C RML N) 运行L D L - C分析系统溯源认证计划, 该计划用多份(4 0) 患者血清将常规方法直接与参考测定程序或指定比对方法对比。C D C在其网站保持有效期内的通过认证的分析系统列表。注2:还可以有其他溯源方式,G B/T2 1 4 1 52 0 0 8对临床检验量值溯源原理及要
10、求做出说明。6.2 分析系统使用封闭系统和开放系统, 应按厂商说明使用; 使用组合系统, 或对分析系统做其他改变( 如各种分析参数、 条件或方式等) , 需有充足理由, 并需对分析系统性能进行充分验证( 见6.4) 。6.3 分析系统性能指标分析系统应达到下列性能指标:a) 所测的分析物与L D L - C定义( 见2.3) 一致, 一般情况下不受其他血清成分的明显干扰( 特异 性) ;b) 分析结果的总变异系数小于4%( 精密度) ;c) 分析结果的偏倚在4%范围内( 正确度) ;d) 测定范围1.2mm o l/L9.0mm o l/L。6.4 分析系统性能验证任何新选用的分析系统, 在用
11、于患者样品检验前, 应进行性能验证。可采用的验证程序参见附录B。下列情况应验证6.3所列全部性能:a) 采用封闭系统或开放系统, 厂商未给出6.3所列之性能指标;b) 采用封闭系统或开放系统, 厂商给出的性能指标不满足6.3之要求;c) 采用组合系统或做过改变的分析系统;d) 采用封闭系统或开放系统, 厂商给出6.3所列之性能指标且符合要求时, 可仅验证正确度。3W S/T4 6 32 0 1 57 质量控制和保证7.1 应根据工作经验、 行业交流、 科学文献等选用性能可靠的分析系统( 主要是试剂和校准物品牌) 。 应尽量保持使用同种分析系统, 不宜随意、 经常更换分析系统。7.2 应进行内部
12、质量控制。质控品应适宜用于脂蛋白分析, 足够均匀、 稳定, 浓度在医学决定水平附 近, 至少两个水平; 应尽量长期保持使用同种质控品, 不宜经常更换质控品; 每批检验至少分析一次质控品。注:有些商品生化质控品由于来源、 组成、 性质等原因, 可能不适宜用作L D L - C质控品。自制、 足量、-7 0以下温度保存的新鲜冰冻血清是L D L - C的良好质控品。7.3 应参加经卫生行政管理部门认定的室间质量评价机构组织的临床检验室间质量评价。8 结果报告应以我国法定计量单位mm o l/L报告L D L - C测定结果, 需要时, 另外给出传统单位m g/d L结果。以mm o l/L为单位的
13、结果保留小数点后2位有效数字。检验报告应注明医学决定水平, 需要时, 另外注明参考区间。L D L - C升高的判断, 需考虑分析变异、 个体内生物学变异及检验次数等因素。4W S/T4 6 32 0 1 5附 录 A( 资料性附录)L D L - C参考体系A.1 参考方法L D L - C尚无国际公认的参考方法。国际影响较大的L D L - C参考方法是美国疾病控制与预防中心 (C D C) 的超速离心/肝素-锰沉淀/AK胆固醇测定法(-定量法) 。此法用5m L血清在1.0 0 6k g/L的密 度下超速离心 离心条件:4 00 0 0r/m i n( 离心力1 0 50 0 0g) ,
14、4,1 8.5h , 切割中部离心管, 去除血清中 密度小于1.0 0 6k g/L的组分( 顶部组分, 主要为极低密度脂蛋白V L D L和乳糜微粒CM) , 将底部组分( 主要为HD L和L D L, 简称LHD L) 完全转移到5m L容量瓶中, 定容。准确吸取2m L底部组分到试管中, 用8 0L肝素(50 0 0U/m L) 和1 0 0L氯化锰(1.0m o l/L) 选择性沉淀LHD L中的L D L, 离心分离上清中的HD L。用C D C的胆固醇参考方法AK法测定LHD L和HD L中的胆固醇(LHD L - C和HD L - C) , 自LHD L - C中减去HD L -
15、 C得L D L - C。A.2 参考物质L D L - C没有国际公认的参考物质。美国国家标准与技术研究所(N I S T) 的参考物质1 9 5 1 b有L D L - C的参考定值, 定值方法为美国C D C的-定量法。我国有国家质量监督检验检疫总局批准的3种冰冻人血清L D L - C国家一级标准物质(G BW0 9 1 7 8,G BW0 9 1 7 9,G BW0 9 1 8 0) 。A.3 参考系统的应用方式及应用范围参考系统的应用方式包括应用参考物质或应用参考测定程序。L D L - C参考系统主要应用于以下方面:a) 分析系统的溯源和质量评价;b) 试剂的制备及质量评价;c)
16、 校准物质的制备、 定值及质量评价;d) 新常规方法的发展及评价;e) 室间质评计划中的靶值确定;f) 协作研究中血脂分析的质量保证。5W S/T4 6 32 0 1 5附 录 B( 资料性附录)L D L - C分析系统性能验证B.1 特异性、 精密度和测量范围评价B.1.1 概述采用分割样品对比评价特异性、 精密度和测量范围, 收集合适样品, 用待验证分析系统和另一分析方法( 对比方法) 同时分析样品, 比较分析结果。B.1.2 样品收集至少1 0份病人血清样品, 浓度在测量范围内基本均匀分布, 每份血清分装3份, 形成3套样品, 密封-7 0保存。B.1.3 对比方法首选参考方法或指定比对方法, 不可行时, 可选用另种常规方法, 最好是不同原理的方法, 且有证据证明是性能可靠的方法, 如经C RML N认证的方法。B.1.4 实验过程上述3套样品, 分3次独立实验, 用待验证方法和对比方法分析L D L - C。B.1.5 计算B.1.5.1 计算每份病人样品待验证方法3次分析结果的变异系
