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1、1同步荧光法测定复合维生素 B 片中的维生素 B2 和 B6一、 实验背景B 族维生素是一类重要的水溶性维生素，人体缺乏 B 族维生素可导致多种疾病的发生，如口角炎等。而人体自身无法合成 B 族维生素，因此只能通过摄取食物获得，也可通过服用维生素药片加以补充。因此，各种维生素 B 的含量测定对于复合维生素 B 片的质量评价十分重要。二、实验目的1、学习和掌握同步荧光光谱法测定的原理。2、学习和掌握荧光分光光度计的使用方法。3、学习用标准曲线法进行定量分析。三、实验原理B 族维生素中，维生素 B2 和维生素 B6 为荧光物质，因此可采用荧光光谱法对其进行定量测定。但由于它们的荧光光谱部分重叠，从
2、而影响了同时定量分析的准确性。同步荧光光谱法是荧光分析中的一种重要技术。与常规荧光分析法相比，同步荧光分析法具有简化谱图、提高选择性、减少光散射干扰等特点，尤其适合多组分混合物的分析。同步荧光分析法与常规荧光测定方法最大的区别是：同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长（或发射波长）构成光谱图，称为同步荧光光谱。在同步荧光测定中，当实验条件一定且被测组分的浓度较低时，其同步荧光信号强度 I 与浓度 c 成正比，即I = Kc据此可对被测组分进行定量分析。本实验采用同步荧光光谱法对复合维生素 B 片中的维生素 B2 和维生素 B6进行同时测定。以维生素 B2 和维生
3、素 B6 混合标准溶液的同步荧光光谱强度对其浓度绘制标准曲线，再根据被测样品溶液的同步荧光强度，由标准曲线计算出复合维生素 B 片中维生素 B2 和维生素 B6 的含量。四、仪器与试剂1、仪器F-4600 荧光分光光度计（日立），1cm 石英样品池，分析天平，研钵，25mL、 100mL 容量瓶，5ml、10ml 吸量管，吸耳球。2、试剂维生素 B2（40g/mL），维生素 B6（5g/mL），0.2mol/L Na 2HPO4-0.1 mol/L 柠檬酸缓冲溶液（pH 7.0），复合维生素 B 片。五、实验步骤1、维生素混合溶液的配制分别准确移取 0.50mL、1.00mL、1.50mL、2
4、.50mL、3.50mL 维生素 B2、维生素 B6 于 25mL 的容量瓶中，加入 10mL 缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀，得到 1-5 号维生素混合标准溶液。22、药片样品溶液的制备取复合维生素 B 片 10 片，于研钵中研磨成粉。称取约 0.05g 的粉末，精密称定。用去离子水水溶解并定容至 100 mL，摇匀，待用。准确移取上述溶液 5.00mL 于 25 mL 容量瓶中，加入 10 mL 缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀，待测。3、样品的测试按荧光光谱仪的操作规程开启仪器并预热 20 分钟，按下述方法设置仪器参数并进行测定。1）仪器参数设置打开荧光光谱测试软件 FL Solution
5、s，在 method 的 general 中选择波长扫描模式，在 instrument 中选择 Synchronous（同步扫描） ，设置参数 Ex Start WL=280nm， Ex End WL=520 nm，Em=320nm ，其他参数选择默认值。2）同步荧光测定的参数优化选择 1 号维生素 B 混合标准溶液进行同步荧光测定的参数优化。分别设置Em 值=320nm、340nm、 350nm、360nm 和 380nm，使得同步荧光中参数 分别为 40、60、70、80、100nm，记录维生素 B2 和 B6 的荧光峰值强度，得到最佳的 值。3）标准曲线的绘制在选定的最佳 下，对 2-5
6、 号维生素 B 混合标准溶液进行同步荧光测定，记录维生素 B2 和 B6 的荧光强度，根据维生素 B2 和 B6 的浓度和荧光强度绘制标准曲线。4）样品测定在选定的最佳 时，对复合维生素 B 片样品溶液进行同步荧光测定，记录维生素 B2 和 B6 的荧光强度，根据维生素 B2 和 B6 的标准曲线计算复合维生素 B 片中维生素 B2 和 B6 的含量。六、数据记录与结果分析1、记录同步荧光实验条件和相关参数/nm 40 60 70 80 100VB6 荧光峰值强度 IVB2 荧光峰值强度 I2、记录实验数据，绘制标准曲线维生素 B2维生素 B6浓度 c/(g/mL)荧光强度 I浓度 c/(g/
7、mL)荧光强度 I33、复合维生素 B 片维生素 B2 和 B6 的含量测定B2 B6荧光强度 I含量(mg/g)七、思考题1、简述荧光光谱法的基本原理。与吸收光谱法相比，荧光光谱法有哪些特点？2、为什么同步荧光法可使光谱简化、谱带变窄？3、 值对同步荧光光谱有哪些影响？八、参考文献1 许金钩，王尊本 . 荧光分析法（第三版）, 北京：科学出版社，20062 朱明华，胡坪 . 仪器分析（第四版），北京：高等教育出版社，20083 李耀群，黄贤智等 . 维生素 B2 和 B6 的同步荧光分析法及其在维生素复合制剂中的应用，药学学报，1992，27：52-564 蒋淑艳，金树伟 . 同步荧光法同时测定药物中维生素 B1、B 2、B 6 的条件研究，药物分析杂志，1997，17：182-184
