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1、临床化学中的干扰实验核准的指导原则第二版1. 概览本文件用于以下两个目的：1) 通过提供科学有效的实验设计，指定待检测的相关干扰物质及浓度和阐明正确的数据分析与解读，来协助制造商以及其他实验室检测方法研发人员来确定检测方法对干扰物质的敏感程度。这样可以评估出潜在的干扰危险物，也可以向用户提供有意义的干扰声明；以及2) 通过定义系统性研究策略，确定数据收集和分析要求以及促进实验室用户和制造商之间更广泛的合作，来协助临床实验室研究由于干扰物质存在而产生的异常结果。这样，新的干扰物可以被鉴别、揭示并最终消除掉。本指导原则用于体外诊断医疗设备制造商以及临床实验室。制造商以及其他实验室检测方法研发人员有
2、责任有责任确定由于干扰物质引起的误差而对其检测方法的分析性能造成的影响以及对病人的潜在伤害。制造商被要求向使用其系统的用户提供关于干扰敏感度的有关信息。备注：本文件中“制造商”系指研发用于临床实验室的检测方法的任何个人以及企业。临床实验室有责任确保其检测方法的特异性能够满足其客户的需求。实验室同样应该研究异常结果，鉴别干扰物质并向提供分析系统的制造商提供客观的反馈。2. 介绍2.1 检测方法任何检测方法。不论是定性的还是定量的，都可能受到干扰。本文件广泛适用于各个检测方法以及分析仪器。有可能需要做出适当修改，以适应不同流程的特点。附录 A 中讨论了两个具体的方法原则（分离技术以及免疫化学检测方
3、法） 。2.1.1 标本类型使用本指导原则可以评估使用血清、血浆、全血、脑脊髓液、尿液以及其他大多数体液的检测方法中的干扰。2.1.2 干扰物质潜在的干扰物质可能来源于以下内源性以及外源性途径： 病理情况下产生的代谢物，如糖尿病、多发性骨髓瘤、瘀胆型肝炎等等； 治疗过程中引入的物质，如药物、肠胃外营养、血浆容量扩张剂、抗凝剂等等； 病人摄入的物质，如酒精、药物滥用、营养添加物、各种食物与饮料等等； 标本准备过程中添加的物质，如抗凝剂、防腐剂、稳定剂等等； 标本处理过程中无意引入的污染物，如手霜、含粉手套、血清分离管，收集管胶塞等等； 标本自身的基质，如不同于理想新鲜标本的理化性质。2.2 概念
4、与科学原则2.2.1 干扰对不精确度的影响不准确度（总分析误差）共由三部分组成：不精密度、方法特异性偏差以及标本特异性偏差。检测方法评价通常只评价前两项。标本特异性偏差（即干扰） ，通常被视为特定样本的独立问题，而非过程的可量化的特征。从评估的观点来看，干扰敏感性可引起系统误差与随机误差，两者都可以作为不准确性（总分析误差）的组成部分进行分析学上的量化。 对于给定的病人群体，标本中干扰物质的平均浓度会引起系统性偏差，其会被涵盖于偏差评估中。相对于均值的个体偏差，会在与另一更精确的检测过程的比对中，构成总随机误差的一部分。对于部分检测而言，随机干扰效应，会超越不精密度，成为随机误差的主要来源。
5、对于病人个体而言，干扰物质引起的误差取决于其在病人标本中的浓度。干扰物浓度改变，偏差度随之改变。偏差引起的结果变化，可能被错误的解读为病人体征的变化。2.2.2 临床相关性在临床医学中，干扰必须从临床的角度评估。临床相关性决定了一个分析效应究竟是否应该考虑为干扰。待测物的形式和浓度基准必须被清晰的定义。矛盾的是，某些检测过程可能反映出待测物的真实浓度，但却并不一定是临床相关值。比如火焰光度法和间接电势测量法能正确测量出血浆中钠的含量，不论脂浓度为多少。然而，如果脂浓度较高，这些方法可能会将电解质平衡正常的病人，检测为低钠血症。在这个例子中，直接电势测量法可以准确报告正常钠水平，因为其是对血浆水
6、相中的钠活性做出反应，而钠活性正是机体调节的。因此，从临床的角度来看，对标本中总钠的过高估计是合适的。在尝试解读干扰试验结果之前定义临床相关浓度是很重要的。2.2.3 预分析效应分析前待分析物的变化或者是浓度的改变，通常被定义为预分析效应。尽管这种效应可能会“干扰”实验室结果的临床用途，其并不能算分析干扰。除非明确说明，否则检测过程应该同时检测标本中所有的待分析物质，不论其来源为何。常见的预分析效应有： 体内（生理学）药物效应，受药物影响的循环激素浓度； 待分析物的化学变化，如水解、氧化、光解等等； 待分析物的物理变化，如酶的变性； 标本的挥发或稀释；以及 附加待分析物的污染（比如来自静脉注射
7、的盐，与凝血块接触时间延长导致的葡萄糖损失或者溶血带来的红细胞内成分。2.2.4 相对干扰干扰的计算是相对于对照中的待分析物的测量而言的。在某些情况下，对照组中可能会含有一定量的内源性干扰物质（对照组中病人群体的物质浓度的平均值） 。常见的例子有胆红素、血红蛋白、蛋白质和脂类。有些检测方法会按照干扰物的平均浓度进行抵消或修正，从而减小针对病人群体检测的干扰效应。典型的方法有样本预处理、空白化、血清基质校正以及数学校正。当病人标本中的干扰物浓度大于或者小于病人群体平均浓度时，误差会被引入。比如，某个被蛋白质干扰的药物检测方法，其偏差为 0.05mol/L 每 1.0g/dL 蛋白质。因为血清标本
8、中蛋白质平均浓度为 7.0g/dL，其相对于无蛋白对照组的平均偏差为 0.35mol/L。如果用上述方法之一将偏差消除，针对个体标本的蛋白质效应将是相对于平均蛋白浓度7.0g/dL 条件下的 0.05mol/L 每 1g/dL 蛋白浓度升高/ 降低。含 7.5g/dL 蛋白的标本的偏差将变为+0.025mol/L ，而非+0.4mol/L。除非样本里的蛋白含量刚好是 7.0g/dL，否则每份病人标本的药物检测结果将呈现较小的正/负偏差，其取决于真实的蛋白质浓度。以下信息对例子进行了扩展。假设假定药物的真实浓度是 25.0mol/L，检测方法受蛋白影响的程度如上所述。注意在偏差校正过的系统中，蛋
9、白质引起的误差范围仅有+0.20mol/L，而在偏差未校正过的系统中，蛋白质引起误差范围为+0.15mol/L 到+0.55mol/L。2.2.5 干扰机制分析过程可能会被干扰物质通过多个途径干扰。 化学干扰。干扰物可能通过与试剂竞争或者阻碍指示剂的反应来压制反应。其也可能通过络合或者沉淀改变待分析物的形态。 检测干扰。干扰物可能有与分析物相似的，能够被检测或者测量到的性质，如荧光、颜色、光散射、洗脱位点或电极响应等。 物理干扰。干扰物可能会改变标本基质的物理性质，比如粘度、表面张力、浊度或离子强度，从而引起待分析物质浓度明显的变化。 酶抑制。干扰物可能会通过分离激活金属离子，与催化位点结合或
10、者氧化必需的巯基等等来改变酶的活性（待分析物或者试剂） 。在基于酶反应等检测方法中，干扰物也可能与酶竞争某个关键基质。比如腺苷酸激酶与肌酸激酶竞争结合 ADP，因此在某些检测中会被错误的检测为肌酸激酶。 非特异性。干扰物可能会与待分析物有相同的反应。尽管干扰物有着不同的非特异性机理，但其实践效应对于实验室是一样的。一些常见的例子：碱性苦味酸肌酸酐检测过程酮酸的干扰；重氮胆红素检测中硫酸吲哚酚的干扰。 交叉反应性。在免疫化学检测过程中，与某个抗原结构相似的干扰物可能会与抗体发生“交叉反应” 。这是非特异性的一种形式。比如，咖啡因在某些茶碱检测过程中会被检测到。交叉反应性的程度被视为对于免疫化学检
11、测特异性的考核，但对于干扰敏感程度的考核并不是一个有用的指标。 水置换。非水性物质（蛋白、脂类）通过置换水相等离子体，影响基于活性检测的测量体系。如果打算检测等离子水相中的待分析物浓度时，这些效应可以不用考虑为干扰。3 标准预防措施。因为通常不可能知道哪种分离物或者标本可能会有传染性，所有的病人和实验室标本都要被看做是传染性的并依照“标准预防措施”进行处理。标准预防措施是结合了通用预防措施与人体物质分离的主要特征的指导措施。标准预防措施涵盖了所有传染性物质的传播，因而比仅仅用于血液病原体传播的通用预防措施更加广泛。标准预防措施与通用预防措施指导原则均可在美国疾病控制与预防中心下载与索取。如需更
12、具体的关于防止实验室设备与材料中所有传染性物质的传播的预防措施以及关于暴露于传染性疾病的风险管理的推荐方案，请参考 CSLIM29 文件最新版本Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections。4 定义准确度测量结果和测量物的真实值的吻合度。备注：参考测量物的定义。 误差/I 型错误错误拒绝空白假设（物质不发生干扰）的可能性。备注：参考置信水平的定义。对立假设在干扰试验中，在指定的幂下检测，物质引起的干扰大于指定限制的情况。备注：参考：幂和 误差的定义。待分析物作为可检测物质存在的组分。备注 1：在
13、物质类型“24 小时尿液中的蛋白质量”中，蛋白质是待分析物。在“血浆中葡萄糖含量”中，葡萄糖是待分析物。备注 2：待分析物是对病人有意义的特定组分。分析特异性检测过程只检出检测物的能力。异常结果参见差异结果的定义。 误差/II 型错误错误拒绝对立假设（物质发生干扰）的可能性。备注：参见幂的定义。偏差检测结果预期值与可接受的参考值之间的差异。备注：在本文件中，节 7 中“可接受的参考值”是指同一检测方法中在没有干扰存在的情况下获得的结果。在节 8 中是指对比性检测方法的结果。临床显著性在评估检测方法的背景下，误差改变内科医生对于病人进行诊断、治疗或者管理的潜在可能性的重要性。对比性检测方法在评估
14、检测方法时，作为确定标本中待分析物质真实浓度的较精确的检测方法。置信水平与置信区间关联的可能性的数值（1-） 。备注 1：可能性通常以百分比表示：100（1-）%；备注 2：参见 误差的定义。差异结果/异常结果/假结果与从同一标本采集到的另一结果，从另一检测系统获得的结果或者与确证的临床诊断的临床显著度不一致的结果。药物效应常用于描述药物对于某物质体内浓度的生理学影响，与之对照的是在分析过程中的体外效应内源性干扰物标本中生理产生的，能够对另一物质检测过程产生影响的物质（如胆红素或血红蛋白） 。外源性干扰物来源于体外的，能够对标本中另一待分析物检测过程产生干扰的物质（如药物或其代谢物，标本防腐剂
15、或者标本污染物） 。析因实验将所有可能的影响因素组合考察完全的实验设计。这些组合由两个或多个因素组成，每个因素考察两个或多个水平。这样反应性（差异效应）以及主要效应都可以被评估出来。不精密度特定条件下获得的独立的检测结果的散布。备注：常表达为“标准差”或者“变异系数” 。不准确度测量值与真实值之间的数值差异。备注 1：参见准确度的定义；备注 2：参见总分析误差的定义。干扰在临床化学中，由于另一组分的影响或者标本的性质导致的待分析物检测浓度的临床显著差异的原因。备注：其可能由于检测系统的非特异性、指示剂反应的阻遏、待分析物的阻遏或者一些其它标本依赖性偏差。干扰声明描述检测方法中某物质可能造成影响
16、的说明。备注：常见于产品的“方法局限性”条目下。干扰标准有改变内科医生对病人进行诊断、治疗或管理的潜在可能的，待分析物浓度与真实值之间的偏差的最大容许干扰度。干扰筛选在分析系统的评估中，用于鉴别可能存在干扰的常见物质的一系列加入高浓度干扰物的实验。干扰敏感度检测方法针对来自于其它组分或标本性质引起的干扰的误差的敏感度。干扰基质/干扰物本术语按照 VIM 的模式定义为“影响物质” ，即不是检测物的却能影响检测结果的物质。基质物质系统中，除待分析物外的所有组分。基质效应标本性质对于特定检测过程中检测值的影响。备注：粘度、表面张力、浊度、离子强度以及 pH 是常见的基质效应产生因素。待测物针对检测的特定的量值。备注 1：本定义涵盖所有量值，常用的术语“待分析物”则指测量过程涉及到的具体的物质（即，待测物描述了引发检测结果的“物” 【如，酶活性】 ，待分
