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一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施亚硫酸氢钠修饰 DNA 的目的是将 DNA 序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的 5 一甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的 pH 值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致 MSP 扩增失败，体会如下：(1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在 3039 mol/L 为好，其 pH 值必须用NaOH 精确调整至 50；(2)修饰时间应掌握在 1016 h，修饰时间过长会导致甲基化胞嘧啶也会转化成尿嘧啶且 DNA 模板破坏加剧，而时间过短会导致修饰不彻底；(3)反应温度应控制在 5055(若用国产恒温水浴箱建议温度设定在 53为好)；(4)DNA 模板量应控制在95。C，10 rain)和变性温度(95 ，1 min)，退火温度以 60作梯度或 70作降落 PCR。总之，在 MSP 全过程中，影响结果的因素较普通 PCR 要多得多，只要对实验过程每一步认真控制可完全提高 MSP 的准确度和精密度。
