《磁珠法FFPE组织基因组DNA提取试剂盒》由会员分享，可在线阅读，更多相关《磁珠法FFPE组织基因组DNA提取试剂盒（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、磁珠法FFPE 组织基因组 DNA提取试剂盒MagBeads FFPE DNA Extraction Kit【目 录 号】FFDE-5010、FFDE-5030 、FFDE-5100 ；【运输条件】225；【保存条件】磁珠悬浮液 28，蛋白酶K -20，其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成FFDE-5010（ 100T）FFDE-5030（ 300T）FFDE-5100（ 1000T） FFDE Magnetic Beads磁珠悬浮液10mL 30mL 100mL FFDE Buffer ML裂解液 40mL 120mL 400mL FFDE Wash Buffer
2、清洗液 60mL 180mL 600mL Proteinase K Solution蛋白酶 K 溶液 2mL 6mL 20mL Elute Buffer洗脱液 20mL 45mL 100mL【注意事项】1）磁珠悬浮液 严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2）使用前检查 裂解液中是否出现沉淀，如有沉淀请置于37水浴温热至恢复澄清；3）蛋白酶K溶液长期不使用，请置于-20 保存，融化后 4保存，并尽快使用；4）本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。1磁珠法自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒适用于从石蜡包埋组织切片、
3、石蜡块、或福尔马林等固定液中的组织样本中分离纯化基因组DNA。试剂盒首先使用二甲苯去除样本中的石蜡或者福尔马林，基因组DNA 在裂解液环境下得以快速释放，并结合于磁珠表面，经清洗、洗脱等步骤之后，得到高质量的基因组DNA，OD260/280比值在1.71.9 之间，完整性好，可直接应用于PCR模板、杂交、STR、以及SNP等下游分子生物学实验。操作过程简便、快速。本试剂盒可手动法进行操作，也可以配合核酸提取仪实现自动化操作。【试剂盒说明】样本类别 样本量 说明石蜡包埋组织切片（FFPE） 28片 切片厚度 510m、面积1cm 2石蜡组织块（FFPE） 30mg 尽量去除石蜡福尔马林等固定液样
4、本 30mg 尽量切成小块本试剂盒提取结果和组织类型、样本固定效果以及储存条件等因素密切相关。一般来讲，固定时间越久、保存时间越长的样本，基因组DNA受损程度越高。制作FFPE样本时应注意：1 ）组织在福尔马林中固定时间不宜过长，否则DNA易交联和断裂；也不可以太短，否则组织固定不充分，核酸易降解。一般来讲，以固定时间在824h为宜；2）确保样本在石蜡包埋以前脱水完全，并尽量去除残留的福尔马林。【自备试剂】异丙醇、80%乙醇、二甲苯、PBS溶液（pH值7.4）、RNase A溶液(100mg/mL ，分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0) 。【自备仪器和耗材】手
5、动版：EP 管、EP 管用磁力架、金属浴、涡旋震荡仪。仪器自动版：英芮诚ETP-300核酸提取仪、金属浴、 96孔方孔圆底板、EP管。【仪器自动版操作步骤】本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成 32份样本的提取。1 96 孔板加液参照下表，向96孔板各孔位中加入相应试液：2磁珠法 FFPE 组织基因组 DNA 提取试剂盒样本孔位 1、7 2、8 3、9 4、 10 5、 11 6、 12试剂 磁珠悬浮液 100L 异丙醇400L 清洗液600L 80%乙醇600L 80%乙醇600L 洗脱液100L2 样本前处理1) FFPE组织样本取28张石蜡包埋组织切片或30mg
6、石蜡组织块，转移至1.5mL EP管中；向EP 管中加入1mL 二甲苯，剧烈涡旋震荡 10s，13,000g室温离心 2min，吸弃上清液；向EP管中加入1mL 无水乙醇，涡旋混匀 90s，13,000g室温离心 2min，吸弃上清液，室温放置510min至无明显乙醇味。注： 暴露在空气中的石蜡包埋样本，最初刮取的 23 片请弃掉不用。2) 福尔马林等固定液中的样本取30mg 样本尽量切成小块，转入1.5mL EP管内；加入500L pH值为7.4的PBS溶液，涡旋振荡混匀，13,000g室温离心1min，吸弃上清液体，该操作重复 3次。3 样本裂解向装有样本的EP 管中加入400L裂解液和2
7、0L 蛋白酶 K溶液，摇匀后置于58环境温浴1h，样本应完全溶解。注： 如需去除 RNA，可加入 2L RNase A 溶液，室温孵育 2min 后，再进行下一步操作。4 上机提取将EP管瞬离使裂解液集中至管底，将上清全部转移至96孔板第2/8列孔位中。将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，运行 “石蜡样本DNA 提取程序”。“石蜡样本 DNA 提取程序 ”各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定。5 核酸转移程序运行完毕，将洗脱液转移至干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。3磁珠法自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【手动版操作步骤】
8、1 样本前处理参照【仪器自动版操作步骤】中步骤2进行操作。2 样本裂解参照【仪器自动版操作步骤】中步骤3进行操作。3 核酸结合瞬离将EP管中裂解液集中至管底，加入100L磁珠悬浮液和400L异丙醇，颠倒混匀后高速涡旋振荡6min，然后静置2min 。4 磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s 至磁珠吸附完全，如 EP管内盖有磁珠残液，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒23次，使磁珠完全被磁力架吸附。保持 EP管固定于磁力架上，用移液枪完全弃去上清液，期间避免接触磁珠。5 清洗1) 向EP管中加入600L清洗液，将EP管从磁力架上取下并剧烈摇晃，使磁珠充分分散，涡旋震荡2min ，参照 步骤4 进行磁性分离。2) 使用600L 80%乙醇，参照步 骤5(1) 清洗2次。6 除醇将除尽上清液后的EP 管保持在磁力架上，打开EP管盖，室温放置810min 至没有明显乙醇味。7 核酸洗脱向EP管中加入 50200L洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将 EP管于58金属浴加热洗脱 10min，每隔3min 涡旋振荡30s 。8 核酸转移将EP管置于磁力架上静置20s 至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可以弃去磁珠。版权声明： 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南的所有权利。版本：V201702.251
