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1、天津农学院毕 业 论 文中文题目:TDZ 对蓝莓茎段和叶片离体培养的影响英文题目:Effects of TDZ on Blueberry Stem Section andLeaf Culture in Vitro学生姓名 杨坤 二级学院 园艺园林学院 系 别 园艺系 专业班级 2013 级园艺专业蔬菜班 指导教师 柴慈江 成绩评定 2017 年 6 月目 录1 前言 12 材料与方法 22.1 试验材料 22.2 试验方法 23 结果与分析 33.1 不同 TDZ 浓度对同一蓝莓品种下茎段的影响 33.2 不同 TDZ 浓度对同一蓝莓品种下叶片离体的影响 43.3 TDZ 浓度和品种处理组合对
2、蓝莓试管苗茎段培养的影响 53.4 不同品种下相同 TDZ 浓度对蓝莓茎段的影响 83.5 不同品种下相同 TDZ 浓度对蓝莓叶片离体的影响 93.6 品种与 TDZ 浓度处理组合对蓝莓叶片离体培养的影响 94 讨论 114.1 不同 TDZ 浓度对不同品种蓝莓茎段的影响 114.2 不同 TDZ 浓度对不同品种蓝莓离体叶片的影响 114.3 不同蓝莓品种对 TDZ 培养效果的差异性 125 结论 13参考文献 14致谢 15附录 1 相关英文文献 16附录 2 英文文献中文译文 21摘 要此项研究有关 TDZ 对于蓝莓茎段和叶片离体培养的影响。在附加 6-BA0.5mg/L 和 0.1mg/
3、L 的 IBA 的 WPM 培养基中，分别加入0、0.003、0.006、0.012、0.018mg/L 的 TDZ，接种蓝莓试管苗茎段或叶片进行培养。结果表明当 TDZ 浓度为 0.003 mg/L 时北陆蓝莓茎段培养结果的各项指标达到最佳，繁殖系数为 16.5；当 TDZ 浓度为 0.012mg/L 时，蓝丰和北陆蓝莓叶片离体培养结果的各项指标达到最佳，且叶片的芽分化率为 53.3%，每叶片平均分化 1.37 个芽。TDZ 可促进北陆茎段培养中繁殖系数的提高，但对斯巴坦和瑞卡的茎段培养有抑制作用。在含有不同浓度 TDZ 的培养基中，北陆、蓝丰和爱国者 3 个蓝莓品种的叶片离体培养效果没有表
4、现出明显的差异。关键词: 蓝莓；试管苗；TDZ；茎段培养；叶片培养ABSTRACTThe aim of this study was to investigate the effects of TDZ on the in vitro culture of stem segments and leaves of blueberry. With 0, 0.003, 0.006, 0.012, 0.018mg/L TDZ added in WPM medium with 6-BA0.5mg/L and 0.1mg/L IBA, the stem section culture or leaf cul
5、ture of blueberry were carried out. The results showed that when TDZ was 0.003mg/L the propagation coefficient of the blueberry stem sections was 16.5 which was the best. With the TDZ concentration of 0.012mg/L the leaf culture had the best effect, with bud differentiate rate of 53.3% and bud number
6、 of 1.37 per leaf.TDZ could increase the propagation coefficient of the “north land blueberry stem sections but could decline the propagation coefficient of the “Sbutan” and “Ruika” blueberry stem sections. In media with different concentration of TDZ the leaf culture effects had no significant diff
7、erence among “Patriot ”, “Blue crop” and “north land” blueberry cultivars.Keywords: Blueberry; plantlet in vitro;TDZ;stem section culture; leaf culture1TDZ 对蓝莓茎段和叶片离体培养的影响杨坤（天津农学院 园艺园林学院）1 前言蓝莓又名越桔、蓝浆果，为多年生落叶的灌木且果实多为浆果类。蓝莓富含多种保健功效并且多含维生素等，具有较高的经济价值和广阔的开发前景 1。在蓝莓育苗方面用常规扦插法相比速度就比较慢，并且在繁殖方面还受到扦插条数的限制的同
8、时短期内还不能满足生产需求，而且常规扦插方法繁育的苗木在生长势、果实品质等方面与组培苗相比有很多不足之处 2-3。所以就目前技术来讲进行蓝莓优质苗木的组织培养快速繁殖技术是最为优选的 4。蓝莓组织培养快速繁殖的关键是丛生芽的诱导、增殖与生根，以及组培苗的炼苗与移栽 5。近几年国内对蓝莓快速繁殖组织培养的技术的研究已经比较成熟并且已经在生产中得到应用。茎芽增殖是植物组织培养快速繁殖技术的关键环节之一，而对于蓝莓试管苗的茎芽增殖有许多研究。龚雪元等利用两种优良成熟蓝莓的茎段腋芽为外植体，研究了基本培养基、植物生长调节剂对诱导蓝莓丛生芽增殖的影响，剪除丛生芽对诱导新一代丛生芽增殖的影响，同时进行了试
9、管微芽的继代增殖培养。其结果表明，南高丛蓝莓丛生芽最佳诱导培养基为 WPM+ZT2.5 mg/L，试管微芽继代增殖最适培养基为 WPM+ZT0.3mg/L；兔眼蓝莓丛生芽最佳诱导培养基是 WPM-A+ZT2.5 mg/L，试管微芽继代增殖最佳培养基是 WPM+ZT 2.0mg/L，从而得出结论，在诱导新一代丛生芽时对老的丛生芽进行剪除有着显著的促进作用 6。沙玉芬等在研究蓝莓茎段组织快繁技术方面，以北高丛蓝莓品种杜克为试材，春季一年生新梢茎段为材料进行组织快繁，结果表明最佳增殖培养基改良 WPM+ZT 1.0 mg/L，增殖系数为 12.8，生长健壮，平均株高 4.8 cm 7。廉家盛等以蓝莓
10、“美登”品种为外植体作为相关试材料，结果表明以 B5 培养基中加入 2.0 mg/L 的 ZT，pH 值在 5.4 时不定芽分化数量最多，其中玉米素最佳浓度为 2.0 mg/L，附加 2%蔗糖的 WPM 培养基上外植体芽的诱导率最高，生长最旺盛，效果较理想 8。李杰等研究也认为，蓝莓外植体芽诱导培养基中 ZT2的浓度以 2.0mg/L 最好 9。目前蓝莓组织培养快速繁殖中的茎芽增殖培养基普遍使用 ZT 促进芽的萌发，但是 ZT 价格比较昂贵，寻找 ZT 的廉价替代品对降低蓝莓试管苗的成本具有一定实际意义。叶片培养是培育转基因植物的基础性工作。蓝莓的叶片培养目前已有一些报道。孙阳等在蓝莓品种叶片
11、离体再生及生根技术研究方面，以Sierra、Bluecrop 和 Toro 蓝莓品种试管苗为试材，以改良 WMP 为基本培养基，研究不同浓度的玉米素和生长素对 3 个蓝莓品种叶片离体再生分化率及生根速度的影响。结果表明不同品种对于叶片离体再生的能力不同，以 Toro 叶片再生能力最强，Bluecrop 最差，玉米素浓度在 0.15 mg/L 时对蓝莓叶片离体再生效果最佳，而生长素对于蓝莓叶片的再生离体再生影响较小。不同品种之间的叶片生根速率差异也十分显著，当玉米素浓度为 0.15 mg/L，生长素浓度为 0.01 mg/L 时，三个品种叶片离体再生效果最佳，从而优选出诱导分化率较高的蓝莓品种
12、Toro 和 Siena10。崔光荣等同样以高灌蓝莓试管苗叶片作为外植体，以改良 WPM 为基本培养基，研究外源激素 TDZ,ZT 及其组合对离体叶片胚状体发生的影响。结果表明不同浓度的 TDZ，ZT 以及组合对胚状体的发生频率、丛芽的形成和生长起重要作用，适合高灌蓝莓叶片胚状体发生及成苗的培养基为WPM+TDZ0.04 mg/L+ZT0.25-2.0 mg/L+蔗糖 20-40 g/L，而培养基 WPM+ZT0.5-1.0 mg/L+蔗糖 20g/L 适合于丛芽继代生长 11。TDZ 是一种人工合成的苯基脲衍生物，已被广泛应用于植物组织培养形态发生的高效生物调节剂。它能诱导外植体从愈伤组织形
13、成到体细胞胚胎发生的一系列不同反应，具有生长素和细胞分裂素双重作用的特殊功能 12。TDZ 在组培中应用广泛，植物中许多生理生化现象受 TDZ 影响。近年来研究初步表明， TDZ 是通过调节内源激素起作用，或是诱导胁迫的结果 13。在有关运用 TDZ 作为植物生理激素调节剂的实验和研究也普遍存在的。例如 TDZ 对甜椒的不定芽分化的影响，以甜椒的子叶、真叶、下胚轴为外植体，采用了不同浓度的 TDZ 与 IAA、6-BA 的配比，对甜椒不定芽分化的研究，结果表明在诱导过程中添加 TDZ 能够很好得提高分化效率 14。利用 TDZ 能否替代 ZT 进行蓝莓试管苗茎芽增殖的培养，目前未见研究报道，蓝
14、莓叶片培养中虽然有一些研究中使用了 TDZ，但 TDZ 的效果不尽一致。因此，本项研究的目的在于探讨 TDZ 对于蓝莓茎段茎芽增殖培养的效果，以及3TDZ 与 6-BA 及生长素搭配后对蓝莓叶片离体培养的影响，为降低蓝莓试管苗的培养成本及完善蓝莓叶片培养技术提供依据。2 试验材料与方法2.1 试验材料在含有 1.0mg/LZT 的 WPM 培养基中进行蓝莓试管苗的继代培养，当试管苗茎生长至 30cm 以上时，取试管苗茎段或叶片用作本项研究的试材。2.2 试验内容与方法2.1.1 不同 TDZ 浓度影响蓝莓试管苗茎段培养效果的研究该试验为 TDZ 浓度和蓝莓品种两因素试验， TDZ 浓度设计为 0 mg/L、 0.003 mg/L 、0.006 mg/L 、0.012 mg/L、0.018 mg/L5 个水平，蓝莓品种设计为北陆（B） 、斯巴坦（S）和瑞卡（R ）3 个水平。在含有 6-BA0.5mg/L和 IBA0.1mg/L 的
