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1、1胆石症患者胆囊黏膜免疫复合物及血清 CIC 和 Ig的变化作者：周玉宝 赵智凝 邵景元【摘要 】 目的: 研究免疫复合物（IC ）在胆石症发生发展中的作用及意义. 方法 : 胆石症患者 101 (男 39, 女 62)例, 年龄(48.414.4)岁,手术切除胆囊组织切片 IC 免疫组化染色，术前和术后 5 d 测定循环免疫复合物（CIC）和 Ig. 结石行 IC 免疫组化染色. 结果：与健康对照组比较, 胆结石患者术前血 CIC 增高（5.31.5 vs 1.20.8, P0.01), IgG 降低（8.72.0 vs 11.23.2, P0.05),术后恢复正常；胆石中 IC 阳性率为
2、82%（41/50 ） ，组织切片中 IC 阳性率 90%（91/101 ）. 结论：胆石症患者血清中CIC 和 Ig 有明显改变. 【关键词】 胆石症 免疫组化 免疫球蛋白 免疫复合物0 引言胆石症是我国常见病1 . 国内尸检报告胆石发生率为 7%，随年龄增长发病率也增加. 近年来使用 B 型超声检查自然人群胆石发生率达 10%左右. 在中年妇女胆石症的发病率高达 15%. 且随着人2民生活水平的提高其发生率还在不断上升. 研究表明，免疫复合物是胆色素结石形成的很重要因素之一2 ，我们对胆石症患者胆囊黏膜进行免疫复合物免疫组化检测及手术前后血清循环免疫复合物（CIC）和 Ig 含量检测以提示
3、免疫复合物在胆石症发生发展中的作用及意义.1 对象和方法1.1 对象 200511200606 我院外科因胆石症行胆囊切除手术患者 101（男 39，女 62）例，年龄 1475（48.414.4）岁. 其中病理诊断胆囊炎伴胆石症 98 例，胆囊息肉伴结石 1 例,单纯胆囊息肉 2 例. 健康对照组： 20(男 8，女 12)例来自门诊体检健康人群, 年龄 1865(45.310.7)岁. 免疫球蛋白检测试剂购于温州伊利康生物技术有限公司. 葡萄球菌 A 蛋白辣根过氧化物酶由第四军医大学免疫教研室赠送. 底物液 A 邻苯二胺， B H2O2 购于珠海亚利生物有限公司.1.2 方法选取 50 名
4、患者，采集其手术前及手术后 5 d 血清并于手术中采用无菌方法收集结石标本. 血浆 CIC 测定采用聚乙二醇(PEG)沉淀比浊法，Ig 测定采用免疫透射比浊法. 将结石标本用 pH 7.4 的 PBS 缓冲液洗涤后，压细，取适量放入 10 mm20 mm 试管中，再加 pH 7.4 的 PBS 缓冲液离心洗 2 次，弃上清液，留沉渣，3加葡萄球菌 A 蛋白辣根过氧化物酶 0.2 mL，37水浴 2 h，用 pH 7.4 的 Tris2Tween20 缓冲液离心洗涤 3 次，加底物 A, B 液混匀37水浴 15 min，观察颜色的反应，反应体系呈深蓝色为阳性，否则为阴性. 采集全部 101 名
5、患者胆囊组织，制作胆囊组织切片. 标本切片厚 4 m，石蜡切片常规脱蜡，置于 pH 6.0 的 0.01 mmol/L 枸橼酸钠溶液中 5 min，3 次，在 20用含 H2O2 的甲醇溶液处理 30 min. 每张切片滴加葡萄球菌 A 蛋白辣根过氧化物酶60 L，稀释度为 150, 37孵育 45 min，用 pH 7.4 的 PBS 缓冲液洗涤 3 次，加底物 A,B 液混匀，37孵育 15 min，观察结果. 在组织切片中胆囊基底膜呈深蓝着色为阳性，否则为阴性.统计学处理: 数据采用 xs 表示, 用 SPSS 软件行统计分析，组内前后比较用配对 t 检验，组间比较用方差分析.2 结果胆
6、结石患者手术前后血中 CIC 和 IgG 有明显变化：与对照组比较，术前血 CIC 增高（ P0.01)；IgG 降低（P0.05)；而血中IgA 和 IgM 无变化(表 1). 术后恢复正常； 50 例结石中 41 例 IC 酶免疫组化染色阳性(图 1). 在 101 例组织切片中 91 例胆囊黏膜基底膜 IC 阳性， 10 例为阴性( 图 2). 表 1 胆石症患者手术前后 CIC, Ig的变化43 讨论当人体遭受抗原入侵或者出现自身抗体, 就会引起免疫应答和形成 IC, 但后者迅速即被吞噬细胞吞噬、消化和清除, 此为机体的正常免疫应答. 只有当形成的 IC 不能被及时地清除并于局部沉积时
7、, 才有致病作用. 而 IC 沉积于组织时引起组织损害也是其最重要的生物活性3. 1963 年首次测得人胆汁中有 Ig 以来， 胆石症患者免疫功能的改变在成石过程中的作用才逐渐引起人们的重视. 我们首次表明, 胆石症手术前后血清中 IC 含量有明显改变 . 术前血中 CIC高, 术后 CIC 明显降低, 而 IgG 术后明显增高. 术前 CIC 较高的原因可能是4-5: 结石部向血液里不断释放抗原与血液中的 IgG 形成 CIC, 从而也使血液中 IgG 相应的降低; 结石部不断向血液里释放 IC 使血液中 CIC 增高； 由于胆管梗阻, 肝功能受到一定的损害, 网状内皮系统功能受到抑制, 导
8、致 IC 在血中的清除率降低. 术后CIC 降低的原因可能是 结石摘除, 使释放到血液中的 IC 减少; 结石摘除, 使形成 CIC 的抗原减少. 术后 IgG 增高的原因可能是: 抗体的反跳,血液内抗体对 B 细胞的增殖分化功能有负反馈调节作用, 随 CIC 的减少, 体内 B 细胞迅速增殖分化, 以致大量新抗体产生; 随 CIC 降低, 血液中封闭因子减少, 免疫耐受解除, 体液免疫增强. 我们证实大部分结石中存在 IC, 阳性率为 82%. IC，IgG 与胆石症有密切的关系. 正常状况下，胆管处于“防御”和“损伤”的动态平衡，即成核和抗成核蛋白共存，而往往抗成核因素占主导地位56. 在
9、胆道感染和梗阻的基础上，胆管水吸收障碍，失去了正常降低蛋白质浓度功能. 再加上 Ig 分泌细胞增多，激活补体，导致炎症反应，损害胆管黏膜；同时细菌作为抗原, 刺激机体局部产生IgG, IgG 与细菌抗原结合形成 IgG 型 IC, 沉积于胆道, 是结石形成的原因. IgG 通过特异性膜受体结合多种细胞（如巨噬细胞、单核细胞等） ，巨噬细胞因受结合免疫复合物的激活而具有细胞毒性并释放溶菌酶，从而加重黏膜损伤，促进胆道结石形成. 这种机制与国内报道的动物试验结果比较相符. 我们发现胆囊黏膜基底层有IC 沉积，由此可见，IC 虽不是致石的直接原因，但 IC 在胆囊黏膜的沉积通过活化补体，促进中性粒细
10、胞浸润, 激活过程中产生大量生物活性物质, 使肝细胞和胆管上皮发生剧烈的炎症反应,加重胆管等组织的损伤. 由于在 IC 沉积处补体成份被活化, 被活化的补体在清除 IC 的同时也造成黏膜等组织损伤, 因此 IC 的存在是胆石病, 尤其是胆囊结石时胆囊黏膜破坏的一个重要的病理原因, IC 在局部的不断形成和沉积也是胆石病迁延不愈、反复发作的原因之一. 因此, 清除胆道抗原对机体的刺激将成为预防胆结石形成的有效方法; 控制 IC 的沉积将是控制胆石发生发展的有效方法7-8.【参考文献】 1 韩天权，姜羽戈，张圣道. 胆固醇结石病的病因和机制研究进展J. 肝胆胰外科杂志， 2006, 18（5）：2
11、69-270.62 洪智贤，何小东. 胆囊成因研究进展J. 消化外科， 2006, 5（6）: 479-482.3 Malcolm A. Susceptibility to cholesterol gallstone formation: Evidence that LITH genes also encode immunerelated factorsJ. Biochim Biophys Acta, 2006, 1761(10):1133-1147.4 Lyons MA, Wittenburg H. Cholesterol gallstone susceptibility loci: A m
12、ouse map, candidate gene evaluation, and guide to human LITH genesJ. Gastroenterology, 2006, 131(6):1943-1970.5 Maurer KJ, Ihrig MM, Rogers AB, et al. Identification of cholelithogenic enterohepatic Helicobacter species and their role in murine cholesterol gallstone formationJ.Gastroenterology, 2005
13、, 128(4): 1023-1033.6 Portincasa P, Moschetta A, Palasciano G. Cholesterol gallstone diseaseJ. Lancet, 2006, 368(15):230-239.7 Portincasa P, Moschetta A, Petruzzelli M, et al. 7Gallstone disease: Symptoms and diagnosis of gallbladder stonesJ . Best Pract Res Clin Gastroenterol, 2006, 20(6) 1017-1029.8 Silva MA, Wong T. Gallstones in chronic liver diseaseJ. J Gastrointest Surg, 2005, 9(5):739-746.
