《课程论文-弓形虫的诊断及其疫苗的研究进展》由会员分享，可在线阅读，更多相关《课程论文-弓形虫的诊断及其疫苗的研究进展（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、海 南 大 学 农 学 院课程论文题 目：弓形虫的诊断及其疫苗的研究进展学 号： 姓 名： 专 业： 08 级动物医学 指导教师： 完成日期： 2011 年 6 月 5 日 弓形虫病的诊断及其疫苗的研究进展 张昱 （海南大学农学院 2008动物医学 ）摘要：弓形虫（Toxoplasma gondii）于1908年由Nicolle和Manceaux发现，是一种世界性分布的寄生原虫，能引起人兽共患的弓形虫病。它可以感染大多数哺乳动物。本文对该病的诊断技术及其疫苗研制做了简要阐述。关键词：弓形虫 诊断 疫苗 Advances in Diagnosis Method and Vaccine again
2、st Toxoplasma gondiiYu zhang （ Veterinary Medicine class of 2008 College of Agriculture Hainan Uniuversiti ）Abstract：Toxoplasma gondii, Nicolle and Manceaux, 1908，is a unicellular protozoan that can infect a broad spectrum of organisms including humans.It is capable of infecting all warmblooded Anim
3、als.this article reviews the latest reach progress in Diagnosis Method and Vaccine against Toxoplasma gondii.Key words：toxoplasma gondii 弓形虫病的传播与流行给畜牧业生产带来很大损失，尤其对养猪业的危害更大。猪弓形虫病是猪发生流产和死胎的原因之一，已证实弓形虫能够通过胎盘、子宫、产道及初乳等途径传播。该病多在34月龄的仔猪中发生，死亡率高达3040，其中以乳猪死亡率最高。国内外猪弓形虫病的发生和血清流行病学调查资料统计结果表明，弓形虫病对猪的感染是广泛的，其危
4、害也是严重的。弓形虫病缺乏特异性临床症状和体征，诊断较为困难，因此对其有效地诊断就显得尤为重要；由于弓形虫病的治疗仍未找到理想的药物,所以对其预防的意义远大于治疗。国内外在对弓形虫诊断和疫苗研制方面做了很多研究，现就此作一综述。1.病原弓形虫(Toxoplasma gondii)是猫科动物的肠道球虫，过去，国内的译名有弓形体、弓浆虫和毒浆虫等。弓形虫在生物界的位置仍然存在不同的看法，现根据LevinNDet al(1980)使用此分类法初步定为：界(Kingdom)：动物界(Animalia)门(Phylum)：原生动物门(Protozoa) 亚门(Subphylum)：顶复亚门(Subphy
5、lum apicomplexa)纲(Class)：孢子虫纲(Class Sporozoasida)亚纲(Subclass)：球虫亚纲(Subclass Coccdia)目(Order)：真球虫目(Order eucoceidiida)亚目(Suborder)：艾美耳亚目(Suborder EimeriiNa)科(Family)：肉孢子虫科(Family Sarcocystidae)属(Genus):弓形属(Genus Toxoplasma)种(Spedes)：刚地种(Species Gondii)种的特征：卵囊(oocyst)包含2个孢子囊(sporocyst)，每个孢子囊含4个子孢子(spo
6、rozoite)，在宿主体外进行孢子生殖(spomgony)。速殖子(tachyzoise)可在宿主任何器官内存在，包囊(cyst)主要在宿主的脑、眼、骨骼肌内存在。包囊包含缓殖子(bradyzoite)，属于兼性异宿主。终末宿主为猫科动物，在猫肠上皮细胞内由无性繁殖至有性繁殖。速殖子、缓殖子和卵囊都可感染终末宿主及中间宿主。2.弓形虫的生活史弓形虫的整个生活史发育要有两个宿主，猫科动物如家猫为终末宿主，在终末宿主体内肠上皮细胞内进行无性和有性生殖。有性生殖只限于猫小肠绒毛上皮细胞内，而无性生殖既可在小肠上皮细胞又可在小肠外其他器官组织内进行。弓形虫对中间宿主的选择不严格，无论哺乳类，鸟类和人
7、都可作为中间宿主，猫既可做终末宿主又可做中间宿主。对组织的选择也不严格，除红细胞外，任何有核细胞都可侵犯。弓形虫全部生活史的发育包括5个期，即速殖子(tachyzoite)，在假包囊(pseudocyst)内或外；缓殖子(bradyzoite)在组织包囊(cyst)：子孢子(sporozoite)在卵囊(ooeyst)内；裂殖体(schlzont)包含裂殖子(merozoite)；配子体，(gametocyte)分雌(大)配子(macrogamete)和雄(小)配子(microgamete)。2.1 速殖子(tachyzoite) 是繁殖在中间宿主有核细胞内迅速分裂的虫体，当数个或数十个虫体占
8、据整个宿主的细胞浆，宿主细胞的胞膜变成速殖子集合体的膜时，称之为假包囊。2.2 缓殖子(bradyzoite) 是与殖子相对应的名称。速殖子繁殖迅速，而缓殖子则在虫体分泌物所形成的囊壁内缓慢增殖。速殖子的核位于正中而缓殖子的核位于末端，被囊壁包住的许多缓殖子谓之包囊。2.3 配子体 是弓形虫裂殖子侵入细胞后，不形成裂殖体，而发育为大(雌)小(雄)配子体。2.4 卵囊 是双层囊壁内发育的合子(zygote)，未孢子化的卵囊包含一个孢子体(sporont)，孢子形成时，孢子体分化为2个孢子胚(sporoblast)的圆形体，以后延长成为孢子囊(sporocyst)，两个孢子囊内有4个子孢子。2.5
9、 裂殖体 是弓形虫缓殖子或子孢子等进入猫小肠上皮细胞后，配子生殖开始之前，虫体在猫小肠上皮内通过二芽殖(endodygeny)，内多芽殖(endopolygeny)弓形虫病PCR和ELISA诊断方法的建立和初步应用裂体增殖(schizogony)或“辟裂”(splitting)等方式进行增殖，最终成为有多个虫体(裂殖子)的集合体。裂殖体破裂，裂殖子侵入新的宿主细胞，继续增值为下一代的裂殖体。3.弓形虫的诊断3.1病原学诊断方法3.1.1直接镜检 取病料(心、肺、肝、淋巴结、腹液、脑脊液等)作抹片或涂片,固定、染色、镜检,查出弓形虫虫体即可确诊。3.1.2病原分离 将病料研磨过滤加PBS或液体病
10、料离心浓缩,给易感动物接种,进行弓形虫虫体的分离,至少盲传三代以后没发现弓形虫才可以认为阴性。病原学诊断方法较为简单,结果可靠，在过去近一个世纪的弓形虫病诊断中曾起到非常重要的作用。但这种方法检出率低、耗时、容易漏诊,一般不能进行生前诊断。另外，动物接种法有时有扩散病原，甚至造成操作者自身感染的危险。随着弓形虫病发病率的下降、抗弓形虫药物的广泛使用以及弓形虫病临床症状的复杂性，传统的病原学的检查方法费时、费力，亦由其特异性和敏感性的原因常常导致诊断的错误，已越来越不能适应当前弓形虫病诊断的需要。3.2 免疫学诊断免疫学诊断方法是目前进行弓形虫感染调查、临床弓形虫病确诊的常用方法。3.2.1 凝
11、集试验（Agglutination test，AT）其原理是建立在抗原与抗体特异性结合基础上的。3.2.1.1 直接凝集试验(DAT) 简便快速， 阳性反应出现时间比间接血细胞凝集试验(IHA)早。试验以甲醛固定的弓形虫悬液作为抗原与被检血清直接进行反应。在玻片上加不同稀释度的试验血清，混匀，几分钟后在显微镜下观察，如发生凝集，则为阳性反应。3.2.1.2 间接血细胞凝集试验(IHA) 主要优点是简便、快速原，循环抗原(CAg)比特异抗体出现的时间早，其特意性抗体可能延迟出现或不全， 特别是先天性弓形虫病和免疫受损者，甚至不出现特意性抗体6。CAg 是病原体存在的指征，CAg 的检测，不但可显
12、示急性活动性感染，也可鉴定治疗效果、灵敏，已广泛应用于流行病学调查，陈义民和张德林先后建立了以弓形虫滋养体(速殖子)抗原和代谢分泌抗原致敏绵羊红细胞的IHA 方法。,用此方法制备的试剂较前者提前2d检出血清中的抗体,且在检测结果上两者的符合率为100%。3.2.1.3 改良凝集试验(MAT) 是Dubey 和Desmonts 建立的，被认为是特异敏感的检测方法Dubey对1 000头自然感染的母猪进行了各种血清学检测方法的对比实验,结果表明MAT可以检测猪的潜伏感染和现症感染被是特异敏感的检测方法，但存在着检测费时、费用高等缺点。3.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA 是当前诊
13、断弓形虫感染应用最广的技术。间接ELISA 法检测弓形虫IgM 抗体， 急性病例检出率较高，但类风湿因子阳性者易出现假阳性反应。近年来，新发展的双夹心法检测IgM，提高了敏感性及特异性。除此以外， 研究人员在ELISA 基础上还创建了如葡萄球菌A 蛋白ELISA(SPA-ELISA)、亲和素-生物素-ELISA(ABC-ELISA)、斑点-ELISA(Dot ELISA)和PCR-ELISA 等多种新的测定方法。ELISA 法用于弓形虫病免疫诊断检测抗体和抗，特别是对于免疫受损患者的诊断非常重要。此试验操作比较麻烦。3.2.3 补体结合试验（CT) 是临床常用的血清学诊断方法之一， 该法既可用
14、已知抗原查未知抗体来诊断疾病，亦可用已知抗体查未知抗原来鉴定抗原。1937 年Nicolan和Rovello 首次应用本试验诊断弓形虫病。补体结合抗体是IgG 抗体，出现晚，消失早而持续时间短。机体感染弓形虫后大约3 周左右才能出现补体结合抗体，持续存在半年或24 年、亦有56 年、甚至10 年的报道，但不能排除再感染的可能性。3.2.4 染色试验(DT) 由Sabin 和Feldnlan(1948)首创，是一种只适用于弓形虫感染的血清学试验的特殊方法。碱性美蓝可使弓形虫染成蓝色，若加入致活剂和免疫血清后则不能被染成蓝色， 如发现50%虫体未被染上蓝色时，即为阳性。其特异性强、敏感性好已被普遍
15、公认。但要活虫参与试验，由于在实际应用时不易操作，国内几乎不再采用。免疫酶染色试验（IEST）是在染色试验的基础上，以玻片上的弓形虫作为抗原，与血清样本中抗体反应，该方法简单、敏感、特异、迅速、可在现场使用。3.2.5 间接荧光抗体试验( IFAT) IFAT是以完整的死弓形虫为抗原,采用荧光标记的二抗检测特异IgM和IgG。IFAT具有特异、敏感、快速、重复性好等优点。但如有类风湿因子、抗核抗体则存在非特异性染色,可引起假阳性反应,同时判定结果易带主观性。3.2.6 放射免疫分析(RIA) 放射免疫分析法检测弓形虫病的抗原、抗体，具有灵敏度高、特异性强和重复性好等优点，为弓形虫病的研究和诊断
16、，特别是早期诊断，提供了一种新的血清学诊断方法，能进行精确的定性及定量分析。何浩明等用放射免疫分析双抗体法， 对连云港地区1004名人群进行了弓形虫病流行病学调查，结果113人为阳性，阳性率为1125。但此法需要一定的实验设备和条件，检测周期长。3.3 分子生物学诊断目前，由于免疫学方法本身的一些不足(Moni函Giraldo ct al，2002)，分子生物学手段已应用于弓形虫病的检测fYazar S et al，2004)，国内外已经建立了多种的弓形虫病基因诊断方法(ZH砧NG Shuyi et al，1999)，有DNA探针和PCR等。3.3.1 DNA探针 该方法可检测的临床标本范围较广。 Blanco等(1992)曾建立了RH株弓形虫基因
