《oxLDL干扰HUVECs的DSG1和DSC2表达并增加单层内皮细胞对LDL的通透性（毕业设计-病理学与病理生理学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《oxLDL干扰HUVECs的DSG1和DSC2表达并增加单层内皮细胞对LDL的通透性（毕业设计-病理学与病理生理学专业）（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号UDC密级编号硕士学位论文oxLDL干扰 HUVECs的DSG1和DSC2表达并增加单层内皮细胞对LDL的通透性研 究 生 姓 名：李媛彬指导教师姓名、职称：易光辉 教授学 科 、 专 业 名 称：病理学与病理生理学研 究 方 向：动脉粥样硬化的防治2013 年 4 月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人
2、完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名： 年 月 日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读 （博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学
3、信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名： 导师签名：年 月 日 年 月 日目 录英文缩略语索引 1中文摘要 3英文摘要 6论文正文前言 9实验一 oxLDL对HUVECs上DSG1和DSC2表达的影响 121.材料和方法122.实验结果 153.实验小结 20实验二 oxLDL对HUVECs单层通透性的影响 211.材料和方法212.实验结果 233.实验小结 26实验三 ROS参与oxLDL对HUVEC DSG1和DSC2 表达的调节271.材料和方法272.实验结果 303.实验小结 35讨论
4、36结论39参考文献40综述44硕士期间发表的论文54致谢55英文缩略语索引缩写词AsBAECsBCABSACPMCHDCFH-DADPPGDSC2DSG1EDTAGAPDHHUVECsLDLLPOmRNAMCP-1oxLDLPAGEPBSPCRPdPDGFPETPMA英文全称atherosclerosisbovine aortic endothelial cellsbiocinchoninic acidbovine Serum Albumincount per minutecholesteroldichlorodihydrofluorescin diacetatedesmoplakinpla
5、koglobindesmocollin-2desmoglein-1ethylene diamine tetraacetic acidglyceraldehyde phosphate dehydrogenasehuman umbilical vein endothelial cellslow density lipoproteinlipoperoxidemessenger RNAmonocyte chemotactic protein-1oxidized low-density lipoproteinpolyacrylamide gel electrophoresisphosphate-buff
6、ered salinepolymerase chain reactiondiffusional permeabilityplatelet-derived growth factorpolyethylene terephthalatephorbol 12-myristate 13-acetate1中文全称动脉粥样硬化新生小牛主动脉内皮细胞双金鸡柠酸牛血清白蛋白每分钟计数胆固醇二氯荧光素双醋酸盐桥粒斑蛋白桥粒斑珠蛋白桥粒芯胶蛋白-2桥粒芯糖蛋白-1乙二胺四乙酸磷酸甘油醛脱氢酶人脐静脉内皮细胞低密度脂蛋白脂过氧化物信使核糖核酸单核细胞趋化蛋白-1氧化低密度脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链
7、式反应通透性血小板源性生长因子聚对苯二甲酸乙二醇酯佛波酯PVDFrpmRT-PCRSDSSODVEGFpolyvinylidene difluoriderevolution per minutereverse transcription polymerase ChainReactionsodium dodecyl sulfatesuperoxide dismutasevascular epidermal growth factor2聚偏二氟乙烯每分钟转数逆转录聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠超氧化物歧化酶血管内皮生长因子oxLDL 干扰 HUVECs 的 DSG1 和 DSC2 表达并增加单层内皮
8、细胞对 LDL 的通透性研究生：李媛彬导 师：易光辉 教 授专 业：病理学与病理生理学中 文 摘 要研究背景： 关于动脉粥样硬化(AS) 的发生,目前普遍认为与血浆中脂蛋白水平的升高，血管内皮细胞的损伤导致的动脉壁通透性增加以及脂蛋白穿过内皮屏障在内皮下沉积等有关。在动脉粥样硬化（AS）斑块和泡沫细胞中检测到了氧化修饰的低密度脂蛋白（oxLDL），提示oxLDL与AS的发生发展密切相关。但迄今为止未见oxLDL 促进内皮细胞对 LDL通透性机制方面的报道。桥粒芯糖蛋白-1(DSG1)和桥粒芯胶蛋白-2(DSC2)属于桥粒钙粘素蛋白家族成员，存在于血管内皮细胞间隙，发挥了血管壁与血液间的物理屏障
9、作用，维持细胞与细胞之间的完整性。因此内皮细胞与细胞间的这种桥粒连接在通透性调控方面起了重要的作用。本研究意在探讨xLDL对内皮细胞DSG1和DSC2表达的影响，以及由此导致对内皮细胞通透性的影响。实验一 oxLDL 对 HUVEC 细胞 DSG1，DSC2 表达的影响目的：观察 oxLDL 对人脐静脉内皮细胞上跨膜蛋白 DSG1 和 DSC2 表达的影响，以及人脐静脉内皮细胞受到这种氧化型脂蛋白刺激后对单层细胞通透性的变化。方法：每次实验前 24 小时，给 HUVECs 换新鲜培养基培养后加处理因素。不同浓度 oxLDL（0 mg/L，10 mg/L，25 mg/L，50 mg/L）处理 H
10、UVEC24h，检3测细胞 DSG1，DSC2 mRNA 和蛋白的表达，再用 50mg/L oxLDL 分别处理HUVEC 不同时间（0h，6h，12h，24h），用 Western blotting 和 RT- PCR 分别检测细胞 DSG1，DSC2 mRNA 和蛋白的表达。结果：HUVECs 上有 DSG1、DSC2 mRNA 与蛋白质的表达；oxLDL 使 DSG1、DSC2 mRNA 与蛋白的表达下调，且成时间与剂量依赖关系（P0.05）。oxLDL 增加细胞内活性氧的生成和降低 DSG1、DSC2 mRNA 与蛋白质的表达（ P0.05）（表2-1）。表2-1.FITC-LDL作用
11、组与培养液对照组、FITC-BSA组间细胞活力无显著差异(P0.05)2.2 FITC-BSA孵育HUVECs 不同时间对其通透性的影响用 oxLDL孵育 HUVECs24h 后，再用 FITC-BSA 孵育 HUVECs 不同时间（0h，241 h，2h，4h），检测 HUVECs 单层对 FITC-BSA 的通透性。结果显示，4 h 组与0 h 组比较，FITC-BSA 的通透性增加最明显(P0.05）。图3-1.LDL，oxLDL，BSA，H2O2对HUVECs DSG1 mRNA表达的影响M: DNA Marker * P0.05）。图3-3.LDL，oxLDL，BSA，H2O2对HU
12、VECs DSC2 mRNA表达的影响M: DNA Marker * P0.05,与PBS组比较(n=3)图3-4.LDL，oxLDL，BSA，H2O2对HUVECs DSC2 蛋白表达的影响31* P0.05,与PBS组比较(n=3)从实验结果可见，LDL ， oxLDL，BSA ，H2O2与HUVECs 共同孵育24小时后，出现DSG1和DSC2 mRNA 和蛋白不同程度的的表达降低。其中 oxLDL对内皮细胞上 DSG1和 DSC2mRNA和蛋白水平的下调作用与 H2O2比无明显差异，表明了oxLDL诱导了氧化应激作用，而蛋白成分没有发挥作用。2.观察oxLDL 、SOD 对 HUVEC
13、s内活性氧生成的影响用 oxLDL 或 SOD 预孵育 1h，再经 oxLDL 共同孵育的 HUVECs，结果显示，与空白对照组相比，oxLDL 组细胞内荧光明显增强，而 oxLDL+SOD 组细胞内荧光强度较 oxLDL 组明显减少（图 3-5）。结果表明， oxLDL 使细胞内活性氧生成增加，且上述作用可被 SOD 所抑制，提示活性氧介导了这个过程。图 3-5.DCFH-DA 染色法检测 oxLDL 对 HUVECs 活性氧生成的影响(20)a.空白对照 b.oxLDL 组 c. SOD 组 d. oxLDL+SOD 组3. oxLDL、 SOD对HUVECs DSG1 和DSC2表达的影响研究 oxLDL
