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1、 分 类 号学校代码学 号 M20097541410487 密 级硕士学位论文CDK5在鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡中的作用学位申请人： 黄 杰学 科 专 业 ： 神经病学指 导 教 师 ： 王 涛 教授答 辩 日 期 ： 2012年 5月 A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements forthe Degree of Master of medicineA study on the role of CDK5 inrotenone-induced dopaminergicneuronal apoptos
2、isCandidate : Huang JieMajor : NeurologySupervisor : Prof. Wang TaoHuazhong University of Science and TechnologyWuhan, Hubei 430074, P. R. ChinaMay, 2012 独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后
3、果。学位论文作者签名：日期： 年 月学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密 ，在_年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在以上方框内打“” ）学位论文作者签名： 指导教师签名：日期： 年 月 目录中文摘要.1ABSTRACT. 2正 文.3前 言. 3材料与方法. 5实验方法与结果. 6第一部分 多巴胺能细胞损伤模型的建立.6第二
4、部分 鱼藤酮及 CDK5 抑制剂对细胞凋亡的影响. 7第三部分 检测不同实验组细胞 CDK5、p35、p25 的蛋白表达. 10讨 论. 12参考文献. 14综 述.15参考文献. 25致 谢.28 华中科技大学硕士学位论文CDK5在鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡中的作用华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科硕士生：黄 杰导 师：王 涛 教授中文摘要目的 探讨 CDK5 在鱼藤酮介导的 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用以及通 过干预 CDK5表达对细胞凋亡的影响。方法 使用鱼藤酮处理多巴胺能神经元 SH-SY5Y 细胞，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力，Annexin-V/PI
5、染色，流式细胞仪检测不同实验组细胞凋亡率，采用Western blot 法检测不同实验组 CDK5 的表达以及 p25/p35 蛋白的表达比。结果 经鱼藤酮处理后细胞活力呈浓度依赖性下降，细胞凋亡率增高，且 CDK5 表达增高，p25/p35 比值增高。CDK5 抑制剂 MDL28170 或 Olomoucie 预处理细胞能够降低 CDK5 的表达水平，降低 p25/p35 蛋白的表达比，同 时可以减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。结论 CDK5 在鱼藤酮介导的 SH-SY5Y 细胞凋亡中可能 发挥着重要作用，抑制 CDK5的活性可能具有神经保护作用。【关键词】帕金森病；CDK5； p25/p35；
6、鱼藤酮 ； 细胞凋亡1 华中科技大学硕士学位论文The role of CDK5 in rotenone-induced dopaminergicneuronal apoptosisDepartment of Neurology, Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong Universityof Science and Technology, Wuhan, Hubei.430022, P.R.China.Postgraduate: Huang JieTutor: Professor Wang TaoAbstractObjective
7、 To investigate the expression of CDK5 in rotenone-induced SH-SY5Y cell andthe effects of inhibiting CDK5 expression on cell apoptosis.Method Dopaminergic neuron SH-SY5Y cells were exposured to rotenone. Cell viabilitywas measured by MTT, cell apoptosis was detected by Annexin-V/PI staining and flow
8、cytometry. Western blot was used to detect the expression of CDK5 and the ratio ofp25/p35 in different groups.Results After treated with rotenone the cell viability declined in aconcentration-dependent manner. Compared with the rotenone group, apoptosis rate wassignificantly decreased in both MDL281
9、70 and Olomoucie groups. Moreover, the ratio ofp25/p35 as well as CDK5 expression was reduced in MDL28170 and Olomoucie groupscompared to rotenone group.Conclusions CDK5 has a potential role in the rotenone-mediated apoptotic process inSH-SY5Y cell, and the down-regulating of CDK5 expression may pos
10、sesses someneuro-protective properties against rotenone-induced apoptosis.Key words: Parkinsons Disease; CDK5; p25/p35 ; rotenone; cell apoptosis2 华中科技大学硕士学位论文前言帕金森病作为在神经内科临床一线工作中最为常见的一种神经系统变性疾病，多见于中老年人群体，目前已明确帕金森病患者的黑质多巴胺能神经元选择性变性缺失为该病的主要病理特征。不过从发现该病至今，帕金森病的发病机制仍不明确，学说纷纭。比较流行的学说主要有遗传基因学说，环境及毒物损害学说，
11、细胞自噬调节异常，线粒体损伤学说，自身免疫炎症异常等等，但各种机制学说大部分都指向了同一终末通路即多巴胺能神经元的凋亡。很多研究都表明，各种外因或内因能通过不同的方式和途径最终促使多巴胺能神经元凋亡。近年来环境毒素在散发性 PD 的发病机制中所起到的作用越来越被重视，而环境中广泛存在的一种的杀虫剂鱼藤酮，被证实是建立多巴胺能神经元细胞凋亡的模型比较理想的选择。这也是本次实验造模选择的理论依据。神经元细胞周期调控的异常在神经元凋亡中的作用是近年来的研究热点，细胞周期的异常在神经变性疾病中也发挥着重要作用 ，许多证据表明细胞周期的重新启动1引起的凋亡是神经系统正常发育过程与神经系统疾病发生中所共有的特点。细胞周期调节分子包括周期蛋白(cyc
