《过敏原说明书定性》由会员分享，可在线阅读，更多相关《过敏原说明书定性（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 过敏原过敏原过敏原过敏原酶联免疫 酶联免疫酶联免疫酶联免疫分析 分析分析 分析 试剂试剂试剂 试剂盒使用说明书 盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 96T 使用目的使用目的使用目的使用目的： ： ： 本试剂盒用于测定大豆，奶样等样本中过敏原表达。 实验原理实验原理实验原理实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中过敏原表达。用纯化的过敏原抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中过敏原相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的过敏原抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝
2、色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD 值），与 CUTOFF值相比较，从而判定标本中过敏原的存在与否。 试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 7 终止液 6ml 1 瓶 2 酶标试剂 6ml 1 瓶 8 阳性对照 0.5ml 1 瓶 3 酶标包被板 12 孔 8 条 9 阴性对照 0.5ml 1 瓶 4 样品稀释液 6ml 1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 12 密封袋 1 个 标本标本标本 标本要求 要求要求 要
3、求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20保存，但应避免反复冻融 2不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3.
4、温育：用封板膜封板后置 37温育 3 0 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀， 37避光显色15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后
5、 15 分钟以内进行。 操作程序总结操作程序总结操作程序总结操作程序总结： ： ： 计算和结果判定计算和结果判定计算和结果判定计算和结果判定： ： ： 试验有效性：阳性对照孔平均值 1.00; 阴性对照平均值 0.10 临界值（ CUT OFF）计算：临界值 =阴性对照孔平均值 +0.15 阴性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为过敏原阴性 阳性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为过敏原阳性 。 注意事项注意事项注意事项注意事项 1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 3浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5底物请避光保存。 6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm 7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 保存条件及有效期保存条件及有效期保存条件及有效期保存条件及有效期 1试剂盒保存：； 2-8。 2有效期： 6 个月
