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1、硕士学位论文论 文 题 目 Cathepsin L 在 X 射 线 诱 导 的 人 脑 胶 质 瘤U251 细 胞 侵 袭 中 的 作 用研究生姓名 季 文 君指导教师姓名 梁 中 琴专 业 名 称 药 理 学研 究 方 向 肿 瘤 药 理论文提交日期 2013 年 4 月Cathepsin L 在 X 射线诱导的胶质瘤 U251 细胞侵袭中的作用 中文摘要Cathepsin L 在 X 射线诱导的人脑胶质瘤 U251细 胞 侵 袭 中 的 作 用中 文 摘 要目 的 ： 研 究 溶 酶 体 组 织 蛋 白 酶 L (Cathepsin L)在 X 射线诱导的人脑胶质瘤侵袭迁移中的作用及调控机
2、制。方法：采用 Cathepsin L 特 异 性 抑 制 剂 Z-FY-CHO 或 shRNA 干 扰 的 方 式 降 低 U251细胞中 Cathepsin L 的表达，并联合 X 射线处理细胞，通过细胞划痕实验及 Matrigel侵 袭 实 验 检 测 U251 细 胞 的 迁 移 、 侵 袭 能 力 的 改 变 ； Western blot 和 免 疫 荧 光 法 检 测各 处 理 组 细 胞 中 Cathepsin L 的变化及侵袭相关蛋白 RhoA、 CDC42、 MMP-2、 MMP-9、CXCR4、 CCR7 的 表 达 ； Rho/CDC42 Activation Assay
3、 的 方 法 测 定 细 胞 骨 架 蛋 白 RhoA及 CDC42 的活性蛋白；鬼笔环肽染色及免疫荧光法观察细胞骨架结构的改变。结 果 ： X 射线能明显增加 U251 细 胞 Cathepsin L 蛋 白 的 表 达 ， 并 增 强 细 胞 的 迁 移及侵袭能力。Z -FY-CHO 及 Cathepsin L shRNA 可 减 少 由 X 射线诱导的 Cathepsin L 的表达及核转位、抑制细胞的迁移及侵袭能力、降低 RhoA 和 CDC42 活性蛋白表达以及减弱 MMP-2、 MMP-9、 CXCR4 和 CCR7 蛋 白 表 达 ， 并 能 影 响 细 胞 的 伸 展 能 力
4、和 应力纤维的形成及运动能力。结论：C athepsin L 对 X 射线诱导的胶质瘤 U251 细胞的侵袭能力具有一定调控作用 ， 其 分 子 机 制 可 能 涉 及 对 细 胞 骨 架 蛋 白 、 基 质 金 属 蛋 白 酶 以 及 趋 化 因 子 受 体 的 蛋 白表 达 的 调 控 。关键词：C athepsin L； X 射线；肿瘤侵袭；胶质瘤细胞作 者：季文君指导老师：梁中琴IAbstract Cathepsin L involved in X-ray-inducted cell invasion of human glioma U251 cells.Cathepsin L inv
5、olved in X-ray-inducted cell invasion ofhuman brain glioma U251 cellsAbstractAim: In this study, we would investigate the effect and the mechanisms of cathepsinL in the human brain glioma invasion induced by X-ray.Methods: Cathepsin L expression was suppressed by a specific inhibitor Z-FY-CHOor a sh
6、ort hairpin RNA. U251 cell migration induced by X-rays was measured in vitro bywound healing assay and cell invasion detected by transwell invasion assay. Westernblotting and immunofluorescence assay were used to detect the expression levels of theproteins (cathepsin L, RhoA, CDC42, MMP-2, MMP-9, CX
7、CR4and CCR7) related to theinvasion in U251 cells. Activation of RhoA and CDC42 was measured with Rho ActivationAssay Kit and CDC42 Activation Assay Kit. FITC-Phalloidin fluorescent staining andimmunofluorescence assay were adopted to observe the actin remodeling of U251 cells.Results: X-ray irradia
8、tion improves the potential of human glioma U251 cells forcellular migration and invasion; inhibition of cathepsin L expression by using a selectiveinhibitor of cathepsin L, Z-FY-CHO or cathepsin L shRNA can undermine the ability ofX-ray-induced cell migration and invasion. Z-FY-CHO or cathepsin L s
9、hRNA could alsoinhibit X-ray-induced protein expression and nuclear translocation of Cathepsin L, whichwas testified by Western blotting and immunofluorescence assay. Rho/CDC42 ActivationAssay revealed that X-ray-mediated RhoA and CDC42 activition can be decreased by thedownregulation of cathepsin L
10、. Meanwhile, western blotting has showed that theexpression levels of the proteins related to the invasion including that of MMP-2, MMP-9,CXCR4 and CCR7 were significantly reduced. FITC-Phalloidin fluorescent staining andimmunofluorescence assay indicated that reduced expression of cathepsin L in U2
11、51 cellswas associated with decreased in cell spreading, actin stress fiber formation and actinpolymerization induced by X-ray.Conclusion: Our data show that cathepsin L is an important protein which mediatesthe cell invasion of human glioma U251 cells inducted by X-ray, and its molecularIICathepsin
12、 L involved in X-ray-inducted cell invasion of human glioma U251 cells. Abstractmechanism may involve regulation of the protein expression of cytoskeletal protein, matrixmetalloproteinases and chemokine receptor.Key Words： cathepsin L; X-ray; invasion; glioma cellsWritten by： Ji Wen-junSupervised by： Prof.Liang Zhong-qinIII目 录序 言 . 1实 验 部 分 . 5材 料 与 方 法 . 5一 、 材 料 . 5二 、 实 验 方 法 . 6实 验 结 果 . 17讨 论 . 29结 论 . 33参 考 文 献 . 34英 文 缩 略 词 表 . 41攻 读 学 位 期 间 发 表 的 论 文 .
