《小鼠 IL-1b Elisa试剂盒》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠 IL-1b Elisa试剂盒（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、BeijngBLKWBiotechnolgyCo.,Ltd. Tel:01-57158602/5872342blkwbioblkwbio.cm小鼠 IL-1 定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的 IL-1 浓度。 使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 ,如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。 如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。IL-1 简介：白介素 -1又称淋巴细胞激活因子 ,由 IL-1 和 IL-1 两种形式的多肽类细胞因子构成 ，与许多的细胞活性相关
2、， 包括增殖 、 分化以及凋亡 ,主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞所产生 ,各种上皮细胞 ,内皮细胞和间质细胞也能产生 IL-1,但血液中的 IL-1主要是由单核细胞和巨噬细胞所产生的 IL-1 。由激活巨噬细胞产生的 IL-1 ，经蛋白酶 -1酶解活化后，成熟的白介素 -1分子可以诱导白介素 -2的释放、促进 B细胞成熟与增殖 、 诱导成纤维细胞生长因子活性 ， 通过这些影响可以刺激胸腺细胞增殖 ， 进而影响机体的免疫反应 。研究表明白介素 -1蛋白与炎症初始反应相关，起到调节因子的作用，通常被认为是内源性致热原；细菌的内毒素或者一些非细菌的炎症因子都会诱导 IL 1产生，然后被释放到局部组
3、织， IL-1 含量升高表明机体内有组织损伤或者感染产生 ,如败血症等。对 IL-1 的研究主要集中在各种生理和病理免疫反应和炎症反应过 程领域。检测原理 :本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA法检测样本中 小鼠 IL-1 的浓度。 小鼠 IL-1 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的 小鼠 IL-1 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠 IL-1 抗体后，抗小鼠 IL-1 抗体与 小鼠 IL-1 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶
4、就会 与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在 IL-1 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其 450nm处的 OD值， 小鼠 IL-1 浓度与 OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中 OD值，即可算出标本中 IL-1 浓度 。小鼠定量分析酶联免疫检测试剂盒组成 :组分 规格预包被板 12条 或 6条样本分析缓冲液 1瓶 5ml/3ml标准品稀释液 10ml/5ml标准品 2/1支 (冻干 )生物素化抗体 1瓶 10ml/5mlHRP连接的酶结合
5、物 1瓶 10ml/5ml浓缩洗涤液 20 30ml/瓶TMB底物 1瓶 10ml/5ml终止液 1瓶 5ml/3ml封板胶纸 3/2张说明书 1份标本收集 :1.标本的收集请按下列流程进行操作 ：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用 EDTA的方法收集；BeijngBLKWBiotechnolgyCo.,Ltd. Tel:01-57158602/5872342blkwbioblkwbio.cmD.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于 20 ，避免反复冻融。2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；3.标
6、本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除 ；4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。 注 ：正 常小 鼠血 清或 血浆 样本 请用 标本 缓冲 液做 倍比 稀释 后再 检测 。注意事项 :1.试剂盒请保存在 2 8 。2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。3.若标准品复溶后，请在三天内用完。4.底物请勿接触氧化剂和金属。5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。8.室温反应，请严格控制在 25 28 。9.洗涤过程是至关
7、重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。1.加样过程中避免气泡的产生。12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。检测前准备工作 :1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡 20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于 2 8 保存。2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释 (1份加 19份水 )。3.加入标准品稀释液 0.5ml至冻干标准品瓶中使 IL-1 终浓度达到 10pg/ml，静置 15分钟后轻轻混悬待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为 10pg/ml,标准品稀释液直接加入
8、作为 0浓度 .）洗涤方法 :自动洗板机或人工洗板 ： 每孔洗涤液为 30ul， 注入与吸出间隔 15-30秒 。 洗板 5次 。 最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。 实验过程需自备的材料： 1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪；3自动洗板机； 4去离子水或双蒸水；操作步骤 :1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于 4 。2.建议设置本底较正孔 ， 即空白孔 ,设置方法为该孔只加 TMB显色液和中止液 。 每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。BeijngBLKWBiotechnolgyCo.,Lt
9、d. Tel:01-57158602/5872342blkwbioblkwbio.cm3.分别将标本或不同浓度标准品 (10ul/孔 )加入相应孔中 ， 用封板胶纸封住反应孔 ， 室温孵育 120分钟 。 对于血清或血浆标本，请加入 50ul样本分析缓冲液后加 50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至 10ul。4.洗板 5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。5.加入生物素化抗体工作液 (10ul/孔 )。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育 60分钟。6.洗板 5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。7.加入酶结合物工作液 (10ul/孔 )。用封板胶纸封住反
10、应孔，避光室温孵育 20分钟。8.洗板 5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。9.加入显色剂 TMB10ul/孔，避光室温孵育 20分钟。10.加入终止液 50ul/孔 ,混匀后即刻测量 OD450值。结果判断 :1.复孔的值在 20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。2.每个标准品或标本的 OD值应减去本底校正孔的 OD值。3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标， OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的 OD值可在标准曲线上查出其浓度。 4.若标本 OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。典 型数 值和 参考 曲线浓度 pg/m
11、l 典型 OD值 1典型 OD值 2OD平均值00.12650.1370.13731.250.34610.3250.34362.50.4040.4010.4021250.60130.5410.5722500.96790.92610.947501.35831.25831.308310 2.01691.9432 1.98小 鼠 IL-1 参 考标 准曲 线鼠 IL-1 标准曲线00.511.522.5031.2562.51252505010鼠 IL-1 浓度(pg/ml)OD值注 意： 本图 仅供 参考 ，应 以同 次试 验标 准品 所绘 标准 曲线 计算 标本 含量 。 灵敏度，特异性和重复性
12、:1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为 2.6pg/ml。2.特异性：与鼠 IL-1 、 IL-1ra、 IL-1RI/FcChimera、 IL-1RI/FcChimera， 人 IL-1 等没有交叉反应。3.重复性：板内，板间变异系数均 10%BeijngBLKWBiotechnolgyCo.,Ltd. Tel:01-57158602/5872342blkwbioblkwbio.cm参考文献 :Dinarelo,C.AandS.MWolf(193)NewEngl.J.ofMed.328:106.Hazuda,D.Jetal.(198)J.Biol.Chem.265:6318.Lome
13、dico,P.Tetal.(1984)Nature312:458.Rubarteli,A.etal.(190)EMBOJ.9:1503.Kurt-Jones,E.Aetal.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:1204.ELISAKitfortheQuantiativeAnalysiofMouseIL-1ThemouseIL-1ELISA(enzyme-linkedimunosrbentasay)kitisusedfordetctionfmouseIL-1incelcultresupernatnts,ouserumandplasa.THELISAKITISFORESA
14、RCHUSEONLY.Pleaseradthisinstructionmanualcarefulyandcheckoutheaterialprovidebeforeuse,andyoucancontactwithourcompanyifanyquestions.Youcanetrourwebsiteorcalusfortheraim.IntrdtinInterlukin-1,alsoknownaslymphocyteactivatingfactor,isapolypetidecytokinewithIL-1andIL-1molecularforms,involedinavrietyofcelu
15、larctivites,includingcelproliferation,diferntiation,andapotsi.IL-1isainlyproducedbymoncytesandmacrophagesintheblod,anditisalsoproducedbyepithelialcels,endothelialcelsandmesnchymalcels.Afteritisproducedbyactivatedmacrophages,protelyticalyprocesedtoitsactiveformbycaspase1,theatureIL-1stimulatesthymocy
16、teproliferationthroughinducingIL-2relase,B-celmaturationadproliferation,andfibrolastgrowthfactoractivation.ItisalsoreportedthatheIL-1isinvoledintheinflamatoryresponse,playstheroleofmediator,beingidentifedasendogenouspyrogens,endotxinortherno-bacterialinflaatoryfactorswhicinducetherleaseofIL-1.TheighlevlofIL-1inthebodyalwyscorespondstothetisueinjuryorinfection,suchasepticemia.Thestudieso
