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1、Open Architecture UPLC在线SPE操作指南系统原理示例分析事件以下所示为典型的分析示例，包括色谱、梯度曲线、时间线和并行事件。2详细流路状态请参考Open Architecture UPLC在线SPE系统指南仪器开关机顺序square5 开机：按照以下顺序确定MS及其它仪器电源电缆已连接.打开PC电源-打开2777控制电源-打开CM电源-打开BSM电源-打开QSM电源-打开Detector电源-打开MS电源-等待5min-打开Masslynx, pumping,等1晚上，开氮气、开高压、准备液相色谱3square5 关机：清洗色谱柱、仪器系统，停流速，关高压，关氮气，ven
2、ting,退出软件，关电脑，关仪器, MS断开电源电缆.square5 (详见用户说明书.)总论square5 开发新的LC/MS方法，建新的项目时的步骤：准备液相 准备质谱 建新的Project 调谐编辑MRM的方法编辑液相方法建样品序列表，运行样品处理数据 打印报告4square5 日常运行时的步骤：准备液相 准备质谱 建样品序列表，运行样品处理数据打印报告第一部份:准备液相square5 准备流动相和清洗液 用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要大于10mM。 有机相要使用原装进口的色谱纯。squ
3、are5 准备样品5 测试样品溶于水，并用0.22um的膜过滤。第一部份:准备液相推荐溶剂：QSM online SPE用溶剂如下,体积为4LA: 2%NH4OH in Water B: 2%Formic acid in Water C: MeOHD: MeOH:acetone:hexane=1:1:1 Seal wash: 10%MeOH in WaterBSM UPLC分析梯度用溶剂,体积为1L6A1: 0.5%formic acid in water B1: 0.5%formic acid in ACN/MeOH(9/1) A2: 0.5%NH4OH in water B2: 0.5%N
4、H4OH in ACN/MeOH(9/1) Seal wash: 10%MeOH in Water 2777自动进样器洗针溶液Wash1:10%MeOH in Water Wash2: MeOH注:以上溶剂可根据实际应用进行更改.第一部份:准备液相初始化UPLC泵square5 初始化UPLC泵 在Masslynx主页面上点击 将出现UPLC和质谱控制台。7square5 湿灌注BSM泵 点击左边Binary Solvent Manager ,选择CONTROLPrime A/B solvent第一部份:准备液相初始化BSM泵square5 选择A1/B1或A2/B2 输入时间3min,按st
5、art. 8第一部份:准备液相初始化QSM泵square5 湿灌注QSM泵 点击左边Quaternary Solvent Manager ,选择CONTROLPrime solvents9 选择A,B,C,D,时间为3min，按start第一部份:准备液相2777自动进样器样品注射器灌注square5 用2777操作小键盘执行以下步骤:square5 1. 选择 F1 Menu（菜单） F2 Clean Syr（清洁注射器）。将显示Select Wash Station消g5699。square5 2. 选择 Wash1 或 Wash2，g9994g2530按 Enter。将显示 Wash1
6、或Wash2 Clean Count （清洗g16757g6980）消g5699。square5 3. 选择注射器的灌注输g17877g8437g6980（1 g2052 9，或 Abort（g1025断），g9994g253010按 Enter。将执行灌注。建g167705g8437以上。第二部份:建立新的Projectsquare5 g1186Masslynxg1039g12395g2487选择FileProjectWizard11第二部份:建立新的Projectsquare5 g5415出g10628以下g12395g2487时，g9869g1999Yessquare5 输入Projec
7、t Name,以及项目所g3324的目g5417,g9869g1999Next. (建g16770:g3324C盘下12建massdatag7003件g3853,g1889g6238新建的projectg6930g2052g8504目g5417下)第二部份:建立新的Projectsquare5 g5415出g10628以下g12395g2487时，选择g1363用g980g1022已g13475g4396g3324的项目作为g8181g7507g7481g2031建新项目，g9869g1999g256browse”，选择Online SPE System InstallationTest.pr
8、o，g9869g1999g256Finish”g2375g2499。13第三部份:准备质谱square5 g9869g1999MS Tune14第三部份:准备质谱去溶剂气开关 氩气开关15开,关高压键(红色表示高压已关，绿色表示高压已开)第三部份:准备质谱square5 点击ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3 Cone (V): 30 Source Temp (C): 140 Desolvation Temp (C): 380 Desolvation (L/hr): 800 Cone (L/Hr): 50square5 以下参数最好直接使用intell
9、istart 自动校正仪器质量数时自动生的参数16 LM Resolution 1: 15 HM Resolution 1: 15 Ion Energy 1: 0.5 Entrance: 50 Collision: 2 Exit: 50 LM Resolution 2: 15 HM Resolution 2: 15 Ion Energy 2: 0.5第三部份:准备质谱square5 g9869g1999FileSave As,输入g7003件g2529,g6238g8504g16855g16868g7003件g1457g439617第三部份:准备质谱18点击质谱控制台第三部份:准备质谱要先开氮
10、气,再打开高压首先打开去溶剂气-氮气(绿色显示为打开)19再点击打开高压(绿色显示为打开)square5 g6238g16855g16868液g6930入Bg2507g1313(注:g8999度g33240.1-1ppmg1055间，g7693g6466g4466g19481的g9801g6947度g16855g6984样品g8999度)第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g698020A B 第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2
11、454g6980square5点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口21square5Start infusingsquare5开始进样square5Refill the syringesquare5重新灌满注射器 square5Purge syringesquare5灌注注射器第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g6980square5点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口22square5直接进样square5液相和样品混合进样square5液相进样square5废液第四部份:ES
12、I调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g6980选择Sample Tune and Develop Method23选择点击start第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g6980输入化合物的名称输入化合物的分子式或分子量如自动创建新的调谐方法则选左边的,如调用现有的调谐方法,则选右边的,此时要在下边选择想调用的调谐方法24选择此项自动调谐MRM方法每个化合物调谐几个子离子,一般选2流路模式,一般选combined 选择调谐液所在的位置点击
13、此处,质谱开始自动调谐选择标样所放的位置选择进样方式，一般选择combined第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g698025仪器正在自动调谐第四部份:ESI调谐g16855出目g7643化g2524g10301的g7380g1351MRMg17148谱g2454g698026自动生成的调谐的报告注:自动生成的仪器MRM的方法保存在当前project 内,例如alprazolam可在样品序列表内直接调用.第五部份:建立质谱的MRM方法27再点击MRM第五部份:建立质谱的MRM方法28点击新建质谱方法第五部份
14、:建立质谱的MRM方法29第五部份:建立质谱的MRM方法square5 按g16855g16868g13479g7536输入下g2027g2454g6980化合物名称 子离子质量数 锥孔电压离子模式30母离子质量数 离子驻留时间 碰撞能量MRM的运行时间，通用性OA-SPE方法为11min第五部份:建立质谱的MRM方法square5 Dwell时间会直接影响色谱图的点数，所以建议Auto Dwell31色谱峰宽，一般6s设定所需的色谱点数，一般设定15第五部份:建立质谱的MRM方法square5 保存质谱方法32第五部份:建立质谱的MRM方法square5 选择质谱方法*33第六部份:建立液相
15、方法 从以下几处可以进入LC的编辑页面点击34第六部份:建立液相方法35第六部份:建立液相方法点击inlet method，编辑BSM梯度表36第六部份:建立液相方法点击Quaternary Solvent Manager，编辑on line SPE溶剂处理程序（如从右边进样口直接进样做LC-MS分析，QSM梯度表只留第一行，流速设为0）37第六部份:建立液相方法点击Autosampler出现2777自动进样器方法编辑窗口。Online SPE情况下的设置38Injection=3代表，共取三次样进样分析。如进样体积15ml，g8504处injection=3，g2528时进样列表inject volume=5000第六部份:建立液相方法如从右边进样口直接进样做LC-MS分析，进样器方法为install OpenArchitecture，inject to设为LC Vlv139square5 g6238液相方法g2641g2529g1457g4396第六部份:建立液相方法40square5 选择液相方法第六部份:建立液相方法*41第七部份:建立样品序列表,运行采集数据42新建序列表第七部份:建立样品序列表,运行采集数据43新建序列表g17767入
