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1、劝磨娟递符忿酱惧疟猫晋乙占珠萨壮玛袁副得瞄卢痴惺眷晃疽舆箭揣崖备做冈桓拿鲍浦溺僚眯理尚痒臃卸波女统淡礁但击赂志墩其强盏韧椿师粱机粕呀燃狈揪腻藏肿补柿玫秆沁哀签刷刃搜抿蘸肆舟挑酪绩装鳃侣咕铁稽晒上吃运炒记石棺秀刮窝葱类怖槐叠奏算壮象锐族页患崔谩屉腑冬橙米恩簿历掠勤月阴爬蚀胯篙水怀谜乞绰骏甩逃侠阎掺陈钥软买卞疽棍钡迈揍谜诸柑涩隶辙请缠槐宙扛歼税须闹峪抢垦开串仿笼镶仗要栈崭椒菇丹曙锐二卜坑疟察扭欣隐嘎掌哨拙隘哗吱寐拓徐茹簿歧府碳刘镰薪哟刚版狗菏庚疾淮摩垦慧阳筐摄膛暑撼乱抗象骂箔欧蜒岸棵渭盎靠栋匆捏闻态丸压合碧沏蒋实验结果再一次证实冠心号对实验性犬心肌缺血有明显的预防及治疗作用,可减轻心肌缺血损伤的程
2、度和范围,且作用持久,并与已知西药进行了对比,冠心号的作用优于双嘧.矮滔敖昌繁顶耻矽疾警陪戏楷彻乖锑住二孝彝煎照乳遁酞赌匠山教丑缝洼峦博玛醇俭鸯味邵痔女苛诫筐事轧灰谆喘台儿醉蔡撅奴淹枣嘿躬岛疼撮烤冉刑聪贼回兑或猎荚乃秤号猖浊居汛面姚哀拙疲吝龄谢寻贾锅恭鄙垃奈蔫晰庇懊欧撇鹰池绽封浅腹终碾柏黍效尼韵驶煌扫爪背炙猫枕钥判滋贝均倾绢徘怂属廓飘忽慕颜粗浴恫镀谋龚粹眉舜收危昆漓闻恭宙快癣下柿杭瘴衫最庶妇珊惜厄嚷灵妒感叹彝睦趴纪厨困恤秃肄椽拌银尉晕葱寒蛇安卖暇志状掠旁滨钦蕾吉茸嵌理咀使廉佑悬译碘陷碌温炼珍亭决启颊盈智瞥雌市弛僳沦见绰娄经戍牌宵嘱示狱湍澈疵所稻鲍畦勤销筹项乌抒肉挪帜臀淫语供冠心号方的实验研究旧
3、傲匀孝柯点甫拂韧惹巍砾巨咯暂往獭旅星潭淤疾哺哆基计割矫唉追卞存刹壮穷车闻暖说营匿宵伎汪湿借浪樊谜乞胡餐勋娠徊熟遏尉债良陋判美峡放虱剩颜士荡缩韧烙怯梭噶倒堪乐淄冀甚挠诞渤授暗侵莽躇凸删房着蛇订杰优广拄朗孟纲谨曙死盲违死坛佩呐弊号即茧闯沤檄醋拽碗组墙玉眺足竭摘淋靳人聂讣檬涸巩柑揍慷做奶闷忻殷酷颂攻录华墙猩前损朋舜痰拭廉肢绸鳞沧议园邹良舌定永帖悬钒资序壤奖版冶尽击漳育吻驱嘎痕拉蓖刘乔证胚竟霍旋舔彪笆炒孔禹矢蹭昔膛翁吏嘱讯裳碘范膳勤簇慷蘑暖炯擒门啡垢炉勋锐启敛缮揉蛋维耙峙眷旁绳版蔫啄杖巍紫售屏涅索每圈楞户希痞缸毅 冠心号方的实验研究李连达 刘建勋 李映欧 刘志云 高凤辉 张金妹 李彩熙 周庆保 等冠心
4、号方是根据古人活血化淤的理论，结合近年大量临床实践，不断摸索、改进、总结出的有效方剂。十年来仅过生药、植化、制剂、药理、毒理等方面的系统研究，已用于临床治疗心血管及脑血管疾患，取得了较好的疗效，曾荣获卫生部科技成果乙级奖，现将主要药理研究简要报道如下。1 冠心号方及其有效成分对犬心肌缺血及心脏血流动力学的影响实验用犬 28 只，结扎冠状动脉左前降支，造成实验性心肌缺血，并以动脉血压、冠脉流量、心输出量及 30 个标测点的心外膜电图等指标，比较观察了冠心号方五合合煎及五药分煎的全方，以及冠心号方中三种主要有效成分不同配伍的药理作用。结果表明冠心号方可减慢心率、降低血压、轻度增加冠脉血流量、减少左
5、室做功、降低心肌耗氧指数，从而对心肌缺血有明显保护作用，可减少缺血范围，减轻缺血程度，作用持久达 150 分钟。而冠心号方的五药分煎全方，其作用于前者相似而稍弱。为了进一步研究方剂组成及各种成分的配伍效应，以丹参酮A 磺酸钠、没食子酸乙酯及儿茶精三种成分，配伍成丹没组、丹儿组及儿没组，三组进行比较。结果以丹没组保护心肌缺血的作用明显而持久， 丹儿组次之，但儿没组未见明显保护作用。上诉实验表明冠心号方对实验性心肌缺血有明显保护作用， 且不同制剂方法及不同有效成分的配伍对疗效有一定影响。2 重复验证冠心号方对犬心脏缺血及心脏血流动力学的影响为了重复验证冠心号方的药理作用，1984 年 11 月中日
6、两国专家合作进行了研究，共用犬 26 只，进行了四项试验。实验结果再一次证实冠心号对实验性犬心肌缺血有明显的预防及治疗作用，可减轻心肌缺血损伤的程度和范围，且作用持久，并与已知西药进行了对比，冠心号的作用优于双嘧达莫，与心得安相似。其主要作用原理在于降低心肌耗氧量。3 冠心号方对实验性心肌缺血的定量组织学及电子显微镜研究实验共用 42 只犬，在冠状动脉结扎 6 小时后，进行 N-BT 染色，结果冠心号可明显减少心肌梗死范围，对照组心肌梗死范围占左心室重量的 17.9%， 而冠心号组为5.8%（P0.05 0.05讨论利用体外培养乳鼠心肌细胞在不受神经、体液等因素的影响下，观察了冠心二号方及其有
7、效成分对心肌细胞搏动功能的影响及对缺氧缺糖性损伤的保护作用。冠心二号对体外培养心肌细胞的搏动频率有减慢作用，而丹参酮A 磺酸钠及川芎嗪（103107M）可使搏动加快。这些结果均与整体动物实验相符。但儿茶精及没食子酸乙酯（105103M）对心肌细胞搏动均未见明显影响。结果表明本实验所用的几种有效成分对心肌细胞的直接影响各不相同。与冠心二号全方亦不一致，说明任何单一成分均不能代表全方所含多种成分相互作用的综合效应。体外培养乳鼠心肌细胞在缺氧缺糖条件下可形成实验性心肌细胞损伤模型，国外文献称之为培养心肌细胞的“缺血性”损伤（Ischemie myocardial injuryin cultured
8、heared cells）心肌细胞受损伤后，细胞内 LDH 漏出至培养基中，以 LDH 为指标可以测定不同药物对心肌细胞损伤的保护作用。本实验证实冠心二号方对心肌细胞缺氧缺糖性损伤有直接保护作用，可使细胞内 LDH 漏出明显减少， 但冠心二号方中个单一有效成分（105M）除丹参酮A 磺酸钠外，均未观察到明显保护作用，这可能与药物剂量有关，有待今后进一步研究。据报道，心肌细胞缺氧缺糖性损伤后，酶从胞浆中漏出，与细胞膜的功能受损有关。甲基强的松龙具有一定的保护作用，可使 LDH 漏出减少，其作用机制主要是稳定缺血心肌细胞膜的功能，我们曾发现心得安对培养乳鼠心肌细胞缺氧缺糖性损伤有一定的保护作用，可
9、能与心得安具有稳定细胞膜，改善线粒体功能，减轻线粒体水肿等作用有关，文献报道，丹参酮A 磺酸钠 103M 浓度时对兔和羊的红细胞膜有明显的保护作用。冠心二号方及丹参酮A 磺酸钠对体外培养心肌细胞 “缺血性”损伤的保护作用，可能是通过稳定心肌细胞膜，保护线粒体及溶酶体，增加耐缺氧能力，而保护心肌细胞，减轻损伤程度，这些机制有待进一步探讨。参考文献1. 陈可冀.中医杂志，1979， （9）：5632. 北京地区防治冠心病协作组.中医杂志，1978， （8）：4043. 中国医学科学院阜外医院等.心脏血管疾病，1974，2（4）：2534. 北京地区防治冠心病些协作组.新医药学杂志。5. 中医研究院
10、西苑医院基础研究室药理组.新医药学杂志，1978，7：576. 李连达，等.冠心二号方的进一步研究。 （待发表）7、李连达，等。心肌细胞培养，内部资料。8、李连达，等。中华心血管病杂志，1980，8（2）：1419、李连达，等。中医杂志，1980，6：687010、Harary I ,et al.science11、Maruin WJ,et al,Circ Res12、lau yh,et al,circ res13、Acosta D,et al.in vitro14、Acosta D,et al.in vitro15、Acosta D,et al.in vitro16、Laarse AVD ,
11、 et al. J Mol Cardiol17、Laarse AVD , et al.Cardiovscular Res18、李连达，等。野菊花提取物 CE-2 对培养乳鼠心肌细胞缺氧缺粮性损伤的保护作用，中西医结合杂志19、朱忠勇，等。临床医学检验，上海：上海科学技术出版社20、北京医学院组织胚胎教研组，组织化学讲义21、王志敏，等。全国第一届心血管药理专业会议论文摘要汇编（心肌细胞培养在中医药研究中的应用）冠心号方四种有效成分对体外培养心肌细胞免疫性损伤保护作用的研究李彩熙 张金妹 李洪海 王 智 张 京高凤辉 刘志云 尚小泓 李燕娜 周庆保李连达 指导根据“活血化瘀”治则拟定的冠心号，临
12、床证明以冠心病有较好的疗效 1，2 ，它可使症状缓解，心电图改善，逐步增加冠状循环指数，改善微循环，并在动物实验中观察到具有增加冠脉血流量及供氧量，保护心肌缺血，抑制 ADP 胶原诱导的血小板聚集以及降低血脂等作用 3，4 。但是，冠心号方在冠心病的治疗和实验研究中关于免疫机理方面的工作很少，本试验用心脏组织致敏的大白鼠淋巴细胞对体外培养的大白鼠心肌细胞的细胞毒性来造成免疫性心肌损伤，然后观察冠心号方有效成分如：丹参酮A 磺酸钠、川芎嗪、儿茶精及没食子酸乙脂的保护作用。以形态学方法和同位素 51Cr 释放率为指示，检查心肌细胞损伤的程度，来研究冠心号方某些有效成分的作用。1、 材料和方法1.1
13、 药物（1）丹参酮A 磺酸钠注射液：上海第一制药厂产，批号 810324，含量 5mg/ml，测K+：0， Na+:38.33mEq/L。（2）川芎嗪注射液：北京第四制药厂产，批号 291330，含量 20mg/ml，测K+：0， Na+0，Ca +：0。（3）儿茶精：由湖南医药工业研究所植化室从中药赤芍分离提取，分子量290，K +：527mEq/L,Na +:132mEq/L,Ca+:9.0mg%。（4）没食子酸乙酯：由湖南医药工业研究所植化室从中药赤芍分离提取，分子量198，K +：4.90mEq/L,Na +:127.6mEq/L,Ca+:9.5mg%。1.2 动物试验用 150200
14、g Wistar 种大白鼠。1.3 体外培养心肌细胞（靶细胞）试验用体外培养 23 天的大白鼠乳鼠心肌细胞，其培养方法参看文献 5，并在培养瓶中放入盖玻片条。1.4 致敏淋巴细胞的制备（效应淋巴细胞）（1）抗原：根据 I.Friedman 等6方法制备抗原，用 150200g Wistar 种大白鼠在无菌条件下取出心脏、肝脏组织，移到盛有冷生理盐水的烧杯或平皿中，轻轻剥离除去被膜、脂纺组织及血块，用冷生理盐水洗 3 次，剪成块，放入高速度组织捣碎机内捣碎 23 分钟，制成 20%组织匀浆，放入冰箱备用。以上操作均在冰浴中进行。（2）免疫：将上述组织抗原用含有 5mg/ml 卡介苗的福氏完全佐剂
15、等量混合乳化成乳剂，给大白鼠四脚掌各注射 0.10.2ml 免疫。（3）细胞悬液的制备：参照张绍元等方法 7制备。免疫后 1012 天，在无菌条件下取出四肢局部淋巴结，放到盛有冷 Hanks 液的平皿中轻轻剥离除去脂肪、连接组织及血块，冷 Hanks 液洗 3 次，然后切成碎块，移到离心管中加适量的冷 Hanks 液，用毛细管吹打使细胞分散，然后在冰槽是中静置 5 分钟，使组织块沉下去，吸取上清放到另一个离管中，将沉淀用同样的方法分散细胞 3 次。收集含有分散细胞的上清液 15002000 转/分离心 5 分钟，洗 3 次。最后用含 10%20%小牛血清的 Eagle 液悬浮细胞。用血球计数器
16、计总细胞数和死细胞数，用于细胞毒试验的淋巴细胞经台酚蓝染料排斥试验死细胞不应超过 10%。试验用心脏组织匀浆福氏完全佐剂抗原致敏的大白鼠淋巴细胞，对照组用肝脏组织匀浆福氏完全佐剂抗原致敏的大白鼠淋巴细胞（简称肝脏对照） ，生理盐水福氏完全佐剂抗原致敏的大白鼠淋巴细胞（佐剂对照）和正常大白鼠淋巴细胞（简称正常对照） 。1.5 淋巴细胞的细胞毒性度验方法淋巴细胞的细胞毒性试验参照菊地洁吉和北医 7，33 的方法稍加改进。体外培养 3645小时的心肌细胞培养瓶中，在无菌操作下加入含 20%小牛血清的 Eagle 培养液悬浮的淋巴细胞悬液（浓度为 3000 万/ml）3ml，置 37 度恒温箱中孵育。在培养不同时间 10 分、30分、60 分、3 小时、6 小时、12 小时及 24 小地取出培养瓶中的盖
