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1、1家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测姓名 温正煌 学号 201212200904011 专业 临床医学 班级 本部 4 班实验目的 1.用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。2.观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化，从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能发病机制。实验材料和方法实验仪器：分光光度计，离心机，恒温水浴锅，哺乳动物手术器械，注射器，试管架，试管，试管夹，微量移液器，量筒实验药品和试剂：20%氨基甲酰乙酯，0.6%酚红溶液，20%葡萄糖溶液，10%NaOH，12.5%NaOH 溶液，50%乙酸溶液，1%氯化汞，碱性你苦味酸，生理盐水，肌酐标准应用液，蒸馏水实验动物 家兔
2、实验步骤1.1 急性肾功能不全模型复制：于实验前 24h，取两只家兔，称重，一只作为实验兔，按 0.81.0ml/kg 体重剂量皮下或肌肉注射 10g/L 氯化汞造成急性肾功能不全备用，另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。1.2 麻醉固定：用 200g/L 氨基甲酸乙酯按 5ml/kg 体重剂量注射耳缘静脉，缓慢注射。待兔 麻醉后将其仰卧，先后固定四肢及兔头。1.3 心脏采血：剪去家兔胸前区部位的毛，在第 34 肋间靠近胸骨处，用左手食指摸到心跳最明显处，右手持注射器垂直刺入心脏，当针穿刺心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器，取血 3ml，推入干燥试管，静置。1.4 膀胱
3、插管术：从耻骨联合向上沿中线作约 34 厘米的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻拉至腹壁外，先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位，先用注射器取尿液 2ml 于试管中，然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再用止血钳提起膀胱前壁（靠近顶端部分） ，选择血管较少处，切一纵行小口，插入插管后结扎，将膀胱插管平放于耻骨处，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，术毕，用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯，收集尿液。1.5 酚红排泄试验：按 1ml/kg 耳缘静脉注射 0.6%酚红溶液,开始计时，再按 30ml/kg 耳缘静脉缓慢注射 20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集 15 分钟（对照组） ，30
4、分钟（模型组）尿液。1.6 生化检测1.6.1 测酚红排泄率 a.收集注射酚红后的全部尿液移入 500ml 量筒内，加入 10%NaOH10ml，使之显色，再加入自来水至 500ml 摇匀。b.从量筒中吸出尿液置于试管中，与标准管比色管进行比较，即为 15min、30min 酚红排泄率。1.6.2 测血肌酐将静置后心脏采血的血用离心机 2000r/min 离心 5 分钟，小心吸取血清置于另一干燥试2管中，测血肌酐用。取硬质试管 3 支编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表 1 加样，混匀，37水浴 30min，用分光光度计以波长 510nm，空白调零，读 OD 值。然后各管液体倒回试管，加
5、50%乙酸溶液两滴，静置 6min 后，再测 OD值。按公式Cr（mg%）=（OD 测 -OD测 ）/（OD 标 -OD标 ）0.01/0.2100（正常值=0.70.8mg%）表 1 血清肌酐测定单位/ml 空白管 标准管 测定管肌酐标准应用液/（0.05mg/ml) 0.2血清 0.2蒸馏水 0.2碱性苦味酸 2.0 2.0 2.01.6.3 测尿肌酐a.按表 2 中步骤操作b.混匀，放 10min 后加蒸馏水 6.0ml，摇匀，用分光光度计以波长 530nm，空白调零，读 取 OD 值，按公式计算尿肌酐值Crp(mg%)=OD 测 /OD 标 0.05mg100ml/0.1ml表 2 尿
6、肌酐测定单位/ml 空白管 标准管 测定管尿液（原尿或 1:50 稀释） 0.1尿肌酐标准应用液 0.1蒸馏水 0.1碱性苦味酸 2.0 2.0 2.012.5%NaOH 溶液 0.5 0.5 0.51.6.4 内生肌酐清除率内生肌酐清除率=尿中肌酐含量/血中肌酐含量尿量（ml/min)1.7 肾形态学观察：于耳缘静脉注射 10ml 空气处死家兔，解剖取出肾脏，沉重，计算肾脏与 体重之比（即肾系数） ，并观察肾外形、质地，包膜，最大径纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。实验结果：家兔的血肌酐、尿肌酐数据表对照组 模型组血肌酐 血肌酐管号加乙酸前 加乙酸后 尿肌酐 加乙酸前
7、 加乙酸后 尿肌酐标准管 0.423 0.052 0.461 0.051 0.016 0.181测定管 0.056 0.049 0.157 0.150 0.040 0.086对照组和模型组家兔各项生化指标血清肌酐Crp（mg%）尿肌酐Cru（mg%）尿肌酐/血肌酐酚红排泄率（%）肾比重（g/kg)内生肌酐清除率对照组 9.4 7.85 0.83 45 8.79 0.08353模型组 15.7 4.3 0.27 40 有明显区别.2.氯化汞引起家兔急性肾功能不全的机制：（1）管内的 NaCl 增加，刺激致密斑使肾素分泌增加，肾素-血管紧张素系统激活，血管紧张素增加，从而使入球小动脉收缩，肾小球毛
8、细血管血压下降，肾小球有效滤过压下降，肾小球滤过率下降，导致少尿。 （2）肾小管阻塞：当 HgCl2 引起急性肾小管上皮细胞坏死时，管型、细胞碎片或细胞肿胀等阻塞肾小管，直接引起少尿；另一方面，近端肾小管阻塞，肾小囊内压升高，有效滤过压下降，肾小球滤过率降低，尿量减少。 （3）原尿回漏和肾间质水肿：肾小管上皮细胞受损，基膜断裂，原尿到达肾小管时便回漏到肾间质，而后进入肾血管，直接使尿量减少。肾间质水肿和间质压增高，一方面使有效滤过压下降，导致肾小球滤过率降低，尿量减少；另一方面，压迫肾血管，妨碍尿液流入肾小管，压迫肾周围毛细血管，导致肾缺血，进一步引起少尿。43.急性肾功能衰竭时的功能代谢变化
9、：（本实验中毒家兔处于少尿期）（1）尿变化：少尿或无尿；低比重尿；尿钠高；血尿、蛋白尿、管型尿。 （2）水中毒：ARF 时，因少尿、分解代谢所致内生水增多、摄入水过多等原因，导致体内水潴留、稀释性低钠血症和细胞水肿。严重时可出现心功能不全、肺水肿和脑水肿。 （3）高钾血症：尿量减少使钾随尿排出减少；组织损伤和分解代谢增强，使钾大量释放到细胞外液；酸中毒时，细胞内钾离子外溢；低钠血症，使远端小管的钾钠交换减少。（4）代谢性酸中毒：GFR 降低，使酸性代谢产物在体内蓄积；肾小管分泌 H+和 NH3 能力降低，使 NaHCO3 重吸收减少；分解代谢增强，固定酸产生增多。 （5）氮质血症：血中尿素、肌
10、酐、尿酸等非蛋白氮含量显著增高，称氮质血症，其发生主要是由于肾脏排泄功能障碍和体内蛋白质分解增加所致，少尿期，氮质血症进行性加重，严重时可出现尿毒症。4.内生肌酐清除率（80120ml/min）测定的临床意义： 肌酐是肌酸代谢的最终产物，体内的肌酸大部分与磷酸结合生成磷酸肌酸，磷酸肌酸与能量代谢有关。在体外肌酐与肌酸可以互变，在酸性溶液中，肌酸及易脱水而变成肌酐，在碱性溶液中，肌酐则可变回肌酸。但是，在体内肌酸脱水生成肌酐是一种不可逆反应。（1）判断肾小球损害的敏感指标：多数急性肾小球肾炎内生肌酐清除率低到正常值的 80%以下，但血清尿素氮、肌酐测定仍在正常范围，故是较早的反映肾小球滤过功能的
11、敏感指标。（2）初步估价肾脏的损害程度：轻度损害 Ccr 在 7051ml/min；中度损害在5030ml/min；小于 30ml/min 为重度损害；慢性肾功能衰竭病人若清除率在 2011ml/min为早期肾功能衰竭；106ml/min 为晚期肾功能衰竭；小于 5ml/min 为终末期肾功能衰竭。（3）指导治疗：内生肌酐清除率为 3040ml/min，应限制蛋白质摄入；小于 30ml/min 噻嗪类利尿剂治疗常无效；小于 10ml/min 应结合临床进行透析治疗，对袢利尿剂（如速尿、利尿酸钠）的反应也已极差。 （4）慢性肾炎临床分型的参考：如慢性肾炎普通型 Ccr 常降低，肾病型 Ccr 常
12、偏高。5.尿肌酐/血肌酐比值：功能性肾衰40，器质性肾衰20。功能性肾衰（也叫肾前性肾衰）由肾的灌流不足引起，使肾血流量和肾小球滤过率下降，但内生肌酐在体内积聚不多；器质性肾衰由肾小球滤过率下降、肾小管坏死引起，内生肌酐不能从尿中排出，从而使血肌酐浓度急剧升高。6.氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低。酚红排泄率是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。注射大量的葡萄糖溶液是为了造成渗透性利尿，利于排除酚红。酚红是一种对人体无害的红色染料，经静脉注射后，大部分与血浆蛋白结合，除 20%为肝脏清除，经胆道排出外，其余则由肾脏排出。在肾脏的排泌过程中，94%由近曲小管上皮细胞主动
13、排泌，小部分不与白蛋白结合者可从肾小球滤过，尿中排出 4%左右，2%通胆汁到大肠由粪便排出，因为酚红大部分通过近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作为判断近曲小管排泌功能的指标。氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低。57.肾形态观察： （1）正常家兔：表面光滑，皮质红褐色，髓质淡红色，皮髓质纹理清楚。 （2）中毒家兔：重量增加，体积增大，包膜紧张，皮质肿胀苍白，纹理不清，髓质充血。实验结论： 氯化汞中毒导致的急性肾功能不全时，家兔尿肌酐/血肌酐1，酚红排泄率降低； 肾脏的主要病理改变为肾脏肿大、颜色苍白、重量增加；切面皮质苍白、髓质呈暗红色。参考文献：1.陆源，林国华，杨午鸣机能学实验教程M第 2 版北京：科学出版社，2010：165 2.金惠铭，王建枝.缺氧.病理生理学.第 7 版.人民卫生出版社。2010 3.程一雄等编著,急性肾功能衰竭,上海科学技术出版社,1963 年 11 月第 1 版,第 154 页4.周苏廉, 黄学顺, 陈茂华. HgCl_2 诱发家兔急性肾衰竭模型(第一部分)J. 江西医学院学报, 1981, (01) 5.杨水莲，李晓军，冯克玉，等我国汞中毒临床研究概况。【J】中国职业医学，2004，31：50-52
