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1、1大孔吸附树脂富集肝达康颗粒中芍药苷的研究【关键词】 肝达康颗粒;芍药苷; 大孔吸附树脂摘要 目的 研究大孔树脂富集肝达康颗粒中芍药苷的工艺条件。方法 采用 HPLC 法测定的芍药苷含量为指标,考察了不同种大孔树脂对芍药苷的富集效果。结果 X-5 型树脂对芍药苷的保留率在 75%以上。结论 部分大孔树脂可用于富集肝达康颗粒中芍药苷成分。关键词 肝达康颗粒;芍药苷;大孔吸附树脂Enrichment process of paeoniflorin from Gandakang granules with macroporous adsorption resin Abstract Objective
2、 To study the condition for the enrichment process of paeoniflorin in Gandakang granules with macroporous adsorption resin.Methods Comparing the application of several kinds of macroporous adsorption resin in enrichment of paeoriflorin determined by HPLC as markers.Results The retention rate of X-5
3、is up to 75%.Conclusion Some of resins can be used to enrichment of 2paeoriflorin. Key words Gandakang granules;paeoriflorin;macroporous adsorption resin肝达康颗粒由白芍、柴胡、当归等 15 味中药制成，白芍为君药，其主要成分为芍药苷。为达到剂量小、服量小的现代中药要求，有必要对提取物进行精制纯化。目前，大孔树脂在中草药成分的精制、分离、纯化、富集等方面的应用越来越广泛。为此，本实验以芍药苷含量为指标，考察了几种大孔树脂对肝达康颗粒中芍药苷的富
4、集效果。1 仪器与试药1.1 仪器 Agilent 1100 series 高效液相色谱仪、 DAD 检测器、PhenomenexC18-ODS 柱（4.6 mm250 mm,5 m） ，Rev.A.06.01 软件版本；SK3300H 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司） ；800B 台式离心机。1.2 试药 白芍、柴胡、当归等 15 味等中药经鉴定符合中国药典（2005 年一版）有关规定；树脂型号 X-5，AB8 均来自南开大学化工厂；D101 大孔树脂（上海汇脂树脂厂） ；芍药苷对照品（中3国药品生物制品检定所） ；甲醇、乙醇、无水乙醇及其他试剂均为分析纯。2 方法及结果2.1 芍药
5、苷含量测定方法的建立2.1.1 色谱条件 色谱柱：C18-ODS 柱（4.6 mm250 mm,5 m） ；流动相：乙腈0.1磷酸溶液（1486） ；柱温：25 ；检测器：DAD；检测波长：230 nm；流量：1.0 ml/min。理论塔板数按芍药苷计算不少于 5000，分离度大于 2。2.1.2 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品 6.6 mg，置于 50 ml 容量瓶。加入无水乙醇并稀释至刻度，摇匀即得（每 1 ml 溶液中含芍药苷 132 g） 。精密吸取对照品溶液 2、4 、6、8、10、12 l 注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以芍药苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得
6、回归方程 Y=1068.39 X-5.77,r=0.9999。表明芍药苷进样量在 0.2641.584 g 范围内线性关系良好。见图 1。2.1.3 精密度考察 精密吸取芍药苷对照品 8 l，连续进样 5 次，芍药苷平均峰面积为 1135.6142，RSD 为 0.21（n=5） 。见图42。2.1.4 稳定性考察 分别于 0、4 、8、12 h 精密吸取供试品溶液8 l，按上述色谱条件测定峰面积积分值，结果 RSD 为 0.34，表明芍药苷在 12 h 内稳定。见图 3。2.1.5 重现性考察 取同一批白芍药材 2 g，共 5 份。按上述条件，测定其芍药苷面积积分值，RSD 为 1.02（n
7、 5 ） ，说明结果重现性良好。2.1.6 回收率考察 精密称取相当于 2 g 白芍饮片的干膏，共 5份，分别加入芍药苷对照品溶液（132 g/ml） ，按照供试品溶液的制备方法进行制备，测定芍药苷的含量，平均回收率为（99.271.00），RSD 为 1.33（n=5） 。2.2 过柱处理2.2.1 药液的制备 白芍投料量为 6 g。柴胡、当归等 6 味首提挥发油，药渣及余液与白芍等 7 味加水共煎 2 次，每次 2 h，合并煎液，滤过；鳖甲加水煎煮 3 次，每次 2 h，合并煎液，滤过；湘曲浸提 3 次，合并浸提液，滤过；以上药液合并滤过浓缩至 300 ml，即得。52.2.2 树脂的预处
8、理1 （1）先用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇液，至乙醇液与水混合（15）不呈白色浑浊，然后以大量蒸馏水洗去乙醇至无醇味；（2）用 5HCl 洗脱，再用蒸馏水洗至中性；（3）用 2NaOH 洗脱，再用蒸馏水洗至中性。2.2.3 过柱 精密吸取 25 ml 药液2 ，分别通过大孔吸附树脂（柱长 16 cm，内径 1.5 cm，装高 12 cm，床体积为 21.1 cm） ，流速为每分钟约 12 cm，然后用 50的乙醇 150 ml 洗脱，收集洗脱液。适当浓缩后，放冷转至 25 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得过柱液。2.3 测定2.3.1 总固形物的测定 取已处理好的大孔树脂，吸
9、取肝达康提取液 25 ml 上柱，按上述条件洗脱，收集洗脱液，置已称定重量的洁净干燥烧杯内，置水浴中蒸干，取出，放在 105 烘箱中烘 1 h，取出，放干燥箱内冷却 30 min，称定重量，计算总固形物含量。结果见表 1。表 1 过大孔吸附树脂前后总固形物的测定 从表 1 可知，通过大孔树脂吸附柱后，每克生药的总固形物较未过柱大幅度下降，尤其是 X-5 和 D101 型号树脂的精制纯化效果更为明显，可以达到减少服用剂量的目的。62.3.2 芍药苷含量的测定 供试品溶液的制备:分别精密吸取各种树脂过柱液 1 ml，转至 10 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心 10 min，取出，取上清液
10、作为供试品溶液。测定:取对照品溶液和供试品溶液 20 ml，注入高效液相色谱仪，测定积分值。结果见表 2。表 2 过大孔吸附树脂前后芍药苷含量的测定 从表 2 结果可知：X-5、AB-8 两种树脂对芍药苷的吸附较好，其中 X-5 吸附率超过 75；D101 较差。前两种符合精制要求。综合考察总固形物的保留率和芍药苷的收得率，选择 X-5 用于精制纯化肝达康颗粒。3 讨论本试验比较了 3 种大孔吸附树脂对肝达康颗粒提取液中芍药苷成分的富集效果，最后选用 X-5 型大孔树脂精制纯化。采用此工艺能较大程度的富集芍药苷有效成分，其含量可以达到质量标准的要求，可以考虑进行工业化大生产。大孔树脂用于中药精制纯化的工艺参数包括上样量的选择，洗脱剂浓度的筛选，洗脱剂用量的确定等方面。为更加全面地掌握 X-5型大孔树脂用于肝达康颗粒的精制工艺，有必要在下阶段进一步研究。参考文献71 陈延清.用七种不同大孔吸附树脂精制乐脉胶囊的研究.中成药，2001，23 （ 8）：553-555.2 汤建成，王溶溶，冯瑛. 大孔树脂富集坤怡宁颗粒中芍药苷的工艺研究.中成药， 2005，27（6 ）：640-642.
