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1、 前言1、组织学与胚胎学实习的目的实习的目的在于把讲课所学的基本理论与实习标本互相印证，以加深和巩固对理论部分的理解，并通过实习过程培养学生正确的科学作风及基本技术操作，逐步达到独立使用光学显微镜进行观察切片的能力，从而提高独立思考和分析综合的水平，为其他医学课程打下一定的形态学基础。二、实习的要求组织学实习主要是以自学为主，进行独立操作的原则，教师只是在实习方法和具体内容上予以指导，为此对参加实习的同学提出以下要求：1.按时上下课，不得迟到、早退、遵守课堂纪律，穿白大衣。2.实习前预习“实习指导” ，实习时按要求认真观察。3.用学生证，从显微镜室领取显微镜使用，并填好使用记录本中各项内容。4
2、.实习时要爱护显微镜及标本，损坏者要求及时报告，并给以赔偿。5.固定座位，不得随意调动。实习桌少放物件，保持充分的工作空间。6.班长负责从实验准备室借出切片标本，结束后如数归还。7.组织学实习的绘图方法，为了加深认识和理解，应掌握绘图显示，镜下观察到的细胞，组织和器官的组织结构并注字。工具：红蓝彩色铅笔与黑色铅笔各一支，将图画在实验报告纸上。方法：1.按照显微示教照片， 选择典型。2.确定画面3.构画草图4.着色注字，红色嗜酸性结构，蓝色示嗜碱性结构，黑色铅笔注字。5.绘图顺序：画管状器官时，应从腔面向外侧画，画实质性器官，应从表面向内部画。6.在图的左上角，应注明标本名称、取材与染色方法3、
3、观察切片标本的注意事项在显微镜下所观察到的形态结构，与理论上所理解不一致时，应从以下几个方面考虑：1.有机体生活时，机能状态不同：如腺细胞充满分泌物和完全排出后的形态不同，由柱状可以变为扁平或立方。2.立体和平面，全面与局部和关系：我们观察的标本是组织，器官的局部一个切面，不同的断面，应仔细体会把切面内容有机联系起来，建立整体观念。3.在切片制作的过程中常见有以下几种人为现象：（1）组织的收缩现象：制作切片过程中，应用各种化学药品处理组织，可引起组织的收缩，所以在切片中，常看到一部分组织与另一部分组织分离，或看到细胞与周围有较大的空隙。（2）组织死后变化：动物死亡时间较长，或取材时刀不锋利，使
4、组织受损，组织出现死后变化，在切片中看到细胞结构模糊不清，核固缩等情况。（3）组织皱褶现象：石蜡切片很薄，在粘片时易皱褶没有展平，经染色后，皱褶处是染色深而厚的一条。（4）固定液未洗尽，有时存异物，或染色液的渣子。（5）刀痕，切片刀有缺口，使被切的组织出现直线样空白。实验一：绪论、细胞学复习1、光学显微镜的使用方法： 1.拿显微镜时，不能用手随便提起，应以右手握镜臂，左手托镜座，保持镜身平正，轻拿轻放。2.将显微镜置于身体前方的实验台上，左侧放实习指导，右侧准备绘图。3.在观察时，调整转椅高度，以便舒适地坐位观察。插上电源，打开显微镜开关，选择适当亮度。4.观察时把低倍镜（10接物镜）转到镜筒
5、正下方，将切片至于载物台上，用标本移动器固定，一定要使盖玻片向上，并将要观察之组织对准载物台圆孔的中央，将载物台移到上限。5.双眼观察，调节接目镜，逆时针转动粗调节器，直至物象清晰为止。切忌不能将载物台从下向上移动调焦。6.使用高倍镜时（40接物镜） ，当低倍镜调清晰后，直接将高倍镜转换过来，用细调节器略加调节就可观察。7.显微镜观察完毕后，取下切片，将镜头叉开，镜筒降至最低位置关闭开关后，拔出电源插头，送还显微镜室。8.镜头有灰尘附着时，绝不能用口吹或是用手擦，应以擦镜纸（或细绸布）轻拭之。经常保持显微镜的清洁。总之，要牢记观察显微镜切片标本的原则，载物台从上向下移动调焦，先用低倍镜观察标本
6、全貌，选择典型，再用高倍镜观察重点微细结构。2、细胞学复习（1）标本 18 脊神经节取材：犬染色：H、E观察：肉眼椭圆形实质性器官低倍镜 外包结缔组织被膜，节内有大小不等的神经细胞称节细胞。其胞体被有髓神经纤维束分隔成群。高倍镜 节细胞圆形或卵圆形，胞质嗜酸性，胞质内有细小颗粒状尼氏体，分布均匀嗜碱性。胞核圆形居中，胞膜清晰、核仁明显、染色质着色浅。呈颗粒或线状。节细胞被卫星细胞不完全地包裹。（2）用幻灯及电镜照片复习细胞超微结构。绘脊神经节细胞的组织结构图。实习二、上皮组织被覆上皮分布在体表或管状，囊状器官的内表面（腔面） ，在观察上皮时，一般须器官的内表面或外表面寻找。1、标本 56 单层
7、柱状上皮取材：人的小肠染色：H、E观察：肉眼切面为长条状，标本上一侧有指状突起的小肠腔面，在突起上还有更细小的突起叫绒毛。低倍镜 绒毛的表面均有一层柱状上皮被复。在柱状上皮之间可看到散在空泡状圆形结构（有的切面染成深蓝色）即为杯状细胞（腺细胞） 。高倍镜 选择上皮排列整齐的部位进行观察。1.柱状上皮细胞：排列成一层，胞质着粉红色。细胞游离面有一薄层，呈暗红色的纵纹样的膜状结构称为纹状缘。胞核位于细胞基底部，为椭圆形，染成蓝紫色，可见核仁。2.杯状细胞：散在于柱状细胞之间，如高脚酒杯形状，细胞顶端膨大，底部细窄。在顶部圆形部分染色浅（或深蓝色）似空泡状，这是因为杯形细胞产生的分泌颗粒，在制片过程
8、中被溶解破坏所致。细胞核被挤压在基部，呈倒三角形或不规则形，着色深。绘单层柱状上皮组织结构图二、标本 31 假复层纤毛柱状上皮取材：猴气管染色：H、E观察：肉眼 气管横断面呈椭圆形结构，被复腔面紫色薄层是假复层纤毛柱状上皮。低倍镜 在官腔之腔面，假复层纤毛柱状上皮的游离面与基底面都很整齐，但核位置高低不一致，密集着深色。高倍镜 上皮细胞密集排列成层，界限不清，大都是柱状细胞，表面有一排细而整齐的纤毛，基底侧细胞核都属于其它类型细胞（梭形细胞、基底细胞）的胞核。由于这些核不在同一平面上。因此显示几层排列的核，似乎是复层，实际上是单层上皮。上皮细胞的基部与深层结缔组织相接处，有染成粉色均质膜状结构
9、，成为基膜。三、标本 7 复层扁平上皮取材：人食道染色：H、E观察：肉眼 食道的横断面，官腔面被覆有染色的上皮为复层扁平（鳞状）上皮。低倍镜 复层扁平上皮为多层细胞，各层细胞形态不一，其下方的结缔组织呈不规则的乳头状突起。伸入上皮组织，因此上皮的基底面凹凸不平。高倍镜 上皮表层细胞呈扁平形、核亦扁平。上皮依此命名。中间部分细胞为不规则的多角形、核圆。深层（基底）细胞呈单层矮柱状，核卵圆形，胞质中核外染色质多，故为深蓝色。实习三、结缔组织（一） 疏松结缔组织结缔组织在人体中分布最广，种类也最多，其细胞及间质成分更是十分复杂。因此实习时，必须充分掌握它们的特点及其所执行的功能。重点观察疏松结缔组织
10、。1、标本 26 肠系膜取材：大白鼠肠系膜染色：整装铺片。活体注射胎盘蓝、伊红-醛品红染色。本标本是观察疏松结缔组织中主要是细胞和细胞间质成分，以及它们在自然状态下存在的形式。观察：低倍镜 选择肠系膜较薄的地方，可见到许多纤维与深染的细胞。纤维：1.胶原纤维（白纤维）：较多，染成粉红色伊红着色，较粗大，弯曲，有分支交织成网。2.弹性纤维（黄纤维）：较少染成紫色，醛品红着色，细而直，有分支吻合成网。高倍镜继续观察纤维形态，然后观察下述细胞：1.巨噬细胞：细胞形态不规则，多突，胞质染色浅，含有大小不等的呈蓝色台盘蓝颗粒，借以了解细胞形态，胞核未然，没显示出。2.肥大细胞：圆或卵圆形，胞质中充满粗大
11、紫色颗粒，分布均匀，大小相等。细胞核由于未着色而是一白色发亮区域或不能看到。绘肠系膜铺片组织结构图。2、标本 55 胃底 取材：人胃底染色：H、E观察：上皮组织与肌肉组织之间疏松浅染部位。可见疏松结缔组织胶原纤维切面，呈粉红色而疏松。还有成纤维细胞细胞核、染紫色。实习四、结缔组织（二） 血液一、标本 36 人血涂片染色：瑞氏染色（伊红-美兰）甲醇固定 观察： 低倍镜 选择细胞均匀的地点，涂片上白细胞多被推向边缘。故观察时注意选择部位。高倍镜 分辨红细胞，各种白细胞，血小板。1.红细胞：数量多，为小而圆的无核细胞，染成粉红色。在涂片上多为正面观，由于红细胞成双凹盘状，故细胞边缘染色比中央的深。2
12、.噬中性粒细胞：是白细胞数量最多的一种，占白细胞 50-70%，胞质淡红色，有细而分布均匀的中性颗粒，染成粉紫色，核多分叶。可为杆状或 2-5 叶以三叶最多，染成紫色。3.嗜酸性粒细胞：比嗜中性白细胞稍大，占 0.5-3%，较难找。胞质呈粉红色，含有粗大而分布均匀的嗜酸性颗粒，染成红色。细胞核多为两叶。4.嗜碱性粒细胞：数量最少，占 0-1%，不易找到。胞质染成淡粉色，含有大小不等，分布不均匀的嗜碱性颗粒，为深紫蓝色，充满胞质，常常遮盖胞核。胞核性状不规则或半月形，位细胞中央。5.淋巴细胞：较多占 20-30%，体积大小不等，以小淋巴细胞为多，其体积似红细胞，大淋巴细胞体积大。淋巴细胞胞核占胞
13、体大部分，染色深，呈深紫色。胞质很少呈天蓝色围绕核的周围。6.单核细胞：是血液中最大的细胞，数量较少占 3-8%，核呈马蹄形成肾形，染色质较少，故核染色较浅而比较明亮。胞质为浅蓝灰色，含噬天青颗粒，分散分布较少。7.血小板：形状不规则，成群存在于红细胞之间。呈小的粉红色点状结构。绘血细胞和血小板组织结构图。实习五、肌组织肌组织实习时，应注意掌握其构造特点，特别是平滑肌很易与结缔组织或神经纤维相混淆，要仔细加以鉴别。并分清三类不同的肌组织。一、标本 10 骨骼肌取材：兔染色：H、E观察：肉眼 ：标本上长条形为骨骼肌纵切面，椭圆形为骨骼肌横切面。 低倍镜 1.纵切面：肌纤维呈长柱形，肌膜下有多个椭
14、圆形或杆状的细胞核，蓝紫色，染色浅，核仁明显。2.横切面：肌纤维聚合成束，肌束间为结缔组织包绕，称为肌束膜。高倍镜1.纵切面：在肌纤维中有肌原纤维为纵行排列的细丝。调节光线使视野稍暗后，可见明暗相间的横纹。2.横切面：肌纤维呈不规则形或多角形，不能见到横纹，肌原纤维呈小点状，染成粉红色，肌原纤维之间为胞质。细胞核位于肌纤维的周边，可见多个紫色的圆形核。绘骨骼肌纵、横切面的组织结果图。二、标本 12 心肌取材：猴心脏染色：H、E观察：高倍镜 纵切面：纵行的心肌纤维彼此平行，有分支相吻合成网，网眼间有结缔组织和丰富的毛细血管。肌浆中肌原纤维纵行排列，其横纹不如骨骼肌明显；细胞核呈卵圆形，位于肌纤维
15、中央。使视野稍暗后，在心肌纤维每隔一定距离处，可见较深的阶梯样细线，为闰盘（板） 。三、标本 8 平滑肌取材：兔膀胱染色：H、E观察：肉眼 有两块组织，薄者为膨胀的膀胱，厚着为收缩状态的膀胱。染为红色处为膀胱壁的平滑肌。低倍镜 在移行上皮组织的下面，找到染成深红色的平滑肌组织。较附近的结缔组织为红。由于膀胱内平滑肌组织数层分布，各层平滑肌纤维排列方向不同，故可见肌纤维的纵横节面。高倍镜1.平滑肌纤维纵切面：呈长梭形、胞质染成粉红色。胞核长杆状，位于肌纤维中央。肌纤维之间有结缔组织。2.平滑肌纤维横切面：呈大小不等的圆形，有的肌纤维内可见蓝紫色细胞核的横断面。大多肌纤维只有粉红色的胞质。实习六、
16、神经组织1、标本 14 神经元取材：狗脊髓染色：H、E观察：肉眼 ：脊髓横断面呈扁圆形，在脊髓中央可看到呈 H 形，染色较暗得的部分为灰质，其一端较宽为脊髓前角，即在此处找运动细胞。低倍镜 先找到前角，可见许多散在神经细胞为前角运动细胞，体积较大，选择其中的结构较完整的细胞用高倍镜观察。高倍镜 前角运动细胞，为多极神经元，有的细胞可见数个突起，由于断面不同，突起多少不定，长短不一。 1.胞体：较大，呈多角形。胞核大而圆，居中，核染色浅，核仁一个大而明显，染成红色。胞质中有散在蓝紫色不规则的小物块物质嗜碱性，称为尼氏体。在神经元周围，有许多小的圆形或椭圆形的细胞核，而胞质不显，是神经胶质细胞。2.胞突：树突、轴突不易分清。树突量多内含尼氏体。轴突只有一个，自胞体伸出区域不含尼氏体叫轴丘，见到轴丘方能确定为轴突。轴突不含尼氏体。绘脊髓灰质
