《平衡消肿灌洗液对关节软骨影响的研究与分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《平衡消肿灌洗液对关节软骨影响的研究与分析（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1平衡消肿灌洗液对关节软骨影响的研究与分析作者：邢时通 王丹 石麒麟 武中庆 钟建明【摘要 】 目的 观察自制平衡消肿灌洗液对兔活体膝关节灌注后关节软骨的影响，为关节镜手术提供更理想的灌洗液。方法 选用健康兔 24 只（48 膝） ，随机将其分为平衡消肿灌洗液组，透明质酸钠组，林格氏液组。并于灌注后、第 1、 2、5 周末进行关节软骨形态学观察及组织学检查。 结果 灌注后 5 周，平衡消肿灌洗液灌注组关节软骨的形态学、组织学完全正常，软骨蛋白多糖含量高于2 个对照组。 结论 平衡消肿灌洗液可维持甚至提高软骨的蛋白多糖含量，对关节软骨有更为显著的保护、营养作用，促进软骨恢复，对关节的影响小，是关
2、节镜手术较为理想的灌洗液。 【关键词】 关节软骨 灌洗 组织学【Abstract】 Objective To study the effects of balance antioncoti lavage fluids on rabbit articular cartilage, and offer better lavage fluids for arthroscopy operations. Methods The knee joints of 24 rabbits(48 knee joints) were chosen and randomly divided into balance a
3、ntioncoti lavage fluids group, sodium hyaluronate group, and Ringgers solution group 2and blank group. Morphological and histological change of articular cartilage at after perfusion,1,2 and 5weeks were observed. Results Morphological and histological change of articular cartilage of balance antionc
4、oti lavage fluids group was normal at 5 weeks after perfusion. The content of proteoglycan was better than other two control groups morphologically. Conclusions Balance antioncoti lavage fluids can keep or increase the content of proteoglycan,it can protect and nutrite articular cartilage better tha
5、n other lavage fluids,facilitate articular cartilage recovery to normal,decrease the influence of articular cartilage. Balance antioncoti lavage fluids are better than other lavage fluids for arthroscopy operations.【key words】 Articular cartilage Lavage Histology 随着关节镜技术的发展与成熟，关节内灌洗液的应用日趋增多，现在临床上应用的
6、关节灌洗液种类颇多，如林格氏液、生理盐水、5%甘露醇等，但是，这些灌洗液会导致关节软骨的破坏，如软骨形态变化、蛋白多糖的丢失等，关节软骨一旦发生损伤，常难以遏止且逐步恶化，最终导致骨关节炎，作者自 2007 年 4 至 10 月自制平衡消肿灌洗液，通过实验对兔活体膝关节灌注，研究其对关节软骨的影响，以期得到理想效果，应用于临床，提高关节镜手术疗3效。1 材料与方法1.1 实验动物及分组选用 4 个月月龄健康兔 24 只，雄、雌各 12 只，体重平均2.3kg 左右 (浙江中医药大学实验动物中心提供)。随机分为 3 组，实验组(A 组)：平衡消肿灌洗液灌注组，对照组 1(B 组)：透明质酸钠稀释
7、液灌注组，对照组 2(C 组)：林格氏液灌注组。1.2 实验药物(1)将临床疗效显著的补肝益肾、活血通络、利水消肿的自制中药验方，白芍 20g、牛膝 30g、羌活 20g、茯苓 20g、薏苡仁30g、五加皮 10g、牡蛎 30g，用酒精萃取提纯，将其按1：6 ：5 ： 0.2：0.1 的比例与林格氏液、 20甘露醇、50 硫酸镁、透明质酸钠混合，测定 pH 值并调至 7.20，灭菌备用。 (2)将透明质酸钠放置于生理盐水中稀释为 2%。(3) 普通林格氏液。1.3 动物造模4使用静脉复合麻醉法对兔施行全身麻醉。麻醉后，将兔固定于手术台上，双膝伸直位。常规剃毛、消毒、铺巾。使用 9 号静脉穿刺针
8、，于髌骨两侧进针，外侧为输入通道，内侧为流出通道。按分组后用不同药物灌注，灌注时间根据关节镜手术平均时间，灌注2h，平均每膝灌注约为 500ml。灌注完毕，每只实验兔肌注 20 万U 青霉素，预防感染。灌注 2h，并于灌注后第 1、2、5 周末分 4次取材。1.4 观察指标标本取材后，一部分固定于 10中性福尔马林溶液中，经10甲酸脱钙、脱水、浸蜡包埋、做 5 厚蜡片，做 HE 及甲苯胺蓝染色。置光镜下观察软骨的组织形态学变化。另一部分用生理盐水快速冲净，滤纸吸干水分、剪碎，分别装于小瓶中。按每 100mg软骨、1ml 4M 盐酸胍的比例，提取蛋白多糖1 。将提取液置于4冰箱中，进行搅拌提取
9、72h，然后离心 10min，取上清液用考马氏亮蓝蛋白定量检测法行蛋白多糖定量分析。1.5 组织形态学评分参照 ODriscoll，Keeley and Salter 组织形态学评分标准 ，对 A 组和对照组软骨组织形态学进行半定量评分。51.6 统计学方法使用 SPSS 11.5 统计软件进行数据统计处理。各组数据采用(xs)表示,显著性检验采用单因素方差分析进行统计,并进行组间两两比较。0.05 为显著性差异。2 结果2.1 关节软骨的大体观察全部兔膝关节均无感染、无积液。关节软骨呈乳白色或淡蓝色，表面未见异常改变，关节液清亮。2.2 染色A 组：第 2 周,本组切片示关节软骨表面较平坦,
10、但软骨层较正常为薄，软骨细胞接近正常成熟细胞，数量多。第 5 周本组的关节软骨各层软骨细胞排列与基质的分布有一定规律，表层细胞呈梭形，大致水平排列，中间细胞椭圆形，散在分布，深层软骨细胞柱状排列（图 1） 。B 组：软骨细胞接近正常成熟细胞，数量多，但排列稍紊乱，个别软骨细胞坏死（图 2） 。C 组：软骨细胞数量少，软骨细胞排列紊乱，部分软骨细胞坏死（图 3） 。62.3 电镜检查 A 组：高倍电镜显示本组的软骨细胞细胞核增大, 核内常染色体增多。细胞质内可见粗面内质网排列整齐、紧密,膜表面附有大量的核糖体颗粒。胞质内细胞器数量增加(图 4)。软骨细胞周围的外基质中可见胶原纤维成束状紧密排列,
11、可见到周期性横纹(图 5)。与正常软骨接近,呈现出均匀的异染性着色, 软骨深层染色浓,细胞形态大。B 组：高倍镜下软骨细胞细胞质内粗面内质网排列不齐,软骨细胞周围的外基质中可见胶原纤维成束状排列，但较稀疏紧密。C 组：高倍镜下软骨细胞胞质内粗面内质网数量少,排列较稀疏,高尔基体数量也减少。细胞核较对照组明显小。细胞周围胶原纤维排列紊乱,稀疏。2.4 蛋白多糖测定以正常兔膝关节软骨中蛋白多糖定量测定结果为标准，A 组、B 组、C 组灌洗后与之对比。灌注后即刻，A 组接近标准，B 组、C组明显低于标准，C 组最低。灌注后第 1 周末，A 组测定结果略高于标准，B 组、C 组恢复不明显。灌注后第 2
12、 周末，A 组测定结果明显高于标准，B 组低于标准，C 组仍明显低于标准。灌注后第 5周末，A 组维持较高水平，B 组恢复正常，C 组接近标准。72.5 软骨的组织形态学评分及统计分析本观察依据参照 ODriscoll，Keeley and Salter 组织形态学评分标准 。对 A 组和对照组软骨组织形态学进行半定量评分，见表。表 1 灌注后软骨组织形态学分值(略)注：灌注后不同时期软骨组织形态学评分，A 组与 B 组、C 组比较，0.05，A 组优于 B 组、C 组3 讨论本实验以正常兔膝关节软骨组织形态学、组织化学为标准，采用 3 种不同关节灌洗液对兔活体膝关节灌注，并于灌注后不同时间取
13、材，动态观察灌洗液对关节软骨的影响。分析不同阶段实验结果，作者发现 3 种关节灌洗液灌注后即刻会对兔活体膝关节产生不同程度的损伤，出现软骨层变薄，软骨细胞排列紊乱、坏死，但随着时间推移，各组所见软骨结构又呈逐渐恢复趋势，各组间比较发现平衡消肿灌洗液组损伤程度最小，恢复速度最快，恢复时间最短，恢复效果最理想。所以，通过实验证明关节灌洗对软骨的影响是一过性和可逆转，软骨亦有自我修复能力，不会产生骨性关节炎，从微观上证实了关节镜手术的可行性，也给作者临床在关节镜术后不同的时间有针对性的预防、不同方法的康复训练和治疗提供了理论8指导。同时可见，平衡消肿灌洗液安全、有效，对软骨的形态影响小，最大程度地维
14、持了软骨的正常形态，有利于关节功能的恢复，可减少关节镜手术后的合并症，缩短术后恢复时间。平衡消肿灌洗液可以有效维持蛋白多糖含量，防止其丢失，且从第 1 周开始含量超过正常量，这种情况作者考虑在特有中药刺激及代偿性合成作用下，与软骨细胞分泌增加有关。另外，因软骨蛋白多糖的含量高，故平衡消肿灌洗液组软骨组织形态学变化小、恢复快。对平衡消肿灌洗液疗效，作者分析认为，自制的复方制剂中白芍、牛膝、羌活、茯苓、薏苡仁能提高机体免疫功能，激活巨噬细胞对细菌的吞噬作用，扩张血管，改善循环，促进炎性病变吸收，从而起到抗炎、镇痛、消肿的目的；五加皮具有清除氧自由基、改善微循环的作用；牡蛎中所含的钙离子能降低毛细血
15、管通透性，使血液凝固性增强，起到缓解滑膜炎性出血作用，其含可溶性硅元素是软骨基质的主要成分粘多糖的必需元素，可促进关节软骨修复；林格氏液可调节关节液的酸碱度及渗透压，改善关节内环境，减轻炎性反应；20%甘露醇可减少对蛋白多糖的外溢，防止蛋白多糖丢失；硫酸镁具有消肿利水作用；透明质酸钠是关节液中以及软骨基质内的重要成分。瞿钢等认为5透明质酸钠对缓解关节疼痛和关节功能的早期恢复具有显著疗效，因其可清除自由基，调节白细胞9趋化性和巨噬作用，抑制炎症反应，抑制血管和组织的增生，对流变学环境、流体环境、化学环境均有重要作用，可营养、保护软骨，固化细胞膜，抑制感受器的敏感性，减轻疼痛，缓解症状。【参考文献
16、】1 Hui A,Kulkami GV,Hunter WL,et al.Paclitaxel selectively induces mitotic arrest and apoptosis in prolife rating bovine synoviocytes.Arthritis Rheum,1997,40:10731084.2 ODriscoll SW.Thechondrogenic potential of treeautogemous periosteal graftsfor biological resurfacing in gofmajorfull thickness defects in jiont surfaces under the influence of continous passive motion.Anex perimental in vestigation in the rabbit.J
