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1、1DCC PTEN 在大肠癌中的表达及临床意义作者：孟竹达林从尧冯茂辉 【摘要 】 目的:检测 DCC、PTEN 在大肠癌组织中的表达，并研究其临床意义。方法:应用免疫组织化学技术检测 30 例大肠癌组织中 DCC 和 PTEN 蛋白表达。结果:30 例大肠癌中 DCC 和 PTEN 蛋白阳性表达率 46.67%和 36.67%。DCC 和 PTEN 蛋白低表达与大肠癌 Dukes 分期、浸润深度和淋巴结转移均呈正相关。结论:DCC和 PTEN 表达与大肠癌浸润转移密切相关。检测 DCC 和 PTEN 蛋白表达可作为判断大肠癌预后的客观指标。 【关键词】 DCC;PTEN;免疫组织化学;结直肠
2、肿瘤;肿瘤转移大肠癌是我国死亡率较高的肿瘤，其发生发展是一个多基因参与、多步骤及多阶段的变化过程 1 。结肠癌缺失蛋白（DCC）是一种肿瘤抑制基因，其最初得名是由于结肠肿瘤中常存在 DCC 缺陷，后来发现其在胃、前列腺、卵巢、食道、血液等多种肿瘤中表达减少或缺失。PTEN 基因（也称 MMAC1 或 TEP1 基因）是迄今发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，它在细胞内信号传导通路的调控起关键作用，不但参与正常细胞生长、发育的调控，而且在肿瘤发生、发展及转移中起抑制作用。本研究采用免疫组织2化学法，检测 DCC 和 PTEN 的表达，探讨其与大肠癌发生发展和预后的关系及临床意义。1 材料与方法
3、1.1 材料标本取自本院肿瘤科 2006 年 6 月2007 年 1 月期间 30 例大肠癌标本，其中结肠癌 24 例，直肠癌 6 例。患者年龄范围 32 岁81 岁，平均年龄 63.66 岁，其中男性 20 例，女性 10 例。患者术前均未做化疗、放疗及生物治疗。1.2 方法手术切除的新鲜大肠癌标本，术后均经病理证实。同时距肿瘤边缘 5cm10cm 以上切取正常组织（术后病理证实无癌细胞浸润）作为对照。标本均经 10%福尔马林液固定，石蜡包埋，4m 厚连续切片。采用微波- 链霉素-生物素（MW-LSAB）免疫组织化学法和微波一金属盐抗原修复技术。所用 DCC 鼠抗人单克隆抗体、免疫组化试剂盒
4、购自美国 Zymed 公司。PTEN 鼠抗人单克隆抗体（工作液）购自北京中山生物技术有限公司。实验用已知的 DCC和 PTEN 阳性的大肠癌组织作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。1.3 结果判断高倍镜下每张切片选择 10 个有代表性的视野，每个视野记数 100 个肿瘤细胞，共记 1000 个细胞。DCC 与 PTEN3蛋白表达评估标准:按染色强度记分:0 分为无色，1 分为淡黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色。按阳性染色细胞百分率记分， 1 分为 11%50%，2 分为 51%75%，3 分为 75%，两项得分相乘结果3 为阳性病例（+） ，3 为阴性病例（- ） 。最终结果
5、是由两位病理医师用双盲法分别观察每例切片所获得的一致意见。1.4 统计学处理应用 SPSS11.5 统计软件进行分析。定量资料用 2 检验和秩和检验。2 结果2.1 免疫组化染色显示，DCC 和 PTEN 阳性产物呈棕黄色或棕褐色颗粒，均定位于细胞浆和（或）细 胞质，见图 1、图 2。2.2 统计学分析显示，30 例大肠癌组织 DCC 和 PTEN 蛋白表达阳性率分别为 46.67%（14/30）和 36.67%（11/30） 。DCC和 PTEN 在大肠癌组织中的表达阳性率显著低于正常大肠黏膜组织（P0.05） ，见表 1。表 1 大肠癌组织（T）及手术切缘正常组织（N）DCC、PTEN 表
6、达水平比较略42.3 统计学分析显示，DCC、PTEN 蛋白表达水平具有正相关。见表 2。表 2 DCC 与 PTEN 蛋白表达水平的相关性 略2.4 临床病理参数与 DCC、PTEN 蛋白表达水平的相关性，统计学分析显示，在大肠癌组织中 DCC 与 PTEN 表达水平与浸润深度、有无淋巴结转移及 Dukes 分期有显著相关性（P0.05） ，见表 3。表 3 大肠癌组织 DCC、PTEN 蛋白表达水平与临床病理参数的相关性略3 讨论3.1 DCC 与大肠癌的关系 DCC 基因首先由 Fearon 等 2 在 1990 年确定，定位于人 18 号染色（18q21.3） ，其表达蛋白是型跨膜糖蛋
7、白，主要由三个功能区组成，即胞外区、跨膜区和胞内区。胞外区由 4 个免疫球蛋白结构域 IG（Immunoglobulin）和6 个型纤维连接蛋白结构域 FN3（Fibronectin Type ）组成，是结合其配体 Netrin-1 的区域; 跨膜区富含疏水性氨基酸;胞内区是5信号传导区，包括 ADD（Addiction Dependence Domain） 。在20 世纪 90 年代早期，DCC 基因被认为是抑癌基因。证据包括在70%的大肠癌中，位于 18 号染色体长臂上的 DCC 位点的缺失。在超过 90%伴有 18 号染色体长臂上 LOH 的原发性大肠癌中， DCC包含在等位基因位点缺失
8、的区域 3 。大多数研究将大肠癌 18号染色体长臂上 LOH 和 DCC 减少在 RNA 水平和蛋白质水平上联系起来。后来发现在许多其它肿瘤中 DCC 也是减少/ 缺失的，如胃癌、前列腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、食道癌、乳腺癌、睾丸癌、神经胶质瘤、成神经细胞瘤和血液系统恶性肿瘤等 4 。DCC 表达的缺失常与预后不良和转移风险增加有关，这一资料有重要的临床意义。例如在细胞体外培养或裸鼠试验中，DCC 表达的恢复可抑制肿瘤基因的生长特性 5 。本实验结果表明，大肠癌组织中 DCC 蛋白表达水平在不同的浸润深度、有无淋巴结转移、Dukes 分期组中不同，差异具有显著相关性（P0.05） ，DCC 基
9、因的减少与肿瘤的浸润和转移有明显的关系，而肿瘤的进展程度直接关系到患者的预后，所以对 DCC 基因的检测在研究大肠癌进展及预后方面具有重要意义。3.2 PTEN 与大肠癌的关系 PTEN 是近年来发现的第一个具有磷酸脂酶活性的一种新型抑癌基因，是在 1997 年由 Steck 等 3 个小组分别发现并命名，该基因位于染色体 10q23.3 位点，共有 9 个6外显子，mRNA 长度为 5.5kb，其编码的蛋白具有酪氨酸磷酸激酶活性，可以将磷酸根从酪氨酸去除，抑制酪氨酸磷酸化，从而 对细胞增生和细胞周期起调控作用，当 PTEN 抑制基因突变或缺失时可能构成一个新的信号转导途径，促进肿瘤进行性生长
10、和肿瘤细胞增殖活性增加，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切 6 。 本实验结果表明，在大肠癌组织中，PTEN 蛋白表达阳性率显著低于正常大肠黏膜组织（P0.05 ） ，在大肠癌组织中 PTEN 表达水平与浸润深度、有无淋巴结转移及 Dukes 分期有显著相关性，提示PTEN 基因缺失或突变与大肠癌的发生密切相关，并在大肠癌的临床进展和生物学行为方面起到重要作用。检测 PTEN 蛋白的表达对判断大肠癌的转移及预测患者的生存状况具有重要意义。3.3 DCC、PTEN 与肿瘤的相关性研究的展望本实验结果表明，大肠癌中 DCC 蛋白表达与 PTEN 蛋白表达之间呈正相关，表明DCC 蛋白与 PTEN
11、蛋白在大肠癌的发生、发展和转移的病理过程中，可能具有相互诱导的调节作用。这还需要进一步证实。对其作用机制的进一步研究，将有可能在分子水平上进一步揭示大肠癌的发病机制，并为基因靶向治疗提供理论依据。【参考文献】 1 Vogelstein B，Fearon ER，Hamilton SR，et 7al.Genetic alter-ations during colorectal tumor development.N Engl J Med，1988 ，319（9）:525532.2 Fearon ER，Cho KR，Nigro JM，et al.Identification of a chro-mo
12、some18q gene that is altered in colorectal cancers.Science，1990，247（4938）:4956.3 Thiagalingam S，Lengauer C，Leach FS，et al.Evaluation of can-didate tumour suppressor genes on chromosome18in colorectal cancers.Nat Genet，1996，13（3 ）:343346.4 Mehlen P，Fearon ER.Role of the dependence receptor DCC in col
13、orectal cancer pathogenesis.J Clin Oncol，2004 ，22（16 ）:34203428.5 Klingelhutz AJ，Smith PP，Garrett LR，et al.Alteration of the DCC tumor-suppressor gene in tumorigenic HPV-18immortalized hu-man keratinocytes transformed by nitrosomethylurea.Oncogene，1993， 8:9599.86 Depwski PL，Rosenthal SI，Rues JS.Loss of expterssion of the Iyr N gene protein product is associated with poor outcome in breast cancer J.Mod Pathol，2001，14:672676.
