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1、1灵芝孢子粉和双歧杆菌对小鼠菌群失调的治疗作用作者：崔冬冰，左丽， 陈阿英， 龙世棋， 钟志强【摘要 】 目的： 研究灵芝孢子粉（GSP ） 、双歧杆菌（BB ）对小白鼠肠道菌群失调的治疗作用。方法： 用盐酸林可霉素注射液给实验小鼠灌胃 0.36 g/kg 连续 6 d，建立小鼠菌群失调模型。将小鼠随机分成 11 组，每组 10 只，包括一个正常对照组（CG） ，一个菌群失调模型组（MIG）和 9 个治疗组（根据不同剂量和治疗方法建立的 3 个 GSP 治疗组，3 个 BB 治疗组以及 3 个共同治疗组） 。连续 6 d 后，处死小鼠，取直肠粪便并用生理盐水稀释成 110-7、110-8、11
2、0-9 三个稀释度，行有氧及厌氧培养 48 h 后作菌落计数，数据进行统计学处理。结果： 成功建立了小鼠肠道菌群失调模型，MIG 组的需氧菌和厌氧菌菌落计数均低于 CG 组，并且在经过 GSP 和 BB 治疗后小鼠肠道菌群数量明显得到恢复，其中高剂量灵芝孢子粉和高剂量双歧杆菌治疗组的效果最好，与 CG 组及相应中、低剂量组比较有统计学意义（P0.05） 。结论： GSP 和 BB对治疗因抗生素引起的肠道菌群失调有显著的作用。 【关键词】 灵芝 双歧杆菌感染 细菌 需氧 细菌 厌氧 直肠 小鼠2Abstract Objective: To investigate the effect of Ga
3、noderma spore powder (GSP) and bifidobacteria (BB) on the intestinal microflora imbalance of mice.Methods: The mouse model of intestinal microflora imbalance were established by intragastric administration of lincomycin hydrochloride injection at a dose of 0.36g/kg for 6 days. The mice were randomly
4、 divided into 11 groups (10 mice in each) including one normal control group (CG), one microflora imbalance model group (MIG) and 9 treatment groups (3 for GSP, 3 for BB, and 3 for their combination in terms of different dosages and treating programs). In 6 days of treatment, mice were killed and in
5、testinal dejection was collected and diluted with asepsis NS into three different concentrations: 110-7, 110-8, and 110-9. The dejection dilutions were cultivated for 48 hours under oxygen or anoxic conditions and the obtained bacterial colonies were counted. Data were statistically analyzed with va
6、riance analysis method. Results: The model of mice with intestinal microflora imbalance was successfully established. The colony numbers of both aerobic bacteria and anaerobic bacteria in MIG were less than those of CG, and the colony numbers in microflora imbalanced mice increased after the treatme
7、nt of GSP or BB. 3In groups treated with high dosages of GSP or BB, the best curative results were obtained and significantly different from those of CG and groups received low dosages (P0.05). Conclusions: GSP and BB have obvious therapeutic effect on intestinal microflora imbalance of mice .Key wo
8、rds Gardenia；bifidobacteriales infections；bacteria, aerobic；bacteria, anaerobic; rectum; mice由于广谱抗生素种类的不断增多以及在临床上的不合理使用，抗生素在杀灭细菌的同时也破坏了肠道内菌群之间的正常关系，使其失去平衡，引起肠道菌群失调1。菌群失调会导致肠道正常菌无法合成维生素，影响蛋白质、糖、脂肪的消化吸收，同时可直接刺激肠道蠕动加快，使正常小肠细菌菌种分布变窄及数量减少而诱发抗生素相关性腹泻。菌群失调常规治疗除采取支持治疗和停用诱发腹泻的抗生素外，口服益生菌已成为防治的有效手段2。2006 年4 月2
9、007 年 9 月给小鼠经口灌胃灵芝孢子粉、双歧杆菌及两者的混合物，研究两种药物对小鼠肠道菌群失调的治疗作用。1 材料与方法41.1 材料盈康活胶囊制剂（含全破壁纯赤灵芝孢子） ，由上海第二医科大学及盈康科技控股国际有限公司联合研究，香港天维健康产品国际有限公司生产。盐酸林可霉素注射液（0.3 g/ml） 由福建省福清药业有限公司生产，MRS 培养基、普通肉汤琼脂培养基。1.2 动物 健康 68 周龄昆明种小鼠 110 只 ，体重（202 ） g ，雌雄随机，由贵阳医学院动物实验中心提供。1.3 实验方法110 只小鼠随机分成 11 组,每组 10 只。正常对照组：用无菌生理盐水（NS）灌胃
10、0.7 ml/d， 连续 12 d；菌群失调模型组：用 10 g/L 抗生素给小鼠灌胃 0.7 ml/d，连续 6 d，再用蒸馏水灌胃 0.7 ml/d，连续 6 d；灵芝孢子治疗组 30 只：按菌群失调造模后，用高(35%) 、中(5%)、低(2.5%)三种浓度的灵芝孢子液给小鼠灌胃 0.7 ml/d，持续 6 d；双歧杆菌治疗组 30 只：按菌群失调造模后，采用三种浓度的双歧杆菌液高(35%)、中(17.5%)、低(8.75%)给小鼠灌胃；灵芝孢子和双歧杆菌共同治疗组 30 只：按菌群失调造5模后，将高剂量灵芝孢子液与高剂量双歧杆菌液等量混合，再依次对倍稀释，配制成高、中、低三种浓度灌胃小
11、鼠。1.4 检测指标 观察记录各组小白鼠的活动状态、进食量、粪便形状。各组小鼠颈椎脱臼处死，取直肠成型粪便，无菌 NS 混合稀释后行有氧及厌氧培养 48 h 后作菌落计数，换算成对数值。 SPSS 软件 12.0 方差分析(LSD 法)实验结果。2 结果2.1 一般状态小鼠在给予抗生素灌胃 6 d 后，进食量减少，粪便含水量明显增加，有腹泻症状；各个治疗组治疗后，粪便含水量明显减少，腹泻症状减轻。2.2 肠道菌群由表 1 可知，经抗生素灌胃后的小鼠肠道中的需氧菌和厌氧菌菌落数明显减少，低于正常对照组，有显著差异性（P0.01） 。由表 2 可知，用不同剂量的灵芝孢子粉、双歧杆菌及二者混合物治6
12、疗后，各治疗组菌落数(需氧菌和厌氧菌) 都较模型组多，说明模型小鼠在经过灵芝孢子粉、双歧杆菌及二种混合物治疗后，其肠道内的细菌数有所恢复。灵芝孢子粉治疗高剂量组比中、低剂量组的菌落数(需氧菌和厌氧菌) 更多，与对照组及中、低剂量组比较，有显著差异性(P0.05)；双歧杆菌治疗高剂量组也较其中、低剂量组的效果好，与对照组及中、低剂量组比较，有显著差异性(P0.05。各剂量组的需氧菌和厌氧菌比较，厌氧菌数明显多于需氧菌数，有显著差异性(P0.05)。表 1 盐酸林可霉素对小鼠肠道菌的影响（略）注：(1)与正常对照组相比 P0.05。表2 灵芝孢子和双歧杆菌对小鼠肠道菌的影响（略）注：(1) 与灵芝
13、孢子中、低治疗组相比，P0.05;(2) 与双歧杆菌中、低治疗组相比，P0.05;(3)与共同治疗中、低组相比， P0.05;(4)与同药物同剂量的需氧菌比较，P0.05 。3 讨论人体肠道中生存着 100 万亿种微生物，包括细菌、真菌、病毒、原虫等，而对机体有益的仅有 1020 种，如拟杆菌属、乳酸杆菌属、梭状芽孢杆菌属、双歧杆菌属、埃希菌属等。这些生理菌群数量在一定范围波动时，能维持正常的生理和免疫功能，具有对抗外籍菌定植的能力，即定植抗力。同时，生理菌群还参与蛋白、7糖、脂肪的消化吸收、合成维生素等，对宿主有营养作用，对亚硝胺等致癌物质有降解的功能而起抗癌作用。生理菌群构成了人体的正常微
14、生态环境3。大量抗生素使用后，肠道生理菌群(乳酸杆菌、双岐杆菌等)受到抑制，对肠道有害菌（难辨梭菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等）的拮抗作用减弱，使这些细菌在结肠定植、繁殖而导致结肠炎和腹泻。另外，某些抗生素还可直接引起肠黏膜损害、肠上皮纤毛萎缩、细胞内酶的活性降低或与肠道内胆汁结合或直接促进肠蠕动而导致腹泻4。微生态制剂可调整肠道菌群失调，避免抗生素带来的种种不良反应，恢复肠道内的微生态平衡5，6。双歧杆菌经口服后，可与肠道内其它厌氧菌一起占据肠黏膜表面，构成生物学屏障，形成定植抗力，从而阻止致病菌和条件致病菌的定值入侵。此外，双歧杆菌通过发酵葡萄糖可产生大量醋酸、乳酸 ,使肠道 pH 值
15、降低，从而抑制一些致病性细菌，如伤寒杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单孢菌、变形杆菌以及真菌等致病菌的生长；并且它还可以合成细胞外糖苷酶，降解肠黏膜上皮细胞上的复杂多糖，从而阻止肠道内潜在致病菌及其毒素对肠黏膜上皮细胞的黏附7，8。此外，双歧杆菌在肠内可合成多种维生素和生物酶，如维生素 B1 、维生素 B2 、维生素 B6 、维生素 B12 、维生素 K1 、尼克酸和叶酸等；另外，双歧杆菌可通过产酸使肠道酸化，有利于 Fe2+、Ca2+及维生素 D 等营养物质的吸收。此外，双歧杆菌还具有清除自由基、抗氧化、增8强机体免疫力、减少诸多肠源性有害物质，如酚、氨、苯乙醇胺、吲哚、硫化氢等生成1,2。在菌群失调
16、的情况下，及时补充双歧杆菌可促进肠道功能恢复，减少相关疾病的发生。灵芝是食药两用真菌，中医认为灵芝有滋补、健脑、强身、消炎、利尿、益胃等功效。现代医学研究表明，灵芝安全无毒、无副作用，具有抑制肿瘤作用、调节免疫功能，促进骨髓细胞蛋白质、核酸合成代谢，对放射性损伤有保护作用，减轻化学药物对肝脏的损伤，加强肝脏代谢药物的降毒功能，降血糖及清除自由基作用9，10 。灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子，是灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。此外，它还具有调理肠胃作用，使肠道内益生菌增殖，从而纠正和预防抗生素引起的小鼠肠道菌群失调11。 本实验通过给小鼠经口灌胃抗生素的方法建立小鼠肠道菌群失调模型12 ，模型组小鼠出现进食量减少、活动量降低、粪便含水量增加等肠道菌群失调症状，肠道菌落数（需氧菌和厌氧菌）明显低于正常对照组，说明抗生素的使
