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1、1大肠癌组织 RhoE、p53 的表达及临床意义【摘要】 目的 探讨凋亡抑制蛋白 RhoE、p53 蛋白在大肠癌组织中的表达与不同临床病理特征的关系，以及二者在大肠癌发生过程中的相关性。方法 采用免疫组织化学法检测 48 例大肠癌组织和 30例正常肠组织中 RhoE、p53 蛋白的表达。结果 肠癌组织中RhoE、p53 蛋白阳性表达率分别为 14.58%和 62.5%，较正常组织差异非常显著(P0.01) ；RhoE 蛋白表达与 Dukes 分期明显相关(P 0.01)及淋巴结转移相关 (P0.05)；肠癌组织中 p53 与 RhoE蛋白表达显著负相关(P0.01) 。结论 RhoE 在大肠癌
2、组织中表达下调，并与大肠癌的 Dukes 分期密切相关，有可能作为判断病情和评价预后的新指标；RhoE 蛋白的表达与 p53 蛋白的表达呈负相关，提示 RhoE 与 p53 蛋白可能存在相关信号通路，有望为大肠癌基因治疗提供新的靶点。 【关键词】 大肠癌; RhoE; p53; 免疫组织化学Abstract: Objective To investigate the expression of RhoE and p53 in colorectal carcinoma tissue and the relationship with clinic pathologic factors, and
3、evaluate the relationship between expression of RhoE and p53 proteinsMethods Expression of the RhoE and p53 protein were evaluated by 2immunohistochemical assay in 48 colorectal carcinoma samples, 30 normal colorectal tissues. Results Expression of RhoE and p53 protein in colorectal carcinoma tissue
4、 were 14.58% and 62.5% respectively, which were significant difference (P0.01).The upregulation expression of RhoEwas related to the Dukes stages (P0.01) and lymph node metastases(P0.05). The expression of RhoE corelated with p53 expression (P0.01). Conclusion The downregulation expression of RhoE i
5、n colorectal carcinoma suggested that RhoE may play a role in the pathway of carcinogenesis. Expression of RhoE correlated with Dukes stages, which might be used to evaluate prognosisThe close relationship between the expression of RhoE and p53 indicate that these might be identified as a potential
6、therapeutic target in colorectal carcinoma.Keywords: colorectal carcinoma; RhoE; p53; immunohistochemistry大肠癌(colorectal carcinoma，CC)是一种常见的消化道恶性肿瘤，各种癌基因突变激活及抑癌基因失活在大肠癌发生发展中起重要作用。目前，大量研究显示 RhoE 很可能是一种新的抑癌基因，3但 RhoE 在大肠癌组织中的表达及与大肠癌患者临床病理相关因素的关系未见报道。本研究观测了 RhoE 在大肠癌组织中的表达，并分析其在大肠癌的发生、发展及转移中的作用。1 材料与方法
7、1.1 材料随机抽取重庆市肿瘤医院存档的 1996 年到 2006 年期间手术切除和病理证实的大肠癌标本 48 例，其中乳头状腺癌 18 例，管状腺癌 22 例，粘液腺癌 8 例；高分化腺癌 26 例，中分化腺癌 16 例，低分化腺癌 6 例；有淋巴结转移 30 例，无淋巴结转移 18 例。Dukes 分期： A 期和 B 期共 32 例，C 期与 D 期共 16 例，术前均未接受化疗和放疗。另选正常大肠组织 30 例作为对照。1.2 试剂鼠抗人 RhoE 多克隆抗体为中科院武汉分院惠赠，鼠抗人p53 单克隆抗体、超敏 SP 试剂盒和 DAB 显色试剂盒购于北京中杉生物技术有限公司。1.3 方
8、法4蜡块切片（厚 4 m）后，采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶连接(SP)染色法检测 RhoE、p53 蛋白的表达。用 PBS 代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。三种蛋白均采用 37 孵育 1 h，再放入 4 冰箱过夜， DAB 显色，苏木素复染。1.4 结果判断RhoE 阳性反应为淡黄至棕黄色颗粒，位于胞浆，p53 蛋白阳性反应为棕黄至棕褐色颗粒，位于胞核。在此基础上，参照文献12 评分方法，首先将染色强度评为 14 分，再按阳性细胞所占的百分比评为 04 分。染色强度与阳性细胞的分值相加，大于等于 3 分为阳性(+)，每张切片选择有代表性的区域，在 400 倍视野下计数，共计
9、5 个视野，取平均值。1.5 统计学方法所得数据用阳性率()表示，采用 SPSS11.5 软件进行卡方检验和 Pearson 相关分析。P0.05 为统计学相差显著。2 结果52.1 肠癌和正常肠组织中 RhoE、p53 蛋白的表达阳性染色呈棕黄色，RhoE 在肿瘤细胞的胞浆中表达，较弥散（图 1） ；p53 则在肿瘤细胞的胞核中表达（图 2） 。RhoE 蛋白在肠癌组织中的表达率 14.58%(7/48)，在正常肠组织的表达率为60（18/30） ，前者显著低于后者；p53 蛋白在肠癌组织中的表达率达 62.5%（30/48） 。2.2 RhoE、p53 表达与肠癌临床病理分期的关系在实验中
10、，RhoE 表达与 Dukes 分期显著相关(P0.01)，且与淋巴结转移相关(P0.05) ；而 p53 则与 Dukes 分期、淋巴转移无相关性（P0.05） ，见表 1。2.3 肠癌中 RhoE 表达与 p53 表达的相关性在 48 例肠癌组织中，有 30 例 p53 表达阳性，而在这 30 例中仅 7 例 RhoE 表达阳性。但在 18 例 p53 表达阴性的肠癌组织中，就有 6 例为 RhoE 表达阳性。经统计学分析得知，二者表达呈负相关（P0.01） 。表 1 肠癌组织 RhoE、p53 表达与临床病理的关系3 讨论6RhoE 是 Rnd 家族的一员，Rnd 亚家族与 Rho 家族
11、蛋白不同之处在于它们可以结合但不能水解 GTP35 。因此，RhoE 在细胞的表达水平决定了 RhoE 的活性。RhoE 的生物学功能之一就是可以调节肌动蛋白细胞骨架的重组, 从而调节细胞的形态和细胞的迁移能力, 在细胞的迁移、转移中具有重要的作用。采用基因芯片技术分析具有不同转移潜能的两个前列腺癌细胞系的基因表达谱, 发现 RhoE /Rnd3 在具有高转移潜能的细胞系中表达水平显著增高, 证实 RhoE /Rnd3 与肿瘤转移密切相关6 。近年的研究还表明 RhoE 还有抗肿瘤细胞增殖的作用，许多学者认为是一种新的抑癌基因。RhoE 表达很广泛，但它在不同的细胞中表达水平有很大的差别。在分
12、析良性前列腺组织和前列腺肿瘤患者的受累组织中 RhoE /Rnd3 的表达水平时发现前者较高，后者则表达水平较低甚至检测不到7 ，然而 RhoE 在胰腺癌细胞和黑色素瘤中的表达却是升高的89 ，这也表明 RhoE 在不同的细胞中发挥不同的作用。本实验发现，RhoE 在大肠癌中的表达是升高的，说明 RhoE 在大肠癌的发生发展中可能发挥了一定的作用，对大肠癌的诊断有一定意义。同时发现 RhoE 与 Ducks 分期及淋巴结转移有关，检测 RhoE 水平可以作为预后的检测指标之一。p53 基因是一种肿瘤抑制基因，该基因编码一种分子量为53 kDa 的蛋白质，命名为 p53。p53 基因的失活对肿瘤
13、形成起重7要作用。p53 蛋白主要集中于核仁区，能与 DNA 特异结合，其活性受磷酸化调控。正常 p53 在 G1 期检查 DNA 损伤点，监视基因组的完整性。如有损伤，p53 蛋白阻止 DNA 复制，以提供足够的时间使损伤 DNA 修复；如果修复失败，p53 蛋白则引发细胞凋亡。用免疫组化方法检测到的是 p53 蛋白突变型。Ongusaha10的研究表明存在 p53/RhoE/ROCKI 信号通路， RhoE 是一个新的 p53的靶基因，且 RhoE 沉默的细胞显示应对 DNA 损伤的凋亡倾向增加。本研究也显示 RhoE 在大肠癌组织中的表达与 p53 的表达呈负相关，间接证实了这一信号通路
14、的存在。综上所述，本文得出以下结论：RhoE 在大肠癌组织中表达下调，说明 RhoE 可能是通过抑制大肠癌细胞的凋亡，从而在肠癌的发生、发展中发挥作用。RhoE 表达与大肠癌 Ducks 分期密切相关，有可能作为判断病情和评价预后的新指标。RhoE 的表达与p53 蛋白的表达呈负相关，说明 RhoE 蛋白与 p53 蛋白有相关信号通路存在，有助于为大肠癌的基因治疗找寻新的靶点。【参考文献】 1 Torm anenNapankangas U, Soini Y, Kahlosa K, et al. Expression of caspases3,6 and their relation to ap
15、optosis in nonsmall cell lung carcinomaJ . Cancer, 2001, 93(2): 192-198.82 Ikehara M, Oshita F, Kameda Y, et al. Expression of surviving correlated with vessel invasion is a marker of poor prognosis in small adenocarcinoma of the lungJ. Oncol Rep, 2002, 9(4): 835-838.3 Foster R, Hu KQ, Lu Y, et al.
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