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1、1大肠癌并肝转移患者生长抑素型受体表达的研究作者：董涛涛郑春宁殷宗秀蒋秀玉孙少川【摘要 】 目的:通过研究生长抑素型受体（somatostatin receptor typle ，sst2）在大肠癌并肝转移患者病变组织中的表达，探讨生长抑素治疗该类患者的可行性及其作用机制。方法: 采用实时 RT-PCR 法及免疫组织化学两种方法测定 32 例大肠癌患者原发灶及相应肝转移灶中 sst2 的表达，采用方差分析对患者的年龄、性别、肿瘤位置、组织学分型、生长方式、术前 CEA 水平等方面进行比较。结果:sst2 在所有检测的原发肿瘤组织中均有表达，与肿瘤的位置、生长方式、组织学类型不相关（P0.05）
2、 ；肝转移灶中表达的 sst2 量与原发灶相比，差异无统计学意义（P0.172 1） ；伴有 CEA 升高（ 5 ng/mL）的患者，其肝转移灶及原发灶均较术前 CEA 较低（ 5 ng/ml）患者 sst2 表达下调（原发灶，CEA升高 vs CEA 降低 P=0.002 7；肝转移灶， CEA 升高 vs CEA 降低P0.05）. The difference of sst2 expression in primary and metastatic tissues had no statistical significance（P0.1721）. The expressions of s
3、st2 in patients with higher CEA（5ng/mL）were less than those in patients with lower CEA（5ng/mL）(primary tumor P=0.0027, liver metastasis P5 张） 。所有病例均常规进行HE 染色及组织学检查。切片交由不了解生长抑素状况的两位病理医师检查，确定肿瘤病理组织学及分化程度分级。其中 12 例为G1， 10 例为 G2，8 例为 G3，2 例为胶质癌。每例患者原发灶及肝转移灶至少获取组织一块（1.5 cm1.5 cm1.5 cm） 。样本迅速冷冻并在液氮中保存。所有病
4、例术前均检测 CEA，11 例患者术前CEA5 ng/mL。1.2RT-PCR 对 sst2 mRNA 表达的定量分析每例标本通过RNeasy kit 获得总 RNA 值。应用 ABI Prism 7700 序列检测系统对 sst2 mRNA 进行定量分析，所用的引物以及探针参照文献4 。产物的量通过插入标准曲线获得。标准曲线由从成神经细胞瘤细胞株 CHP404（高度表达 sst2 mRNA）提取的 RNA 绘得4 。1.3免疫组织化学法对 sst2 表达的分析 兔抗人 sst 单克隆抗体、SP 免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新公司。联苯二胺为北京中山生物工程公司产品。采用 SP 法，实验步骤
5、严格遵照试剂盒说明。在 400 倍光镜下随机取 6 个区域。结果以染色阳性区域占总的区域的百分比表示。1.4统计学处理采用 SPSS 12.0 统计软件, 应用 t 检验以及单因素方差分析并采用直线相关回归分析数据， 0.05 为差异有5统计学意义。2结果2.1定量 RT-PCR 检测 sst2 mRNA原发肿瘤组织 sst2 mRNA 表达的范围为（2.313.1）107g-1，均数为（1.12.1） 107g-1。肝转移灶中 sst2 mRNA 的表达（0.89220.0） 107g-1, 均数为（12.13.8 ）107g-1。原发灶与肝转移灶 sst2 表达情况比较，44 （14/32
6、）患者升高（原发灶: 转移灶 1.2） ，50%（16/32）患者下降（原发灶:转移灶0.8） ， 6.25（2/32）患者二者相同（ 0.8 原发灶:转移灶0.05，表 1） 。sst2 的表达与其他指标如年龄、性别、肿瘤位置、组织学特征也无相关性（P0.05） 。然而，术前 CEA 水平升高的病例，其 sst2 的表达为（7.6 3.3） 107g-1，在原发灶及转移灶中均低于术前 CEA 水平正常的患者（11.73.5）107g-1，P=0.002 7，见表 1。2.2免疫组织化学法检测 sst2 表达sst2 在结直肠癌肿瘤细胞中呈中等强度、弱阳性或阴性表达 （图 1） 。间质细胞亦有
7、少量弱阳性或中度阳性表达。32 例结直肠癌组织中， sst 阳性表达的半定量分析的结果差异很大，3.2 17.6%，平均为（10.14.01）%6。3讨论2007 年美国 NCCN 肿瘤治疗指南中指出，当患者耐受手术且肝转移灶可以切除时，应在新辅助化疗后争取一期或分期切除原发灶及转移灶。对于转移灶不可切除但原发灶可能引起梗阻的患者，仍应争取在全身情况及肝功能允许的情况下切除原发灶5 。Pozzo 等6报道利用依利替康联合氟尿嘧啶及亚叶酸钙的新辅助化疗，使 32.5的伴有不可切除肝转移灶的患者最终切除了肝转移瘤。另一些研究表明，包含阿霉素或 2-pyrrolinodoxorubicin 的细胞毒
8、性生长抑素类似物有效的抑制表达 sst2 和 sst5 的人乳腺癌和前列腺癌生长7 。体外对大肠癌细胞株或体内对荷瘤裸鼠的研究表明，应用生长抑素及其类似物能明显抑制许多大肠癌细胞株的生长，但对于其受体阴性的肿瘤细胞株并无作用，表明生长抑素发挥抗增殖作用主要是通过于其受体结合而实现。与 123I 或 111In 耦联的生长抑素类似物已在核医学上用于对生长抑素受体阳性肿瘤及其转移灶的定位8 。上述研究推进了将有效的生长抑素类似物应用于对大肠癌治疗的探索。在一部分病例，短效生长抑素的确降低了原发灶增殖速率。然而，对于大多数大肠癌患者来说，生长抑素类似物并未能延长患者的总体及无瘤生存期。这些结果的不统
9、一可以用以下几个7原因解释：1）不同的试验应用生长抑素的量并不同，在患者选择方面目前亦未有统一认识。2）即便对于那些生长抑素受体高表达的患者来说，生长抑素类似物的抗肿瘤增殖作用本身尚未能达到一定的强度以作为对手术或化学疗法的辅助治疗。近来关于生长抑素不同亚型受体在大肠癌中表达情况的报道甚多，但结果却并不统一。应用传统的定量 RT-PCR 法，Buscail 等9发现 15 型的表达情况不一，且在进展期肿瘤 sst2 表达缺失。Laws 等10同时使用 RT-PCR 和原位杂交技术观察到在进展期肿瘤中 sst2 仍有表达，但 sst5 却明显下降。Vuaroqueaux 等11使用 RTPCR
10、表明 sst5、sst1 和 sst2 在大肠癌及正常黏膜中均有较多表达，并且并不因肿瘤的进展而表达减少。结果不同可能来源于所用方法不统一，毕竟无论是 RT-PCR、原位杂交还是免疫组织化学的方法，测定 sst 都存在一定不足。本研究在应用 RT-PCR 时，32 例肿瘤原发灶中均有 sst2 的表达，均数为 11.1107 g-1。采用免疫组织化学方法，所有原发灶均有 sst2 的表达。此外，在同时运用上述两种方法对肝转移灶进行检测时，并未发现 sst2 的表达与原发灶有显著性差异，表明只有很少一部分肝转移灶能表达更多的 sst2，也就是说临床上只有很少一部分肝转移灶能表现出对生长抑素类似物
11、具有更强的敏感性。8sst2 表达状况与肿瘤临床病理特征关系的研究表明：sst2 表达与肿瘤的位置、生长方式及组织学特征并无明显相关性。因此，并不能认为随着肿瘤生物学行为的恶化（包括浸润及远处转移） ，sst2 的表达下调。CEA 基因是大肠癌中众多表达上调的最常见的一个。约50的大肠癌患者，升高的 CEA 蛋白释放入外周循环。术前 CEA是推荐的对大肠癌进行临床分期和手术预案制定的血清标记物，也是术后对患者进行随访的重要指标。本研究发现术前 CEA 水平明显上升的病例，其原发灶和转移灶中 sst2 表达均明显下调。然而，sst2 在判断预后，尤其是对患者的长期随访方面的作用有待进一步研究证实。基于 RT-PCR 和免疫组
