《反相高效液相色谱法测定茄根中绿原酸含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《反相高效液相色谱法测定茄根中绿原酸含量（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1反相高效液相色谱法测定茄根中绿原酸含量【摘要】 目的建立茄根中绿原酸含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定法。方法色谱柱为 YMC-Pack ODS-AA（150 mm 4. 6 mm, 5 m） ，以乙腈-甲酸水的梯度流动相洗脱，检测波长323 nm，流速 1 ml min-1, 柱温 30 。结果在线性范围内 (0. 005 0. 04 mg ml-1) 绿原酸对照品的标准曲线呈良好的线性关系( r = 0. 999 8 ), 茄根中绿原酸的含量为 0. 108 mg g-1，RSD为 2. 4%；平均回收率为 98. 51 %，RSD 为 2. 7 %。结论可通过RP-HPLC
2、测定茄根中绿原酸含量, 为茄根的进一步开发利用提供科学依据。 【关键词】 白茄根； 绿原酸； 反相高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid content in the dried root of Solamum melongena L.MethodsChromatographic condition included a YMC-Pack ODS-AA（150 mm4.6 mm, 5 m）, a gradient solvent system of acetonitr
3、ile and water was applied from 10% to 60% of acetonitrile within 30 minutes with the detection wavelength at 323 nm. The flow rate was 1. 00 mlmin-1 and column temperaturewas set at 30 . 2ResultsThe linear relationship of chlorogenic acid was determined within the range from 0. 005 to 0. 04 mg ml-1
4、(r = 0.999 8). Using the method above, the content of the chlorogenic acid was determined as 0. 108 mg g-1，RSD was 2. 4%, with the recoveries as 98.51% with RSD was 2. 7%. ConclusionA convenient and reliable method was established to determine the content of chlorogenic acid in the dried root of Sol
5、amum melongena L. .Key words：Solamum melongena L.; Chlorogenic acid; RP-HPLC 茄根为土家族常用药物之一，来源于茄科茄 Solamum melongena L. 的干燥根，具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等功效。主治牙痛、风湿热痹、冻疮、脚气、血痢、便血等。茄根含有酚类、有机酸、生物碱、皂苷、鞣质等多种成分。实验表明酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位, 对多种炎症具有很好的治疗效果1 。目前有关茄根酸性成分的研究目前报道甚少。茄是我国主要蔬菜品种之一，全国各地广为种植。茄收获之后产出大量茄根。本文探索建立了采用 RP-HP
6、LC 测定茄根中酸性成分 绿原酸的定量分析方法。该方法简便快速，待测组分分离度好，精密度及准确度高，稳定性好，可为茄根的深入开发利用以及质量标准的制订提3供研究基础。1 仪器与试药Varian 210 分析型高效液相色谱系统（210 型二元梯度泵、210型紫外检测器，美国 Varian 公司） ；ME215S 型十万分之一电子天平（德国 Sartorius 公司） ；SZ-93 自动双重纯水蒸馏器 (上海亚荣生化仪器厂) ；KQ-500DB 型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司） ；乙腈为色谱纯（fisher 公司） ，水为二次蒸馏水（自制） 。茄根：采自中国湖北长阳；对照品：绿原酸，购自 S
7、igma 公司，纯度98%。2 方法与结果2.1 色谱条件 YMC-Pack ODS-AA（150 mm 4. 6 mm, 5 m）色谱柱； 柱温 30 ；流速 1 ml min-1；检测波长 323 nm；进样量 20 l；流动相为乙腈（B）- 0. 5%甲酸水(A) 梯度流动相，见表 1。在优化的色谱条件下，对照品与供试品的保留时间一致（14. 7 min） ，供试品中绿原酸成分达到有效分离 , 分离度大于 1. 5。对照品以及供试品的色谱图见图 1。表 1 流动相（略）2.2 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品适量，加重蒸馏4水制成每毫升含 1 mg 的绿原酸溶液，作为对照品溶液贮备液，
8、低温保藏备用。2.3 供试品溶液的制备称取茄根粉末（60 目筛，50 烘干）约 2 g，置 10 ml 容量瓶中，加入 70%甲醇至刻度，室温下浸渍 8 h， 40 超声 2 h , 用 70%甲醇补足溶剂至刻度。过滤，制成每毫升含 0. 2 g 的茄根溶液，作为供试品溶液，低温保藏备用。临用时以 0. 22 m滤膜滤过。2.4 线性关系考察分别吸取对照品贮备液适量，配制成 0. 005, 0. 01, 0. 02, 0. 03, 0. 04 mg ml-1 的系列对照品溶液，按“2.1”色谱条件分别进样 20 l，记录色谱峰面积。以色谱峰面积(Y, mAU)为纵坐标，以对照品溶液浓度(X,
9、mg ml-1)为横坐标，进行线性回归，得对照品的回归方程：, Y=71.054X-0.115，r= 0.999 8。 线性范围 0. 0050. 04 mg m-1。2.5 精密度实验精密吸取各对照品溶液 20 l，按“2.1”中色谱条件连续进样，测定平均色谱峰面积为 12941685，计算 RSD为 1. 2%。表明仪器的精密度良好。2.6 重复性实验 精密称取 6 份茄根药材粉末各 2. 0 g, 按“2.3”方法平行制备，在上述色谱条件下进行分析，测定色谱峰面积，计算茄根样品中绿原酸的平均质量分数为 0.110 mg g-1，其5RSD 为 1. 8%。2.7 稳定性实验精密吸取供试品
10、溶液 20 l，分别在0，4 ，8 ， 24 h 进样分析，记录色谱峰面积，测定平均峰面积为16611613，计算 RSD 为 3. 4%，表明 24 h 内供试品溶液稳定性良好。2.8 回收率实验取已知绿原酸含量的茄根样品 9 份，每份约1 g，精密称定。平均为 3 组。各样品分别加入已知浓度的对照品贮备液适量, 按供试品溶液制备方法平行制备。按“2.1” 中色谱条件，分别进样 20 l进行测定。结果绿原酸的平均回收率（n= 9）为 98. 51%，RSD 为 2. 7%。结果见表 2。表 2 回收率实验结果（略）2.9 样品分析取茄根样品（60 目筛， 50 烘干至恒重）6份，每份约 2.
11、 0 g，精密称定。按“2.3”项下方法制备供试品溶液。按“2. 1”项下色谱条件进行分析测定。以 20 l进样，测定色谱峰峰面积，根据标准曲线计算样品中绿原酸的质量分数。绿原酸平均质量分数为 0. 108 mg g-1，RSD 为 2. 4%。结果见表 3。表 3 样品中绿原酸含量（略）3 讨论63.1 供试品制备方法的考察本实验比较了不同浸提方法（冷浸、回流和不同温度下超声）和不同提取时间（30, 60, 120 min）的提取效果，考察了不同浓度的溶剂以及不同固液比的提取率，发现采用 40 超声浸提 2 h，固液比为 15，提取溶剂为 70%甲醇具有最佳的提取效率，能够提出茄根中绿原酸成
12、分。3.2 色谱条件的选择为了能在适宜的分析时间内获得指标成分的完全分离，在实验中分别用甲醇-水、乙腈-水、乙腈- 甲酸水、乙腈-磷酸水等体系进行洗脱，发现甲醇- 水洗脱基线不平稳，分离度差，乙腈-水洗脱基线平稳，但分离度仍不够好，而乙腈-甲酸水和乙腈-磷酸水体系的分离效果同乙腈- 水体系的分离效果相比较有了进一步改善。故最终确定用乙腈-甲酸水体系为流动相。这是因为绿原酸具有邻苯二酚多羟基结构, 常以盐的形式存在于植物中, 酸性条件有利于其测定, 并且合适的酸度还能改善峰形2 。实验中还对不同波长、柱温和流速进行了考察, 发现在检测波长 323 nm 处茄根中绿原酸成分有较强的紫外吸收, 同时
13、为保证茄根中绿原酸达到有效分离，在其色谱峰的保留时间段保持较小的梯度变化。本文对采用超声辅助浸提的方法制备茄根供试品，建立了 RP-HPLC 法测定茄根中绿原酸的含量。测得茄根中绿原酸含量为 0. 108 mg g-1，RSD 为 2. 4%。同时还进行了方法学验证，精密度7实验 RSD 值为 1. 2%；重现性实验的 RSD 值为 1. 8%；稳定性实验的 RSD 值为 3. 4%（0 24 h） ；回收率为 98. 51%，RSD 值为 2. 7%，结果表明方法的精密度、稳定性、回收率等指标满足测定需要。绿原酸具有抗菌消炎、抗氧化、抗肿瘤等生物活性3 。本研究为茄根中药材质量标准的制订提供科学依据，也为深入开发利用茄根提供研究基础。【参考文献】1汪鋆植. 茄根酸性组分对牙周炎的治疗作用及作用机理研究D. 成都中医药大学博士学位论文，2004，4 ：1.2童 玲, 欧阳湘云, 韩玉波, 等. 微波助提取及 HPLC 检测杜仲叶中的绿原酸J. 分析试验室，2008，27（5）：127.3赵永成. 高效液相色谱法测定杜仲叶中的绿原酸J. 色谱, 2000, 18(3): 263.
