《雷帕霉素联合卡托普利对大鼠同种异体血管病的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《雷帕霉素联合卡托普利对大鼠同种异体血管病的作用（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询雷帕霉素联合卡托普利对大鼠同种异体血管病的作用【摘要】 目的 研究雷帕霉素(RPM)和卡托普利单独或联合用药对大鼠同种异体血管病(CAV)的作用。 方法 建立大鼠同种异体颈动脉移植模型,分别给予蒸馏水、卡托普利、RPM 及联合用药（卡托普利+RPM）处理,在移植前和移植后 8 周查血清 NO 含量,取组织检测血管内膜厚度,免疫组织化学检测移植动脉中 TGF1 、VCAM1 的表达和 PCNA 阳性细胞百分率及 CD4+T 淋巴细胞的浸润情况。 结果 卡托普利和 RPM 均可减轻移植动脉血管内膜的增厚程度,联合用药组动脉血管内膜增厚程度最小。各
2、组的血管因子表达情况和 CD4T 细胞的浸润存在差异。 结论 RPM 和卡托普利均可延缓移植后 CAV 的发生、发展,二者联合用药效果更好。 【关键词】 雷帕霉素; 卡托普利; 心脏移植 ; 血管疾病; 移植,同种; 疾病模型,动物ABSTRACT: Objective To investigate the effects of sirolimus or catopril and their combination on allograft angiopathy in rats. Methods The establishment of allograft 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,
3、欢迎来我主页查询model was achieved by carotid transplantation in rats. 60 rats were randomly classified into four groups according to being given different medicine: the controlled group(A), catopriltreated group (B), sirolimustreated group(C) and combinationtreated group(D). At 0, 8 weeks after transplanta
4、tion the NO content in blood serum were measured and the grafts were harvested for observing the regional changes in the intimal layers by light microscopy and the expression of TGF1, VCAM1, PCNA% and CD4+T cells count in the allograft by immunohistochemistry. Results There was a reduced intimal thi
5、ckness in both catopriltreated group and sirolimustreated group, especially in the combined treated group. The number of CD4+T cell infiltration in allograft of group B, group C and group D was less than that of group A(P 0.05). The NO content in serum of group B and group D was higher than that of
6、group A(P 0.05). There was weak expression of TGF1, VCAM1 in allograft and lower PCNA(%) in group B, group C and group D than those in group A(P 0.05). Conclusion The prevention of catopril and sirolimus on allograft angiopathy is significant and the effect was most obvious when drugs were used comb
7、inedly.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询KEY WORDS: catopril; sirolimus; allograft angiopathy; rats心脏移植后同种异体血管病(CAV)是影响心脏移植病人长期存活的一个主要原因。CAV 病变呈现多样性,既有向心性纤维内膜增生的改变,也有类似于普通冠心病的偏心性粥样斑块形成1。笔者应用大鼠同种异体颈动脉移植模型,对雷帕霉素(RPM)和 ACEI 类药物卡托普利在移植物慢性血管病变中的作用进行研究,报道如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物 供体 Wistar 大鼠上海斯莱克实验动物有限责任公司,合格证号:S
8、CXK(沪):20030003, 受体 SD 大鼠福建医科大学实验动物中心提供, 合格证号:SCXK(闽):20040002, 各 24 只,均为雄性,体质量 200250。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.1.2 分组 配对移植后受体随机均分成 4 组(各 6 只)。蒸馏水组：移植当天经口灌胃蒸馏水;卡托普利组：卡托普利 50 mgkg-1d-1;RPM 组：RPM 3 mgkg-1d-1;联合用药组:卡托普利(50 mgkg-1d-1)+RPM（1.5 mgkg-1d-1）。给药浓度根据实际体质量调整。1.1.3 药品、试剂及器械 卡托普利(中美上海施贵宝制药有限公司
9、,批号:0503061H);RPM(福建微生物研究所,批号:040301);一氧化氮试剂盒 酶法(深圳晶美生物制品工程有限公司);TGF1 试剂盒(美国 Santa Cruz 生物公司);PCNA、VCAM1 试剂盒(美国NeoMarkers 公司);鼠抗兔 CD4 试剂盒(英国 Serotec 公司);S105 酶标仪,BX41 双目显微镜,Imagepro Plus 计算机显微摄像系统和JD801 形态分析软件(美国捷达科技公司)。1.2 方法1.2.1 模型建立 供、受体以 1戊巴比妥钠 (40 mg/kg)腹腔注精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询射麻醉。切除受体部分颈
10、总动脉,将供体颈总动脉植入受体颈部, 110 无损伤丝线间断内膜外翻缝合供、受体颈总动脉的两端(端端吻合),吻合时间20 min。移植后 1 周打开切口观察,动脉通畅为手术成功,血管栓塞为移植失败。1.2.2 受鼠血清提取 分别于移植时和切取标本时抽取静脉血 3 mL,离心吸取上层血清 0.5 mL 查 NO 的含量。1.2.3 移植物切取和组织学研究 术后第 8 周切取移植动脉。切取的移植血管固定、包埋、切片,行苏木精染色。每个标本随机取 5个不连续切面,计算机显微摄像系统将染色的病理图像输入计算机,JD801 形态分析软件分析测量内膜厚度。1.2.4 移植物 CD4+T 淋巴细胞浸润数计算
11、 以细胞质染成棕黄色、黄色者为阳性细胞,在高倍镜下(400)连续选取 5 个视野,网格目镜计数得出每个视野的阳性数,取平均值。1.2.5 免疫组织化学染色法检测移植物转化生长因子精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1 （TGF1 ） 、血管内皮细胞黏附因子1 （VCAM1 ）的表达 光学显微镜观察阳性为细胞质中有棕色、黄色颗粒,测灰度值(JD801形态分析软件测得平均灰度,以灰度值大小与表达多少成反比)。核细胞增殖抗原（PCNA）阳性细胞的表达(阳性细胞核染色为棕褐、棕黄、浅黄色),随机计数 500 个细胞,以阳性细胞为分子计算 PCNA 表达指数并用百分比表示。1.3 统计学
12、处理 数据用 xs 表示,应用 SPSS 11.0 统计软件进行方差分析及两两比较,P0.05 为差别有统计学意义。上一页 1 2 下一页2 结果2.1 一般情况 实验中无动物死亡,全部移植血管取材时均通畅。2.2 形态学观察 移植后 8 周:蒸馏水组移植动脉管腔明显变窄,内皮细胞基本覆盖整个管腔,内膜增厚明显,血管壁有多量的炎症细胞浸润;卡托普利组内皮细胞增多,内皮轻度增厚,血管壁各层可见少量炎症细胞;RPM 组动脉内膜轻度增厚,各层炎症浸润明显减少;联合精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询用药组内膜未见明显增厚,未见明显的炎症细胞浸润(图 1)。A：内膜增厚明显; B：内皮
13、细胞增多,内皮轻度增厚; C：动脉内膜轻度增厚; D：内膜未见明显增厚.图 1 移植后 8 周 4 组内膜厚度的变化(HE 染色 400)（略）Fig 1 The change of endomembrane in the four series of allografts after 8 weeks(HE staining 400)2.3 内膜厚度 移植前内膜厚度为(4.260.17)m,移植后 8 周蒸馏水组、卡托普利组、RPM 组及联合用药组移植物内膜厚度依次为(47.463.20),(8.661.09),(5.040.22)及(4.540.10)m,前 3 组与移植前比较,P0.05,
14、联合用药组 P0.05;移植后 4 组两两比较，P0.05。2.4 病理组织化学 血清 NO 含量、血管壁 VCAM1 与 TGF1精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询的表达(平均灰度)、PCNA 阳性细胞百分比和 CD4+T 细胞浸润数见表1。2.5 免疫组织化学表达 移植后 8 周各组血管壁VCAM1 、TGF1 、PCNA 阳性细胞的表达情况(图 2)。蒸馏水组平滑肌细胞和内皮细胞核 PCNA 阳性表达明显增多,表明平滑肌增殖明显,且有向内膜层生长倾向;联合用药组表达最少,且在内膜层未发现PCNA 阳性细胞。表 1 4 组移植动脉病理组织学检查结果（略）Tab 1 The
15、 output of detection in allograftsNO：一氧化氮； VCAM1 ：血管内皮细胞黏附分子1 ； TGF1 ：转化生长因子 1；PCNA：核细胞增殖抗原； RPM：雷帕霉素. 与蒸馏水组比较,:P 0.05; 与卡托普利组比较,#:P 0.05.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询3 讨论目前国际上普遍认为 CAV 发病的主要因素包括了免疫性和非免疫性(再灌注损伤、病毒尤其是巨细胞病毒感染、肥胖、高血压、高脂血症等)因素,在防治 CAV 时主要采取服用免疫抑制剂方法从而抑制免疫反应和减少非免疫因素。根据“损伤反应”理论,移植物血管病变是持续血管损伤
16、产生的结果,这些损伤因素包括免疫反应和一些非特异性损伤2。血管内皮的损伤触发了一连串“组织修复”机制引起血管细胞增殖、纤维化及血管重构。NO 是抗黏附分子,体外 NO 供体给药可以抑制VCAM1 的表达,体内给药可抑制中性粒细胞粘附于血管内皮细胞,中性粒细胞黏附于毛细血管的作用可被外源性 NO 阻断。缺血再灌注损伤是冠状血管内皮细胞功能障碍的起始点,给予 LArg 可以促进NO 的生成,减轻缺血再灌注对内皮的损伤,对预防 CAV 的形成有一定的意义。NO 还能抑制血管平滑肌细胞的迁移、增殖,抑制血小板聚集、白细胞的黏附及大量细胞外基质的累积。动物实验与临床研究表明 ACEI 类药物有保护血管内皮细胞的作用,能够逆转高血压与高血脂引起的内皮细胞损伤,表现出抗动脉粥样硬化作用3。本研究显示,卡托普利能提高血清中 NO 含量,
