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1、1低浓度 HBsAg 人群 HBV DNA 与 HBV M 定量结果的关系及评价作者：成军 孙长贵, 陈瑜, 许志良, 戴玉柱, 孙关忠, 李晓军【摘要 】 目的: 比较高、 低浓度 HBsAg 阳性人群乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)与乙型病毒肝炎标志物(HBV M)含量之间的差异, 揭示低浓度 HBsAg 人群 HBV DNA 与 HBV M 之间的特点。方法: 对 264 例慢性 HBV 感染者的 HBsAg 浓度(高浓度 HBsAg 组、 低浓度 HBsAg 组) 及自然史(免疫耐受期、 免疫清除期、 非活动期)进行分组, 采用实时荧光聚合酶链反应 (PCR)和微粒子酶免疫试验(ME
2、IA)对 147 例低浓度 HBsA 组和 117 例高浓度 HBsAg 组的血清标本进行 HBV DNA 和 HBV M 的定量测定并进行比较。结果: 低浓度 HBsAg 组免疫耐受期 7 例、 免疫清除期 4 例血清标本 HBV DNA、 抗HBs 、 HBeAg、 抗HBe 之间的差异存在统计学意义(t=2.5319.181, P0.05); 高浓度 HBsAg 组免疫耐受期 25 例 HBV DNA 与HBeAg、 抗 HBe 存在相关性 (r=0.7440.772, tr=3.8584.207, P0.01), 免疫清除期 46 例和非活动期 46 例 HBV DNA 则仅与2抗 H
3、Bs 存在负相关性(r=-0.693-0.598, tr=-4.616-3.936, P0.010.05)。结论: 低浓度 HBsAg 人群具有特殊的血清学特点, 可能与机体免疫耐受及免疫系统个体化反应有关。 【关键词】 乙型肝炎病毒标志物 ; 慢性 HBV 感染; 乙型肝炎表面抗原 Abstract AIM: To analyze the quantitative differences between hepatitis B virus markers (HBV M) and HBV DNA in population with highlevel or lowlevel HBsAg, a
4、nd to reveal the characteristics of HBV DNA and HBV M in population with lowlevel HBsAg. METHODS: A total of 264 chronic HBVinfected patients were enrolled in our study, and were divided into lowlevel HBsAg group(147 cases) and highlevel HBsAg group(117 cases) based on the HBsAg level or were divide
5、d into immune tolerance stage, immune clearance stage and nonactive stage based on the natural history. Realtime PCR and microparticle enzyme immunoassay (MEIA) were used to determine the content of HBV DNA and HBV M in serum samples of highlevel and lowlevel HBsAg patients, respectively, then the q
6、uantitative results were compared. RESULTS: There were statistically 3significant differences between HBV DNA and HBV M (antiHBs, HBeAg and antiHBe) of lowlevel HBsAg patients in immune tolerance stage(7 cases) and immune clearance stage(4 cases)(t=2.531-9.181, P0.05). In highlevel HBsAg group, HBV
7、DNA was positively correlated with HBeAg and antiHBe in 25 cases of immune tolerance stage(r=0.744-0.772, tr=3.858-4.207, P0.01), and was only negatively correlated with antiHBs in 46 cases of immune clearance stage and 46 cases of nonactive stage(r=-0.693-0.598, tr=-4.616-3.936, P0.01-0.05). CONCLU
8、SION: Population with lowlevel HBsAg have specific serological characteristics, which may be correlated with organic immune tolerance and individualized immune responses. Keywordshepatitis B virus marker; chronic HBV infection; HBsAg41 材料和方法11 标本 随机收集日常门诊、 住院患者及体检人群慢性 HBV感染者低浓度 HBsAg 血清标本 147 份(低浓度
9、HBsAg 组, 以卫生部临床检验中心提供的 HBsAg 定值质控血清 5 g/L 为标准, HBsAg 含量 5 g/L 定义为低浓度, 经 ELISA 筛选后 Abbott Axsym 免疫分析仪测定低浓度 HBsAg 含量79S/N), 其中免疫耐受期 25 例、 免疫活动期 46 例、 非活动期 46 例; HBsAg/HBeAg/抗 HBc 阳性 31 例, HBsAg/抗 HBe/抗 HBc 阳性 86 例; 血清标本分装置-70保存。12 试剂与仪器 ABI 7000 型荧光定量 PCR 仪( 美国 ABI 公司); 核酸浓缩液、 HBV DNA 荧光定量 PCR 试剂( 上海申
10、友生物工程有5限公司); AXSYM 自动免疫分析仪及其检测 HBsAg、 抗HBs 、 HBeAg、 抗HBe 、 抗HBc 试剂(美国 Abbott 公司)。13 方法 (1)采用实时荧光 PCR 定量测定两组血清标本的 HBV DNA, 对未检测到 HBV DNA 的低浓度 HBsAg 组及高浓度 HBsAg组标本采用浓缩法: 血清 500 L+500 L 核酸浓缩液(临界对照、 阴性对照、 阳性对照与血清标本同样处理, 参比品无需处理), 振荡混匀 4静置 5 min, 15 000 r/min 离心 5 min 弃上清, 加入 50 L裂解缓冲液(直接法: 血清 50 L+50 L
11、裂解缓冲液 , 以下步骤浓缩法与直接法相同), 剧烈振荡或用枪头搅碎至无沉淀后短暂离心, 沸水浴 10 min, 15 000 r/min 离心 5 min 取上清液备用 , 或置-70保存 1 个月内检测。 (2)采用 MEIA 定量测定两组血清标本的 HBV M, 具体按试剂说明书进行操作。(3)收集两组血清标本的 HBV DNA 和 HBV M 定量结果并以 HBV DNA 拷贝数进行分组: 即 A组 HBV DNA 为 105copies/L 以下; B 组为 106copies/L以此类推, G 组为 1011copies/L 以上。统计学分析: HBV DNA 以拷贝数的对数平均值
12、表示, 未检测到HBV DNA 的标本其 HBV DNA 对数值直接以 0 计算; HBsAg(S/N)、抗HBs(IU/L) 、 HBeAg(S/N)、 抗HBe(S/CO) 、 抗HBc(S/CO)均以 xs 表示; 均数之间的差异比较采用 t 检验, 两组非活动期的 HBV DNA 检出率比较采用 2 检验, 对 HBV DNA 与6HBV M 进行相关性分析 , 所有数据均使用 SPSS12.01 软件完成。2 结果对低浓度 HBsAg 组中的免疫耐受期 4 份和免疫清除期 7 份血清标本进行 HBV DNA 和 HBV M 定量测定发现: 免疫耐受期的 HBV DNA 处于 D 和
13、E 组, 而免疫清除期的 HBV DNA 处于 BD 组, 对两者各指标的均数进行比较发现 HBV DNA 对数均值(t=3.708, P=0.005)、 抗HBs (t=2.531, P=0.032)、 HBeAg(t=9.181, P=0.002)、 抗HBe(t=7.943, P=0.004)之间的差异存在统计学意义, 结果见表 1。表 1 低浓度 HBsAg 组免疫耐受期和免疫清除期HBV DNA 与 HBV M 定量结果对低浓度 HBsAg 组非活动期 136 份血清标本的 HBV DNA 和HBV M 定量测定发现: 有 94.1%(128/136)的标本 HBV DNA 处于105copies/L 以下, 且直接法 PCR 检测 HBV DNA 仅有10.3%(14/136)的检出率, 对未检测到的标本采用浓缩法 PCR 则可以将检出率提高到 10.3%(47/136); 经相关性分析, 低浓度 HBsAg组的 HBV DNA 与 HBV M 各指标之间均不存在相关性(P0.05), 结果见表 2。对高浓度 HBsAg 组各分期
