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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询脾虚证与胃窦 D 细胞的关系作者：张航向 任平 黄裕新 李源 黄熙 刘芳 【关键词】 脾虚 关键词: 脾虚;生长抑素;四君子汤;肠内分泌细胞;免疫组织化学;医学，中国传统 摘 要:目的 探讨脾虚证与生长抑素（somatostain，SS）内分泌细胞（D 细胞）数量变化的关系. 方法 用免疫组化链酶亲合素过氧化酶复合技术（SABC）对利血平脾虚大鼠模型胃粘膜和患者胃粘膜组织的 D 细胞染色;观察各组 D 细胞的形态和数量变化. 结果 和对照组相比，脾虚大鼠模型 7d 组 D 细胞数升高（43.43.1vs78.64.6，P 0.01） ，强阳性
2、细胞率下降（34.62.5）%vs（24.13.5）%，P 0.01;脾虚大鼠模型 14d组 D 细胞强阳性细胞率升高（34.62.5）%vs（46.49.0）%，P 0.05;四君子汤治疗组大鼠与正常对照组间 D 细胞数（43.43.1vs41.73.7）及强阳性细胞率无显著差异（34.62.5）%vs（33.11.7）%，P 0.05.患者脾虚组 D 细胞阳性数（70.410.1） ， （38.16.4） ， （45.48.6） ， （P 0.01）及强阳性率较胃热、肝火上炎组均增加（43.28.7）%， （17.96.6）%， （21.87.5）%（P 0.01）. 结论 脾虚证大鼠和精
3、品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询患者胃粘膜组织中 D 细胞阳性和强阳性细胞率增加，提示脾虚患者临床出现腹胀、纳差等症状可能是由于 SS 内分泌细胞功能增强所致. Keywords:spleen deficiency;somatostatin;Sijunzi decoc-tion， enteroendocrine cells; immunohis-tochemistry;medicine，Chinese Abstract:AIM To investigate the relationship between so-matostain enteroendocrine cells
4、and spleen-asthenia syndrome in rats and patients.METHODS Short-term and the long-term rat models of spleen-asthenia syndrome were treated by reserpine for seven days and fourteen days.The patients with spleen-asthenia syndrome（12） ，stomach-heat syndrome（11）and flaming-up of liver-fire syndrome（9）we
5、re selected by differential diagnosis and immunohistochemical SABC method was employed to stain the D cells of gastric antrum.The variation of appearance and quantity of endocrine cells were observed by light microscope.RESULTS In the rat model of seven days，as compared with the controls，the number
6、of D cells increased（43.43.1） ， （78.64.6） （P 0.01） ，and the 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询percentage of strongly positive D cells reduced（34.62.5）%， （24.13.5）%（P 0.01）.In the rat model of fourteen days，the percentage of strongly positive D cells in-creased（34.62.5）%， （46.49.0）%（P 0.01） ，In pa-tients wit
7、h spleen-asthenia syndrome the quantity（70.410.1） ， （38.16.4） ， （45.48.6）%and the percentage of strongly positive of D cell（43.28.7）%， （17.96.6）%， （21.87.5）%（P 0.01）increased as compared with the other groups.CONCLUSION Quantity and the percentage of strongly positive D cells of gastric antrum incre
8、ased in spleen-asthenia syndrome，and different symptoms of spleen-asthenia may be related to the increased function of D cells. 0 引言 中医认为脾主运化，脾失健运时可出现与消化系统运动功能障碍相类似的临床表现，脾虚时消化系统功能处于紊乱的病态.近年来研究发现，生长抑素（somatostain，SS） 、胆囊收缩素（CCK） 、胃动素（Mot）等胃肠激素可直接或间接调节胃肠道消化、吸收、分泌和运动等功能，其在外周和中枢浓度的增加或减少均可引起胃肠道功能失调1-4 .近
9、期有学者观察到脾虚患者及脾虚模型大鼠血浆和精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询胃窦组织间的 SS 含量均明显高于对照组5 ，因此研究脾虚证与这两种激素及其内分泌细胞的关系对探讨脾虚证的本质有重要意义6-8 .我们对实验性脾虚大鼠胃窦粘膜 SS 内分泌细胞（D 细胞）及脾虚和非脾虚患者 D 细胞的改变进行了观察. 1 材料和方法 1.1 材料 雄性 SD 大鼠 25 只，体质量（25020）g，第四军医大学实验动物中心提供.四君子汤、六味地黄汤均由本院中药房提供.将药物于清水中浸泡 30min 煮沸后，文火煎 30min，再浓缩至 3.0kg L-1 浓度.利血平（1g L-1
10、）上海医科大学红旗制药厂提供;兔抗大鼠 SS 抗体由第二军医大学神经生物教研室提供;SABC 试剂盒由博士德公司提供;DAB 由 Sigma 公司提供.动物分组及脾虚动物模型的建立:25 只大鼠，随机等分为 5 组:正常对照组，每只给予生理盐水0.2mL d-1 股四头肌注射，同时 ig 蒸馏水 2.0mL d-1 ，14d;脾虚模型组，每只给予利血平 0.3mg kg-1 d-1 股四头肌注射，并ig 蒸馏水 2.0mL d-1 ，7d;脾虚模型组，造模方法同脾虚模型组，14d;四君子汤组和六味地黄汤组，在用利血平（用法用量同上）的同时分别 ig 四君子汤和六味地黄汤，2.0mL d-1 ，
11、14d. 对临床作胃镜检查拟取胃粘膜组织进行病理分析的患者，采用辩病与辨证结合的分型原则，选择胃镜及西医诊断为慢性胃炎、浅表精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询性胃炎、胃溃疡、胆汁返流性胃炎等而中医诊断为脾虚、肝火上炎、胃热证者，各证辨证符合“中医虚证辨证参考标准” 6 及中医诊断学的诊断标准.其中辨证符合脾虚者 12（男 7，女 5）例，年龄 2769（457）岁;辨证符合肝火上炎证者 9（男 5，女 3）例，年龄 2463（438）岁;辨证符合胃热炽盛证者 11（男 7，女 4）例，年龄 3367（466）岁.各组间性别、年龄比较无显著差异性.以上各组均除外糖尿病、肾病、肝
12、病、恶性肿瘤、心血管疾病、呼衰、胰腺疾病所致的消化功能障碍患者. 1.2 方法 大鼠脾虚模型组于造模后 7d，其余各组于造模后14d，禁食不禁水 12h，次日上午 08:0009:00，戊巴比妥钠（40mg kg-1 ，ip）麻醉后，Bouin 液灌注固定.取胃组织，后固定 2h，然后入 300g L-1 蔗糖磷酸缓冲液至组织块沉底.胃窦组织于恒冷箱冰冻切片机做连续冠状冰冻切片，片厚 10m;患者 作胃镜前停用各种药物 1wk，行纤维胃镜检查时取胃窦部粘膜两块，组织经 40g L-1 甲醛固定 3h 后脱水、石蜡包埋，石蜡块用石蜡切片机做连续冠状切片，片厚 5m，组织切片分别贴于明胶载玻片（患
13、者组织切片用檬酸型抗原修复液进行抗原修复） ，按免疫组化试剂说明进行染色.SS抗血清工作稀释度为 1 1000;同时分别用正常兔血清和 PBS 取代 SS抗血清，做替代和空白对照，染色结果均为阴性.用 Olympus（BH-2）显微镜选择阳性细胞较集中的区域，由一位计数者在短期内观察每高倍视野（1 400）下染色阳性细胞数和强阳性细胞数，计算强阳精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询性细胞率（强阳性细胞除以阳性细胞） ，阳性细胞为细胞质内有蓝色反应物，胞核多为阴性，部分细胞核可被反应产物掩盖.强阳性细胞特征为胞质着染浓密，呈蓝黑色，超过胞体 3/4，核空白区变小甚至消失.每个病理
14、切片选 3 个高倍视野. 统计学处理:计算强阳性细胞百分率，对各组的阳性细胞及强阳性细胞百分率采用 x s 表示;用双侧 t 检验进行组间差异的比较. 2 结果 2.1 大鼠脾虚模型胃窦 D 细胞 免疫反应阳性的 D 细胞，胞质内有蓝色反应物，胞核为阴性，主要分布于胃窦粘膜的中、下层，偶见于上层.D 细胞形态不规则，有的细胞发出细长突起，末端呈棒状，伸向邻近细胞，有的 D 细胞顶部可达腺腔.D 细胞测定结果见 Tab1. 表 1 脾虚模型大鼠胃窦粘膜 D 细胞的变化 略 2.2 脾虚患者胃窦 D 细胞 免疫反应阳性的 D 细胞，胞质内有蓝色反应物，胞核为阴性，主要分布于胃窦粘膜的中、下层，偶见
15、于上层.D 细胞形态不规则，切面呈梭性、三角形或不规则型.D 细胞测定结果见 Tab2. 表 2 脾虚患者胃窦粘膜 D 细胞的变化 略 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询3 讨论 SS 为 14 个氨基酸组成的环肽，有多种分子形式，主要为 SS14 和 SS28 .在体内分布十分广泛，除胃肠道外，还存在于下丘脑和外周神经9-11 .在消化系统中 SS 主要分布与胃及肠壁神经丛的 D细胞中，并由 D 细胞分泌.分泌生长抑素的 D 细胞广泛分布于胃肠道，以胃窦部为多，在肠内愈向下愈少.D 细胞的分泌活动具有明显的旁分泌性质，即所释放的 SS 可调节周围细胞的机能活动.人类胃肠中S
16、S90%以上存在于粘膜中，SS 的全身含量胃肠道占 70%、脑占25%，SS 对消化系统的生物学作用主要是抑制，抑制胃酸分泌、消化道吸收及胃肠运动等功能，还能抑制其他胃肠激素的释放12 . 上一页 1 2 下一页大鼠脾虚早期 D 细胞数较正常对照组显著增加，强阳性细胞数下降，说明细胞分泌活动下降.由于细胞分泌下降，较多细胞内存留SS，表现为免疫反应阳性细胞增多，但强阳性细胞率下降.脾虚晚期，D 细胞数无明显变化，强阳性细胞率显著增加，说明在脾虚后期 D细胞激素合成功能加强.同时我们亦观察到临床用于治疗脾虚证的四君子汤可以调正上述 D 细胞数量和功能的改变，六味地黄对脾虚证动物模型 D 细胞的改变无明显影响.脾虚组患者 D 细胞阳性数及强阳性率较胃热、肝火上炎组均增加，提示脾虚时患者胃粘膜 D 细胞合精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询成、分泌 SS 的功能加强.这与利
