《心肌肌钙蛋白I异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究-2016年最新医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《心肌肌钙蛋白I异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究-2016年最新医学论文（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询心肌肌钙蛋白 I 异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究作者：赵桂琴，吴国球，刘乃丰 【摘要】 目的:检测心肌肌钙蛋白 I（cTn I）异常病人血清中结缔组织生长因子（CTGF）水平的变化，探讨 CTGF 在心肌损伤病人血清中表达的意义。方法:化学发光法检测血清中 cTn I 水平，并根据cTn I 水平分组；利用生物素亲和素 EIA 分析法检测各组病人血清中 CTGF 水平。结果:80 例病人血清标本按 cTn I 水平分为、 3 组，CTGF 平均水平依次为（13.04685 ） 、（21.678.35）及（35.0624.12）ngml
2、1。其中，、组血清 CTGF 水平明显高于正常对照组（均 P 0.05） ，组与正常对照组比较差异不显著（P 0.05） ，、组与组比较差异显著（均 P 0.05） ，组与组比较差异显著（P 0.05） 。结论:CTGF 在心肌损伤以及心肌梗死后表达上调，可能与心肌纤维化关系密切。 【关键词】 心肌肌钙蛋白 I；结缔组织生长因子；心肌损伤；心肌梗死；心肌纤维化精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）是近来发现的一种重要的细胞因子，主要由内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞等合成分泌，成年哺乳动物
3、心、脑、肾、肺、肝以及胎盘中均有表达，它与动脉粥样硬化，心、肝、肺、肾等器官的纤维化以及创伤修复密切相关15 。人心肌肌钙蛋白（cardiac troponin，cTn）包括 C、T、I 3 个亚单位，其中 I 亚单位（cTn I）在心肌损伤后 46h 释放入血，1436h 达到峰值，是一个十分敏感的特异性心肌损伤标志物，在诊断急性心肌梗死（简称心梗） 、判断梗死面积、评价容栓效果等方面具有重要意义。本研究调查不同 cTn I 水平病人血清中 CTGF 水平的变化，探索其在心梗后心肌纤维化中的意义。1 材料与方法1.1 实验材料 CTGF 单克隆抗体、多克隆抗体及 CTGF 标准品（作者所在实
4、验室制备） ，水溶性生物素(SulfoNHSLCBiotin) 、亲和素(Avidin)和 BiotinHRP(Pierce 公司，美国)，化学发光 cTn I 检测试剂盒(Beckman 公司,美国)，高吸附 96 孔板(Biomat，上海晶美公司),全自动洗板机(BioRad 公司，美国)，全自动酶联仪(ALISEI，意大利)，全自动化学发光仪(Access，美国)。80 例病人精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询血清标本来自东南大学附属中大医院临床检验中心，10 例正常人血清标本来自东南大学附属中大医院体检中心。1.2 实验方法1.2.1 cTn I 的检测及分组所有血清
5、标本采用双盲方式根据 cTn I 检测试剂盒、全自动化学发光仪操作说明及规程检测 cTn I 水平。并根据试剂盒诊断标准和 ACC/AHA 对于心梗的诊断标准，将病人分成排除心肌损伤组（组） 、心肌损伤组(未发生心梗，组）及心梗组（组）3 组。10 例正常人血清标本设为正常对照组。1.2.2 CTGF 的检测1.2.2.1 包被 CTGF 单抗用 0.05molL1 NaHCO3 缓冲液（pH 9.6）配制成 2gml1，以 100l孔1 包被 96 孔板酶标板，4过夜。用含 0.5%Tween80 0.1molL1 的 PBS(pH 7.4)洗涤3 次后加入 150l 含 2%酪蛋白的 0.
6、1molL1 PBS(pH 7.4),37孵育 2h，洗涤 5 次后 4密封保存。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.2.2.2 生物素标记 CTGF 多克隆抗体 取 10mg CTGF 多克隆抗体，用 1ml0.1molL1 PBS(pH 7.4)溶解，加入 16l(28mgml1)水溶性生物素，混匀，室温放置 30min 后，将混合物转入透析袋，置于 1 L 含 0.01molL1PBS(pH 7.4)的透析液中，4过夜，除去未反应的生物素。1.2.2.3 ABC 复合物的制备 取 5ml0.1molL1 的 PBS(pH 7.4)，加入 45l Avidin 和 45
7、l BiotinHRP ，混匀，室温反应30min。1.2.2.4 检测 取 50l 待测样品及系列稀释的 CTGF 标准品（01 000ngml1）样品加入已包被 CTGF 单抗的酶标板中，37 1h，洗板 6 次后加入 1300 稀释的 BiotinCTGF 多抗，37孵育1h，洗板 6 次后各孔加入 50l ABC 酶复合物，室温 30min 后加入显色液 A 和 B 各 50l，室温 20min，加入 50l 2molL1 H2SO4 终止反应，在全自动酶标仪上测定 A450 值。根据标准曲线计算标本中 CTGF 的浓度。1.3 统计学处理结果用 x-s 表示，采用单变量 SNK 法
8、q 检验，P 0.05 视为有统计学意义。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2 结果80 例病人血清标本 CTGF 平均水平为（25.7919.71）ngml1,组(n=15)、组(n=28)、组(n=37)和正常对照组(n=10)血清 CTGF 平均水平依次为（13.046.85） 、 （21.678.35） 、（35.062412 ）及（14.807.13）ngml1，、组明显高于正常对照组（均 P 0.05） ，组与正常对照组比较差异不显著（P 0.05） 。、组与组比较差异显著（均 P 0.05） ，组与组比较差异显著（P 0.05） ，见图 1。、组与正常对照组比较
9、，均 P 0.05；组与正常对照组比较，P 0.05；、组与组比较，均 P 0.05；组与组比较，P 0.05图 1 各组 cTn I 和 CTGF 水平（略）精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Fig 1 The levels of cTn I and CTGF in all groups CTGF levels of group and group significantly increased as compared with control group and group (all P 005).Grouphad no significance as compared
10、with control group(P 0.05).There was a statistical significance between group and group (P 005)上一页 1 2 下一页3 讨论CTGF 是高度保守的 CCN 多肽家族成员之一，该家族包括CTGF、CYR61、Nov 以及最新发现的WISP1/elm1、WISP2/rCop1、WISP3（WISP，Wntinducible secreted protein） ，由 349 个氨基酸组成，富含半胱氨酸，相对分子质量 36 00038 000，包含 4 个主要的蛋白结构区：胰岛素样生长因子结合蛋白区、von
11、 Willebrand 因子 C 型重复区、血小板反应蛋白（thrombospOndin ）1 型重复区以及生长因子半胱氨酸群，这些区域都由独立的外显子编码1。CTGF 可诱导成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质，参与调节细胞增生分化、胚胎发育以及伤口愈合68 。CTGF 是促进心肌纤维化的重要细胞因子。CTGF 的 N 端调节肌成纤维细胞分化和胶原合成，C 端调节成纤维细胞增殖9。本精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询实验心肌损伤组 CTGF 平均水平明显高于排除心肌损伤组和正常对照组，这与 Chen 等10在有心肌缺血病人心脏标本中检测到的 CTGF表达增加一致。心肌损伤作为一种
12、炎症反应，能释放包括 CTGF 在内的多种炎症细胞因子，而 TGF 、PDGF、FGF、VEGF 等细胞因子能刺激 CTGF 表达上调11；同时 CTGF 参与组织的损伤修复过程，所以在心肌损伤后表达也会增加。心衰致心肌受损，功能下降，又加重心衰，形成恶性循环，肾上腺素、内皮素大量释放可以引起 CTGF持续表达增加，同时氧化应激、机械刺激状态的持续存在也能刺激CTGF 表达升高。Ahmed 等12实验显示实验诱导的心衰猪 3 周后心肌 CTGF mRNA 水平增加 5 倍。急性肺栓塞引起心肌损伤造成心肌缺血缺氧，可诱导心脏成纤维细胞 CTGF 表达增加，预示着 CTGF 与心肌损伤后的心肌纤维
13、化关系密切。急性心梗是心肌损伤的严重阶段，心梗后坏死的心肌纤维被溶解吸收，纤维肉芽组织形成，梗死区胶原纤维组织增加，同时伴纤维化反应，最终形成纤维疤痕组织。而间质成纤维细胞是正常心肌胶原合成的主要来源，肌成纤维细胞是心梗后心室重构的重要原因。CTGF 可以促进心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，离体实验中，CTGF 能刺激成纤维细胞增殖。而 CTGF能诱导心脏成纤维细胞分泌表达胶原和纤黏蛋白13，并能增加心梗部位胶原和纤黏蛋白的表达量10,14。 本实验心梗组的 CTGF 平均水平明显高于其他组，提示心梗后的心肌纤维化可能与 CTGF 的表达密切相关。心梗后 RAS 系统兴奋，Ang可以刺激 C
14、TGF 的表达，大鼠心脏成纤维细胞用 Ang刺激后能经 AT1R 途径引起 CTGF 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询mRNA 和蛋白质表达增加，此作用可以被 AT1R 拮抗剂 losartan 抑制15，醛固酮也可以通过 MAPK 通路和盐皮质激素受体刺激 CTGF的表达16。Ohnishi 等14在心梗大鼠的实验研究中发现 CTGF 在梗死区肉芽组织中的成纤维细胞中高表达，而在其他大鼠的心梗实验中发现左右心室的非缺血区都有 CTGF 的表达，在心梗后 2 d 心肌CTGF mRNA 水平增加，一直持续到心梗后 42 d，这些实验说明 CTGF mRNA 的诱导高表达从心
15、梗后持续到心梗后较晚的重构阶段。Dean 等17实验显示在心肌梗死后 180 d CTGF mRNA 和蛋白仍有大量表达，提示了 CTGF 与心梗后心肌纤维化密切相关心肌损伤后，无论有无发生心梗，都伴有神经内分泌系统的激活，Kemp 等18研究显示用100molL1 去氧肾上腺素作用新生兔的心肌 1h 或 24h，CTGF mRNA 最多增加了 2.5 倍，作用 424h，CTGF 蛋白质最多增加了 5 倍，在培养的血管平滑肌细胞 ET1 通过 ETA 受体上调 CTGF mRNA 和蛋白质的表达19，因此神经内分泌因素都会增加心肌损伤后 CTGF 的表达。心肌纤维化是心室重构的重要组成部分20，心肌损伤后的心室重构、左心室扩张、心脏功能下降和死亡率的增加相关。本实验心肌损伤组和心梗组 CTGF 水平明显升高，提示 CTGF 的表达与心肌损伤后的心肌纤维化相关，心梗组的 CTGF 平均水平明显高于心肌损伤组，且两组有统计学差异，提示 CTGF 与心梗后心肌纤维化的关系更为密切。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询【参考文献】1LAU L F，LAM S C.The CCN family of angiogenic regulators: the integrin connectionJ.Exp Cell Res，2000,248:4457.2BO
