《心肌梗死后骨髓间充质干细胞治疗改进心功能及心肺复苏结果的研究-2016年最新医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《心肌梗死后骨髓间充质干细胞治疗改进心功能及心肺复苏结果的研究-2016年最新医学论文（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询心肌梗死后骨髓间充质干细胞治疗改进心功能及心肺复苏结果的研究【摘要】 【目的】 探索大鼠心肌梗死并经骨髓间充质干细胞（MSC）治疗后，心功能的变化及对其后进行的心肺复苏结果的影响。【方法】 18 只雄性 Sprague-Dawley 大鼠，随机分为两组， MSC 注射组和磷酸缓冲液（PBS）注射组，每组 9 只大鼠。先开胸结扎左前降支冠状动脉，4 周后再次开胸接受 PKH26 荧光标记的悬浮在 PBS中的 5106 MSC 或仅用 PBS 梗死部位注射治疗，注射后 2 周及 4 周用超声心动图测量射血分数，4 周时诱导心室颤动及进行心肺复苏，
2、测量心肺复苏前及心肺复苏后 4 h 内的血液动力学参数的变化。并在心肺复苏 72 h 后取心肌组织进行病理切片检查。 【结果】 与注射磷酸缓冲液相比，注射 MSC 2 周（67%4% vs 56%5%，P 0.001）及 4 周后（67%6% vs 5313%， P 0.01）射血分数明显提高，心肺复苏前后的血液动力学参数包括心脏指数、dp/dt40、-dp/dt、左心室舒张末期压明显改善；虽然 2 组的复苏成功率没有明显区别，但 72 h 生存率 2 组比较有明显差异（58.620.6 vs 26.121.6，P 0.05） 。心肌组织病理切片发现有大量的 PKH26 标记的细胞存在。 【结
3、论】 心肌梗死后 MSC 治疗能明显改善心功能，同时也能明显改善心肺复苏前后的血流动力学参数及 72 h 生存时间。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询【关键词】 骨髓间充质干细胞； 心室颤动； 心跳骤停； 心肺复苏； 心肌梗死； 射血分数； 心功能Abstract: 【Objective】 To investigate myocardial function and outcome of cardiopulmonary resuscitation (CPR) in a rat model of myocardial infarction treated with bone m
4、arrow mesenchymal stem cells. 【Methods】 A thoracotomy was performed in 18 rats. Myocardial ischemia was induced by ligation of the left anterior descending artery (LAD). 4 weeks later, animals were randomized to receive 5106 MSCs marked with PKH26 in phosphate buffer solution (PBS) or PBS alone as a
5、 placebo. Four weeks after MSCs or PBS injection, ventricular fibrillation (VF) and CPR were performed. Ejection fraction (EF) was quantitated two and four weeks after administrating MSCs or PBS. Hemodynamics, including cardiac index （CI）, dp/dt40, dp/dt, and LVDP were measured before inducing VF an
6、d hourly following return of spontaneous circulation (ROSC). MSCs were counted in 5 ?滋m sections obtained from each harvested heart with cryostat. 【Results】 Significant improvements in EF, CI，dp/dt40，-dp/dt，LVDP followed injection of MSCs prior to inducing VF. 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Following ROS
7、C, myocardial function and hemodynamic were significantly greater in animals treated with MSCs. Duration of survival were significantly longer in MSCs-treated animals compared PBS-treated animals. 【Conclusion】 Myocardial function before and after CPR and survival time after CPR were significantly im
8、proved in animals treated with MSCs compared to those which received PBS.Key Words: bone marrow mesenchymal stem cells; ventricular fibrillation; cardiac arrest; cardiopulmonary resuscitation; myocardial infarction; ejection fraction; myocardial function近几年来，细胞治疗学的发展非常迅猛，利用细胞移植的方法来增加有功能的心肌细胞的数量，从而改善
9、心功能已成为心血管疾病治疗的新途径 1，2。以前的心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）研究使用的均是健康的动物，且研究的重点放在复苏后药物的选择及各种器械如何改进复苏后血流动力学3，4。但临床实际情况是在 CPR 发生之前病人大多有严重的心脏疾病5，精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询因而本课题研究力图尽量接近临床实际，首先结扎左冠状动脉前降支（left anterior desending artery，LAD） ，造成较严重的心肌缺血及缺血后心功能不全，4 周后注射骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal s
10、tem cells，MSCS）或磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PBS） ，治疗的干预措施提到了 CPR之前，治疗 4 周后再诱发心室颤动（ventricular fibrillation，VF）及进行 CPR，观察心肌梗死后 MSCS 治疗对大鼠心功能及 CPR 前后血流动力学的影响，从而为 MSCS 治疗心肌缺血及改善 CPR 的结果提供实验依据。本研究不仅探讨 MSCS 改善心肌梗死后心功能不全，而且是首次探讨心肌梗死后 MSCS 治疗对其后发生的心跳骤停和心肺复苏的血流动力学及生存时间的影响。1 材料与方法1.1 实验动物和细胞成年 Sprague-da
11、wley 雄性大鼠，68 个月大小，体质量450550 g。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询P3 代经 PKH26（美国 Sigma Aldrich 公司）染色的 MSC。1.2 主要仪器及材料红外线 CO2 监测仪（型号 IL200，美国 Instrumentation Laboratory 公司） ，小动物呼吸机（型号 3500H，美国 Sechrist 公司） ，惠普超声心动图机（型号 2406A，美国 Hewlett-Packrad 公司），除颤仪（型号 Smart，美国 Philips 公司） ，监护仪（型号 7010，美国 Tram 公司） ，CODAS 数据采
12、集系统（美国 DataQ 公司） ，高敏压力转换器（型号 42584-01，美国 Abbott Critical Care Systems公司） 。PE-50 的塑料导管 (Intramedic PE-50, 美国 Becton-Dickinson 公司)，4-F 塑料导管 (model C-PMS-401J, 美国 Cook Critical Care 公司)。13 实验方法131 大鼠骨髓 MSC 的分离、培养、传代、鉴定、染色 取 1精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询月龄 Sprague-Dawley 大鼠，在无菌条件下小心取出双侧股骨和胫骨，加入 10 mL DMEM
13、 完全培养液，无菌注射器反复冲洗骨髓腔，将冲洗后制成的细胞悬液，600g 离心 5 min，重新加入 L-DMEM 完全培养液 10 mL 悬浮细胞后，移入 25 cm2 塑料培养瓶中，二氧化碳培养箱中 37 恒温原代培养（P0） 。以后每 3 d 更换一次完全培养液。当细胞附壁生长至整个底层瓶壁的 90%以上时，用 0.25%胰蛋白酶消化后按 1 2 比例传代（为 P1 代） 。倒置显微镜逐日观察，重复上述操作，并记为 P2、P3 代。P3 的细胞将用于所有的动物实验。取生长良好的 P3 代细胞，加入胰蛋白酶消化，用 PBS 洗涤 3 次，加入荧光标记抗体，4 孵育 30 min，PBS 洗
14、去未标记抗体，1%多聚甲醛固定 15 min，应用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记CD11b/c，CD29，CD44H，CD45，CD90.1。取生长良好且已长满瓶底的 P3 代细胞（细胞总量为 1107 个） ，加入胰蛋白酶消化，600g 离心 5 min 后，用 PBS 洗涤一次，再600g 离心 10 min，用移液枪将 PBS 吸除干净（剩余量 25 mL） ，加入 PKH26 细胞专用液体 0.5 mL，制成细胞悬液，迅速加入预先已准备好的已加入 1L 荧光物质的 PKH26 细胞专用液体 0.5 mL 中，混合孵育 4 min，加入 1%小牛血清蛋白 1 mL，终止染色 1 min，
15、再精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询加入完全培养液 2 mL，600g 离心 10min，去除上清，加入完全培养液 10 mL 悬浮细胞，更换新的离心管，洗涤细胞共 3 次，显微镜下观察染色效果。132 大鼠心肌缺血模型的制备 18 只 Sprague-Dawley 大鼠随机分为实验组和对照组，每组 9 只动物。在手术的前晚禁食，但可自由进水。手术当天按 45 mg/kg 给予腹腔内注射喷妥巴比妥麻醉。将手术及电击部位的毛剃干净。用 14 g 的穿刺针套管作为气管导管插入，用线固定于嘴部皮肤，防止脱出。置一呼气末 CO2 探测导管于气管导管和呼吸机导管之间，用红外线 CO2
16、分析仪监测呼气末CO2 分压（PETCO2） 。调整呼吸机至工作状态，潮气量为 6.5 mL/kg ，呼吸频率为 100 次/分，FiO2=0.21。 使用非侵入性经胸壁超声心动图测量基础心功能后开始机械通气。从左侧第 4 肋间打开胸腔，暴露心脏。用镊子撕开心包膜，清楚暴露左前降支冠状动脉。用带5/0 细尼龙丝线的小圆针缝扎左前降支冠状动脉（left anterior descending coronary artery，LAD） 。 关胸前放入一细塑料软管，便于关胸后引流和吸取气体和渗出的血液。 LAD 缝扎成功的标记是肢体心电图 ST 段明显抬高，QRS 波宽大畸形。关胸后继续机械通气并严密观察 EKG 和 CO2 波形 1 h，如有 VF 发生，立即使用 2 焦的电能量电击除颤，直到心电图转复为窦性心率为止。1 h 后停止机械通气，拔除引流管，按 160 mg/kg 肌肉内注射抗菌素头孢唑啉及止精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我
