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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询微波辅助提取土茯苓多糖【摘要】 目的筛选土茯苓多糖提取的最优化工艺。方法应用微波辅助提取技术，通过单因素和正交实验，以土茯苓多糖提取率为指标，筛选土茯苓多糖的最佳提取工艺条件。结果土茯苓多糖最佳提取工艺条件为：微波功率 800W，固液比（g/ml）130,提取温度 100，回流浸提两次，10 min/次，浓缩液加 90乙醇醇析。结论优化后的工艺稳定，微波辅助提取土茯苓多糖，提取时间短、提取率高，另有较大部分土茯苓总黄酮也同时被浸出。按照优化后工艺条件实验，土茯苓多糖提取率、粗多糖得率以及粗多糖中多糖含量分别为8.33，3.97和 39.5。
2、【关键词】 微波辅助提取 土茯苓 多糖 总黄酮Abstract:ObjectiveTo optimize the process of extracting polysaccharides from Smilax glabra Roxb. MethodsWith the extraction rate of polysaccharides as an examinable target, the optimal extraction conditions of polysaccharides has been proposed by microwave-assisted method thro
3、ugh single factor experiment and orthogonal test method. ResultsThe optimal technological parameters of extracting 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询polysaccharides were as follows: the microwave power, the solid-liquid ratio, the extract temperature and extract time were 800 W, 130（g/ml）, 100 and 10min twi
4、ce, respectively. Lastly, the crude polysaccharides were obtained by adding ethyl alcohol into the treated leachate after laying a period.ConclusionThe proposed method is stable and reliable for the extraction of polysaccharides from Smilax glabra Roxb., which has the advantages of short extraction
5、time, high extraction rate and obtaining general flavonoids simultaneously with polysaccharides. Under the optimized operation conditions, the extraction ratio, extraction yield of crude polysaccharides and the content of polysaccharides in the crude polysaccharides were 8.33%, 3.97% and 39.5%, resp
6、ectively.Key words:Microwave-assisted extraction； Smilax glabra Roxb.； Polysaccharides； General flavonoids土茯苓为百合植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb.的干燥根，又名红土苓，其味甘、淡、平，归肝、胃经，具有除湿，解毒，通利精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询关节作用，用于湿热淋浊、带下病、痈肿、瘰疬、疥癣、梅毒及汞中毒所致肢体拘挛,筋骨疼痛，为常用中药材1 。土茯苓主要化学成分为黄酮、皂苷等，实验中发现较多的多糖类成分也存在于土茯苓中。鉴于多糖具有增强机体
7、免疫力及抗癌等多方面生理活性，本实验对土茯苓中多糖的提取工艺进行了研究。微波辅助提取技术是近年来发展起来的一种新方法，具有选择性好、快速、高效、安全、节能等优点。本文首次报道了微波辅助提取技术在土茯苓多糖提取中的应用，通过单因素和正交实验，采用水提醇沉法研究土茯苓多糖的优化提取工艺，以期对土茯苓药材的应用提供基本资料。1 材料与方法1.1 原料及试剂土茯苓饮片购于三九中药房，经湖北中药研究院王克勤研究员鉴定为百合植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb.；葡萄糖、芦丁精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询（Rutin）购于中国药品生物制品检定所；其他试剂均为国产分析纯。
8、1.2 仪器 XH-100A 型祥鹄电脑微波催化合成萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司） ；UV-7504 紫外可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司） ；电子分析天平（梅特勒-托利多（上海）仪器有限公司） ；TDL-5-A 台式离心机（上海安亭科学仪器厂） ；旋转蒸发仪 RE-52AA（上海亚荣生化仪器厂） ；SHZ-D()循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂） 。1.3 原理微波加热是利用微波场中介质的偶极子转向极化和界面极化的时间与微波频率相吻合的特点，促使介质转动能级跃迁，加剧热运动，将电能转化为热能。从细胞破碎的微观角度看，微波加热导致细胞内的极性物质，尤其是水分子吸收微波能，产生大量的
9、热量，使胞内温度迅速上升，水气化产生压力使细胞膜（壁）破裂，产生微孔或裂纹，从而使细胞内物质更容易被溶剂溶出，达到萃取目的2，3 。1.4 分析方法采用苯酚-硫酸法4测定土茯苓多糖的含量；总精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询黄酮含量测定方法参照文献5 。1.4.1 对照品溶液的配制精密称取 105干燥至恒重的葡萄糖标准品 0.514 g，置于小烧杯中，加去离子水溶解，移入 500 ml 容量瓶中，以去离子水定容至刻度，摇匀，配成 1.003 mg/ml 的标准溶液。然后精密吸取葡萄糖标准溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml 分别置于 50 ml 容
10、量瓶中，加去离子水定容，摇匀，得系列对照品溶液。1.4.2 苯酚试剂的配制苯酚储备液的制备：取苯酚 200 g，加锌粉 0.2 g 和碳酸氢钠 0.1 g，蒸馏收集 182馏分，称取此馏分60.0 g，加 40.0 g 水使其溶解，为 60.0苯酚储备液，置冰箱中避光储存备用。1.4.3 标准曲线的绘制准确吸取上述系列对照品溶液各 2.0 ml，分别于具塞试管中，各加入 6.0苯酚试剂 1.0 ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸 5 ml，待试管冷却后，沸水浴中煮 15 min，取出冷却至室温，于波长 490 nm 处测定其吸光度。同时精密吸取去离子水2.0 ml，同法操作，作空白对照。以葡萄糖浓度（
11、C）对吸光度（A）作回归处理，得回归方程：C=0.006 57+0.069 69A(r=0.998 9)，葡萄糖在 20.06140.40 g/ml 之间线性关系良好。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.5 方法1.5.1 土茯苓多糖的提取与精制6称取干燥至恒重的土茯苓饮片 100 g，先经石油醚(6090)回流脱脂提取，抽滤。药渣经真空干燥后再用 80%乙醇回流提取，除去单糖和低聚糖，抽滤。药渣经真空干燥后，加蒸馏水回流，提取多次。合并水提取液，减压浓缩，用 Sevage 法（氯仿-正丁醇多次萃取）除去浓缩液中蛋白。离心，水层加适量活性炭 60保温脱色，离心，上清液加入一
12、定量乙醇，于冰箱静置过夜，抽滤，滤渣先后用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，经真空干燥，得土茯苓多糖。将土茯苓多糖溶于适量的水，经过二次醇沉操作后可得精制土茯苓多糖。1.5.2 换算因子的测定7精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询精密称取干燥至恒重的精制土茯苓多糖 3 mg，置于 10 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得精制多糖样品溶液，浓度为 300 gml。分别取 0.4，0.6，0.8，1.0 ml 和 1.2 ml，补水至 2.0 ml，按“1.4”项所述方法测定吸光度，由回归方程计算出供试液中葡萄糖含量，按下式计算换算因子。测得换算因子 f=1.85。换算因子 f =m
13、/cD式中，m 为称取多糖的质量(g)，c 为多糖液中葡萄糖的含量(gml)，D 为多糖的稀释倍数。1.5.3 供试品的制备与测定精密吸取样品提取液，稀释定容后，按照“1.4.3”项标准曲线的绘制方法和文献5下操作，测定吸光度 A 值，按（a）式计算多糖和总黄酮提取率。精密称取沉淀出的土茯苓多糖，加适量蒸馏水超声使溶解，定容，按照“1.4.3”项标准曲线的绘制方法下操作测定吸光度 A 值，按（b）式计算多糖含量。乙醇沉淀出来多糖得率按（c）式计算。上一页 1 2 下一页精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询（a）多糖（总黄酮）提取率c1V/m100%（b）多糖含量c2Df /w1
14、00%（c）粗多糖得率m1 /m100%式中 c1 为提取液中葡萄糖(芦丁)质量浓度，c2 为多糖溶液中葡萄糖质量浓度，V 为多糖（总黄酮）提取液体积，D 为多糖溶液的稀释倍数，f 为测得的换算因子，m1 为沉淀出来土茯苓多糖质量，m为干燥土茯苓样品质量，w 为土茯苓多糖样品质量。2 方法与结果2.1 微波辅助提取土茯苓多糖的单因素实验2.1.1 提取时间对土茯苓多糖提取率的影响称取经过预处理（分精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询别用石油醚、80乙醇各提取两次，第 1 次 20 倍体积 2 h，第 2 次10 倍体积 1 h，下同）的干燥土茯苓饮片 5 g（干燥饮片浸泡 20
15、 min 后，微波提取两次，下同） ，固定固液比（g/ml，下同）为130，微波功率为 800W，微波提取温度为 100，考查微波提取时间对土茯苓多糖和总黄酮提取率的影响，设计时间分别为4，6，8，10，12 min 和 14 min。结果见图 1。从图 1 可看出，提取时间在 414 min 内，多糖和总黄酮提取率变化趋势基本相同。随时间增加，土茯苓多糖和总黄酮提取率先增加，10 min 后含量略有减小。这可能是由于提取时间增加，微波辐射时间也相应增加，对细胞膜（壁）的破碎作用就比较大，溶出物多，多糖和总黄酮提取量也就高。时间增加到一定程度后，多糖和总黄酮浸出量增加较少，但样品中黏液质等杂质
16、进入浸出液，使得浸出液黏度增大，从而扩散速度变慢，过滤也变得困难，这样，就会造成较多的多糖和总黄酮含于滤渣中而被损失，减少了提取液中多糖和总黄酮含量。因此，提取时间宜选取在 10 min 左右。2.1.2 微波提取温度对土茯苓多糖提取率的影响称取经过预处理的干燥土茯苓饮片 5 g，固定固液比为 130，微波功率为 800 W，提取时间为 10 min，考查微波提取温度对土茯苓多糖和总黄酮提取精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询率的影响，设计温度分别为 60，70，80，90，100和 110。结果见图 2。由图 2 可以看出，温度在 60110范围内，多糖和总黄酮提取率变化趋势基本相同，但总黄酮提取率变化相对范围大于多糖。在60100范围内，土茯苓多糖和总黄酮提取率随温度上升而明显提高，这一方面是因为在微波功率一定的前提下，提取的温度越高，要达到提取温度所需的微波辐射时间就
