《恶性肿瘤血瘀证型血栓前状态分子标志物测定及其意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《恶性肿瘤血瘀证型血栓前状态分子标志物测定及其意义（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1恶性肿瘤血瘀证型血栓前状态分子标志物测定及其意义作者：金伟,哈木拉提 吾甫尔,沙吉旦阿不都热衣木 ,热娜古丽艾则孜, 张洪亮【摘要 】 目的 探讨恶性肿瘤血瘀证患者血栓前状态变化和意义。方法 选择恶性肿瘤患者 69 例,其中血瘀证组 56 例,非血瘀证组 13例, 另选 33 例健康人作为正常对照组。分别采用流式细胞仪、ELISA法、CLAUSS 法等检测血小板膜表面糖蛋白 CD41 和 CD62P、组织型纤溶酶原激活物(t-PA) 、组织型纤溶酶原激活物抑制物 -1(PAI-1)以及凝血 4 项指标血浆凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间 (
2、APTT)。结果 与正常对照组比较, 血瘀证组和非血瘀证组 CD41 表达、TT 差异均无统计学意义(P 0.05),CD62P 表达、PAI-1 含量、Fib 含量均升高(P0.01),PT、APTT 时间缩短(P0.01) ；血瘀证组 t-PA 含量下降(P0.05),与非血瘀证组比较,t-PA 含量差异无统计学意义 (P0.05) ；与非血瘀证组比较,血瘀证组 CD62P 表达、Fib 含量也有所升高(P0.05)。结论 恶性肿瘤血瘀证和非血瘀证组均存在不同程度的血栓前状态,CD62P、t-PA、PAI-1、PT 、Fib、APTT 等的改变可能是其血栓前状态的部分物质基础。 2【关键词
3、】 恶性肿瘤；血瘀证型；血栓前状态；分子标志物Abstract：Objective To explore the changes and significance of prethrombotic state on blood-stasis syndrome of cancer patients. Methods Sixty-nine cancer patients were divided into blood-stasis syndrome group (56 cases) and non-blood-stasis syndrome group (13 cases), with 33 he
4、althy people as control group. The expression of CD41, CD62P on platelets, the level of plasma tissue plasminogen activator (t-PA), plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinogen (Fib), prothrombin time (PT) and thrombin time (TT) of the three gro
5、ups were tested by using flow cytometer, ELASA method and auto coagulometer. Results Compared with control group, there was no significant difference on the expression of platelet CD41 and TT in blood-stasis syndrome group and non-blood-stasis syndrome group (P0.05), however the expression of platel
6、et CD62P was higher (P0.01), the level of plasma PAI-1 and Fib were higher (P0.01), PT and APTT was shortened (P0.01) in blood-stasis syndrome group. The level of plasma t-PA was lower (P0.05) in blood-stasis syndrome group, and there was no significant difference in 3non-blood-stasis syndrome group
7、 (P0.05). Compared with non-blood- stasis syndrome group, the expression of platelet CD62P and the level of plasma Fib were higher (P0.05) in blood-stasis syndrome group. Conclusion There is a different degree of prothrombotic state in blood- stasis syndrome and non-blood-stasis syndrome of cancer p
8、atients. The changes of the expression of platelet CD62P, the level of plasma t-PA, PAI-1, PT, Fib and APTT may be the part of fundation in prethrombotic state of cancer patients.Key words：cancer；blood-stasis syndrome；prethrombotic state；molecular marker现代研究已经明确,恶性肿瘤发病机制及病理与其他疾病有着本质的不同,研究发现血栓前状态(pre
9、thrombotic state, PTS)在恶性肿瘤中较为常见1-2,并且与止凝血功能改变有着密切的相互联系。PTS 既往称血液高凝状态(hypercoagulable state,HCS),是多种因素引起的止血、凝血和抗凝系统失调的一种病理过程,具有易导致血栓形成的多种血液学变化。大量的基础和临床研究工作表明,血栓形成是在血管内皮细胞、血小板、凝血、抗凝、纤溶系统以及血液流变学等多种因素改变的综合作用下发生的,这些因素在血栓形成之前已发生不同程度的变化3。而中医研究认为,血瘀证与恶性肿瘤存在4密切关系4,在肿瘤的发生、增殖和转移等病理过程中,均有不同的表现。肿瘤病血瘀证患者更容易发生明显的
10、止凝血功能紊乱、纤溶亢进及血小板活化,并且常处于血栓前状态,还可引起弥漫性血管内凝血(DIC)、栓塞等严重并发症,如不早期诊断和治疗,往往会因出血而失去治疗时机,甚至造成死亡5-6。因此,早期发现血栓前状态、防止 DIC 发生、降低出血发生率是提高恶性肿瘤患者生存率的重要相关因素7。本研究试图通过对一些反映血栓前状态指标进行观察,阐明肿瘤血瘀证与血栓前状态的关系,为进一步研究恶性肿瘤血瘀证提供客观依据。1 资料与方法1.1 诊断标准恶性肿瘤诊断标准按照临床诊疗指南肿瘤分册诊断8,并经影像学、B 超、CT 、胃镜及病理活检或细胞学确诊。中医血瘀证诊断标准依照第二届全国活血化瘀研究学术会议修订的“
11、血瘀证诊断标准”有关内容9,具体如下：舌紫黯或有瘀斑瘀点；典型涩脉或无脉；痛有定处(或久痛、椎刺性疼痛或不喜按)；瘀血腹证；癥积；离经之血(出血或外伤瘀血) ；皮肤黏膜瘀斑、脉络异常；痛经,伴色黑有血块或闭经；肌肤甲错；5偏瘫麻木；瘀血狂躁；理化检查血液、循环瘀滞表现。气虚血瘀证、气滞血瘀证、痰凝血瘀证、阴虚血瘀证的辨证则依据中医诊断学(高等医药院校教材, 第六版)中的有关内容进行, 不属于上述血瘀证型者归属非血瘀证组。1.2 纳入标准所有入选病例的西医诊断应符合规定的疾病诊断标准；入选病例的中医证候诊断应符合规定的证候诊断标准。正常对照组选择与病例组性别、年龄等相匹配的无心、肺、肝、肾及血液
12、等系统疾病的健康人,年龄大于 18 岁 ,性别、民族不限。1.3 排除标准检测前 2 周内服用过阿司匹林、华法林、皮质醇激素、儿茶酚胺、噻氯匹定、波立维、肝素等,以及其他可影响凝血和纤溶的药物者；服用过活血化瘀类的中药者；有血液系统疾病及精神病患者；单纯急性疾病患者、外伤患者；妊娠、哺乳期妇女；资料不全等影响判断者。1.4 临床资料61.4.1 恶性肿瘤组 均为 2006 年 26 月在新疆医科大学附属中医医院住院的恶性肿瘤患者,共 69 例,均为术后患者；转移 23 例, 未转移 46 例；其中男性 40 例,女性 29 例；平均年龄(64.1412.09)岁；其中肺癌 13例, 肠癌 10
13、 例,膀胱癌 9 例, 胃癌 9 例, 肝癌 8 例,食道癌 4 例, 乳腺癌 6例, 肾癌 2 例, 宫颈癌 3 例,胆囊癌 2 例,输尿管癌 3 例。血瘀证组 56例, 其中男 33 例,女 23 例；非血瘀证组 13 例,其中男 7 例, 女 6 例。血瘀证中医证候学观察：根据临床表现,将患者分为气虚血瘀组 18例, 其中男 10 例,女 8 例；气滞血瘀组 11 例 ,其中男 7 例,女 4 例；痰凝血瘀组 17 例,其中男 10 例,女 7 例；阴虚血瘀组 10 例,其中男 6例, 女 4 例。1.4.2 正常对照组选健康人 33 例,其中男 13 例, 女 20 例,平均年龄(59
14、.2410.34)岁,均无高血压、冠心病、糖尿病和肿瘤,无心、肝、肾及血液疾病。恶性肿瘤组及正常对照组间年龄、性别经方差分析和卡方检验,差异无统计学意义(P0.05),具有可比性。71.5 检测指标及方法1.5.1 血小板膜表面糖蛋白 CD41 和 CD62P 清晨采肘静脉血,全血由 EDTA 抗凝。各管加稀释液 70 L,全血 5 L,分别加入荧光染料 CD41-PE 5 L、CD62P-FITC 8 L 进行染色, 轻揉混匀, 避光孵育 30 min,待测。选择氩离子激光激发,激发波长为 488 nm,测定以前向角散射(FSC) 对侧向散射 (SSC)设门,调整电压, 圈出血小板群, 获取
15、 20 000 个血小板黄光信号(FITC、PE),用PMT1、PMT2 收集,转化成 log 信号散点图,以 Expo 软件进行处理,得出 CD41、CD62P 阳性血小板百分数。1.5.2 组织型纤溶酶原激活物和组织型纤溶酶原激活物抑制物取清晨空腹静脉血 2 mL,置于枸橼酸钠抗凝真空管 ,4 、3 000 r/min 离心 10 min,取出上清血浆,-80 保存待测。收集好标本后将待测血浆分别加入包被抗人组织型纤溶酶原激活物(t-PA)抗体和组织型纤溶酶原激活物抑制物-1 (PAI-1)抗体的反应条内,充分混匀,37 孵育 150 min,然后进行洗板机洗涤 ,每孔加 OPD 底物稀释
16、液 100 L,37 孵育 1520 min 使其显色,每孔加终止液 50 L终止反应,最后由 550 酶标仪检测,在 492 nm 处测定各孔 OD 值,以8OD492 对 t-PA、PAI-1 标准品含量(ng/mL) 在坐标上作标准曲线,待测样本含量(ng/mL)可从标准曲线上查出。1.5.3 凝血 4 项指标包括血浆凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fib) 、凝血酶时间(TT)及活化部分凝血活酶时间 (APTT)的测定。取清晨空腹静脉血 2 mL,置于枸椽酸钠抗凝真空管,以 3 000 r/min 离心 15 min,其中 Fib的测定采用 CLAUSS 比浊法,其余指标采用相应配套试剂及方法,然后由自动血凝分析仪检测。由机器自动将待测血浆用缓释液作110 稀释,并取待测稀释血浆 200 L,然后 37 预温 30 min,最后加入凝血酶溶液 100 L,测定各项指标
