《64例原发性胆囊癌中PTEN和c-2016年最新医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《64例原发性胆囊癌中PTEN和c-2016年最新医学论文（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询64例原发性胆囊癌中 PTEN和 c【摘要】 目的 研究 PTEN 和 c-erbB-2基因在原发性胆囊癌（PGC）中的表达及其意义。 方法 应用原位杂交（DNA-RNA）技术与免疫组化 SP法分别检测 64例 PGC中 PTEN mRNA、PTEN 蛋白和c-erbB-2蛋白的表达。以 22例胆囊腺瘤及 10例慢性胆囊炎作为对照。 结果PTEN mRNA和蛋白在 PGC组织中的阳性表达率(56.3%，59.4%)均明显低于胆囊腺瘤组织（81.8%，90.8%）和慢性胆囊炎组织(100%，100%)(P0.05)。c-erbB-2 蛋白在 P
2、GC组织中的阳性表达率(46.8%)均明显高于胆囊腺瘤组织(9.1%)和慢性胆囊炎组织(0)（P0.05） 。 结论 PTEN低表达和 c-erbB-2高表达共同参与了 PGC的发生发展，其蛋白可作为判断 PGC预后的指标。 【关键词】 胆囊肿瘤Expression of PTEN and c-erbB-2 in 64 Cases with Primary Gallbladder CarcinomaHUANG Ying1, WAN Hui-bin2, ZHENG Chang-li3精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询（1.The Primary Department of Me
3、dical in Changde Vacational Technical College, Changde 415000, China; 2.The Hospital of Womens Prison in Chang-Bei, Nanchang 330038, China; 3.The Pathology Department in Xiangya Hospital of Centre-South University, Changsha 410000, China)Abstract: Purpose To study the expression of PTEN and c-erbB-2
4、 in primary gallbladder carcinoma(PGC) and its significance. Methods The expression of PTEN mRNA, PTEN protein and c-erbB-2 protein were detected by in situ hybridization(DNA-RNA) and immunochemistry(SP method) in 64 cases with PGC, 22 cases with gallbladder adenoma and 10 cases with chronic cholecy
5、stitis as controls. Results The positive expression rates of PTEN mRNA and PTEN protein in PGC(56.3%,59.4%) were significantly lower than those in gallbladder adenoma (81.8%,90.8%) and chronic cholecystitis(100%,100%)(P0.05）. The positive expression rate of c-erbB-2 protein in PGC(46.8%) was signifi
6、cantly higher than that in gallbladder adenoma (9.1%) and chronic cholecystitis (0)(P0.05）. Conclusion Low expression 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询of PTEN and high expression of c-erbB-2 both play an important role in oncogenesis of PGC. They may be uses as markers for prognosis evaluation.Key words: g
7、allbladder neoplams；c-erbB-2；PTEN；immunochemistry；in situ hybridization近年来,与原发性胆囊癌（primary gallbladder carcinoma，PGC）发生有关的癌基因、抑癌基因不断被发现1。抑癌基因-10 号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN） ，于 1997年由 Li等2发现。目前研究发现 PTEN蛋白主要有以下功能：PTEN 促进细胞阻滞在 G1期3，PTEN 诱导细胞凋亡4，
8、PTEN 抑制细胞的迁移与黏附5。若 PTEN发生突变或缺失,则失去抑癌作用，且在恶性肿瘤中有低水平表达。突变的c-erbB-2与多种肿瘤的发生发展密切相关。本文有关胆囊癌中 PTEN基因与 c-erbB-2基因的研究，旨在探讨 PTEN基因和 c-erbB-2基因与 PGC发生发展的关系。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1 材料与方法11 研究对象64例原发性胆囊癌、22 例胆囊腺瘤及 10例慢性胆囊炎组织均为1996年2004 年中南大学湘雅医院附一院外科手术切除标本，均有完整的临床及病理资料，所有标本经 10%Formalin 固定，石蜡包埋，5m 连续切片，病理诊断
9、分别为原发性胆囊癌（PGC） 、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎。64 例原发性 PGC根据 Nevin标准6病理分级：其中S级 28例（级 10 例，级 18例） ，S级 36例（级14例，级 22例） ；远处转移 36例，淋巴结转移 34例；男性 24例，女性 40例。2949 岁 14例，5059 岁 24例，60 岁 26例，平均年龄 55（2981）岁。12 主要试剂免疫组化试剂：兔抗 PTEN及兔抗 c-erbB-2单克隆抗体为福州迈新生物技术有限公司，SP 试剂盒（通用型）为福州迈新生物技术有精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询限公司。原位杂交试剂：PTEN 原位杂交试剂盒为
10、武汉博士德生物工程有限公司产品。13 方 法13.1 免疫组化 SP法甲醇阻断，微波处理进行抗原修复，滴加一抗，4孵育过夜，滴加二抗，孵育，滴加 Streptavidin-Peraxidase，溶液显色，苏木素复染，镜下观察。阴性对照：用 PBS缓冲液分别代替 PTEN、c-erbB-2一抗或二抗，其它步骤同实验组。阳性对照：PTEN、c-erbB-2用已知抗 PTEN抗体、抗 c-erbB-2抗体阳性的乳腺癌组织作为阳性对照。13.2 原位杂交（DNA-RNA）方法精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询甲醇阻断，胃蛋白酶消化，双蒸水洗，加预杂交液，402h，加杂交液，40，过夜
11、，梯度 SSC液洗，加生物素化鼠抗地高辛，滴加 SABC，加生物素化过氧化物酶，DAB 溶液显色，苏木素复染，镜下观察。阴性对照：用不含探针的预杂交液替代含 PTEN寡核苷酸探针杂交液，其他步骤同实验组。阳性对照：用已知 PTEN mRNA阳性的乳腺癌组织作为阳性对照。133 结果判断标准PTEN mRNA和 PTEN 蛋白表达均以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，c-erbB-2 蛋白以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，并参照Fromowitz等7提出的方法，稍加改进作半定量分析：每张切片随机观察 5个高倍视野，每个视野计数 100个细胞，各视野中阳性细胞数的平均百分数作为该切片的阳性细胞百分比进
12、行计分。5%计为 0分；5%25%计为 1分；26%50%计为 2分；51%75%计为 3分； 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询75%计为 4分。染色强度以多数阳性细胞呈现的染色特征为标准计分。细胞未着色为 0分，染色呈淡黄色为 1分，棕黄色为 2分，棕褐色为 3分。最后以阳性细胞的百分比和染色强度计分之和所得的总分进行结果判定。01 分为阴性（-） ，23 分为弱阳性（+） ，45 分为中度阳性（+） ，67 分为强阳性（+） 。1.4 统计学分析采用 2 检验，以 P 0.05确定差异有显著意义。数据用 SPSS统计软件包进行处理。上一页 1 2下一页21 PTEN 蛋
13、白表达PTEN蛋白阳性信号呈棕黄色、棕褐色，以胞质型为主，少数核阳性。PGC 组织中阳性细胞呈片状分布，呈弱阳性全浆型、膜下型表达（图 1） ，阳性率 59.4%（38/64） ；慢性胆囊炎组织中 PTEN蛋白呈弥漫性强阳性全浆型表达，阳性率 100%（10/10） ，而胆囊腺瘤组织呈阳性全浆型表达，阳性率 90.8（20/22） 。表 1所示，PGC 组织精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询中 PTEN蛋白阳性表达率明显低于腺瘤组织和炎症组织（P 0.05） 。22 PTEN mRNA 表达PTEN mRNA表达形式和表达强度均与 PTEN蛋白相似（图 2） 。PGC癌组织中
14、 PTEN mRNA阳性率为 56.3%（36/64） ，胆囊腺瘤组织中阳性率为 81.8%（18/22） ，后者显著高于前者（P 0.05） 。慢性胆囊炎组织阳性率为 100%（10/10） 。23 c-erbB-2 蛋白表达PGC中 c-erbB-2阳性信号主要定位于胞膜和胞浆，呈强阳性表达；胆囊腺瘤中主要定位于胞浆，呈弱阳性表达（图 3） ，慢性胆囊炎组织未见着色。64 例 PGC癌组织中 c-erbB-2蛋白阳性为 30例，阳性率为 46.8%（30/64） ，22 例胆囊腺瘤 c-erbB-2蛋白阳性 2例，阳性率为 9.1%（2/22） ，前者显著高于后者（P 0.05） 。10
15、例慢性胆囊炎组织中未见阳性表达。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询3 讨 论PTEN是具有磷酸脂酶活性的抑癌基因。其基因序列分析表明，PTEN第 5外显子是其重要的功能域，它编码的序列与酪氨酸磷酸酶催化区的核心基因和双特异性的保守区高度同源，其编码的双特异性磷酸酶可使丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基去磷酸化8。PTEN 的磷酸酶活性是其抑制细胞生长的前提和条件9，该编码区基因的突变可能与肿瘤的发生密切相关。Whang 等10发现 PTEN mRNA在前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌等表达下调。Li 等11发现肿瘤细胞中 PTEN mRNA表达水平显著降低。本研究显示 PGC中 PTEN
16、 mRNA和PTEN蛋白的阳性表达率和阳性信号均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织。本研究结果显示 PTEN mRNA和 PTEN蛋白的表达呈现逐渐下调，提示 PTEN基因的突变或/和缺失可能与 PGC发生发展有关。癌基因 c-erbB-2又称 neu或 HER-2基因。其结构和功能与表皮生长因子受体（EGFR）有高度的相似性。通过 c-erbB-2基因对一系列激活因子的应答，细胞和组织生长、分化得到一定的调节。在体内外某些致癌因子作用下，c-erbB-2 基因被激活，主要表现为基因扩增及其蛋白产物的过度表达。突变后的 c-erbB-2蛋白，在细胞膜精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询上以凝聚形式存在，增加与细胞转化有关的酪氨酸激酶活性，刺激细胞生长，促进癌瘤的发生。Kamel 等12研究结果提示 c-erbB
