《125Ⅰ粒子植入照射对纤维肉瘤S180瘤株的治疗作用及其机制-2016年最新医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《125Ⅰ粒子植入照射对纤维肉瘤S180瘤株的治疗作用及其机制-2016年最新医学论文（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询125粒子植入照射对纤维肉瘤 S180 瘤株的治疗作用及其机制【摘要】 目的探讨 125粒子植入内照射治疗对纤维肉瘤 S180 瘤株的疗效及其治疗机制。方法本试验选用纤维肉瘤细胞 S180 株，通过 36 只雄性昆明种小鼠，建立纤维肉瘤动物模型，随即分成 3 组：对照组、外放疗组、125粒子内放疗组，每组 12 只小鼠。外放疗组采用直线加速器照射 200 cGy/次，剂量率为 210 cGy/分，1 次/d，共 3 次。125粒子内放疗组通过特制长穿刺针将 125粒子插入小鼠瘤体内，其中 6 只小鼠植入 1 个粒子，另外 6 只小鼠植入 2个
2、粒子。外放疗组照射后 6、30、54h 取材，内放疗组于粒子植入后4、8d 取材，瘤体标本用甲醛固定，用原位末端标记法（TUNEL 法）检测凋亡细胞，测定凋亡指数（AI） ，用免疫组化方法检测 p53 蛋白。结果(1)对照组未经治疗，也可发生自发性凋亡，但凋亡出现时间较晚，凋亡指数较小。(2)外放疗可以诱导细胞凋亡，且随着时间推移，凋亡指数有所增加。(3)125粒子植入内照射治疗可以诱导 S180 纤维肉瘤细胞凋亡，凋亡指数达到峰值的时间在 4 d 左右，且随着植入粒子的增多，照射剂量的增加，细胞凋亡指数也随着增加。2 个粒子内照射组与 1 个粒子内照射组比较，4、8 d P 均0.05。(4
3、)p53 免疫组阴性。结论(1)S180 瘤株对放疗敏感性较差，其放疗敏感性与突变型 p53 状态无关。 （2）125粒子植入内照射和外放疗一样，可诱导纤维肉瘤 S180 瘤株细胞凋亡，而且随着植入粒子的增多，凋亡指数也随之增加，有显著杀伤作用，其诱导细胞凋亡机制与突变精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询性 p53 基因状态无关。(3)125粒子植入照射是治疗肿瘤的一种有效方法。 【关键词】 125；植入照射；S180 瘤标；放疗；凋亡Therapy Effection and Mechanism of S180 Tumor Cell by 125 Seed Implantat
4、ionAbstract：ObjectiveTherapy effection and mechanism of S180 tumor cell by 125 seed implantation.MethodsThe study use S180 tumor cell,36 male Kunming mice were divided into 3 groups in random,12 mice each group:contrast,radiation and 125 seed implantation.Radiation:4MV Xray,200 cGy/fraction,three fr
5、action.125 seed implantation:insert the seed into the mouse tumor using the specialmade needle.One seed was implanted into six mice,two into another six mice.The model mice of radiation were sacrificed at 6h,30h and 54h.The model mice of seed implantation were sacrificed at 4d and 8d.The fresh tumor
6、 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询tissure sample were examined apoptosis by TuNEL,measured the apoptois index (AI) and p53 were measured by immunocytochemistry.Results(1)The contrast group can also have spontaneous apoptosis without treament.But the apoptosis appeared late with lower apoptosis index.(2)Rad
7、iation can induce cell apoptosis and the apoptosis index increased with the time went by. (3)125 seed implantation can induce S180 cell apoptosis.The peak value within 4d and with the increase of implanted seed,the AI increased.The comparsion between 2 seeds and 1 seed has significant difference wit
8、hin 4d and 8d (P 0.05).(4)p53 count not be found in S180 tumor cell.Conclusion(1) S180 tumor cell are less sensitive to radiation.The radiosensitivity is not realated to mutatedtype p53(mtp53).(2)125 seed implantation and radiation all can induce S180 tumor cel apoptosis.The induced apoptosis mechan
9、ism is not related to mutatedtype p53.(3)125 seed implantation is effective method in the treament of carcinomas.Key words：Iodiane125;Implantation radiation;S180 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询tumor cell;Radiation;Apoptosis0 引言125粒子植入治疗肿瘤，属于内照射中近距离放射治疗的内容之一，是一种新的内照射治疗方法1。在肿瘤治疗中有非常理想的局部控制率，引起了国内外许多学者的关注。本
10、实验利用 S180 纤维肉瘤细胞，通过昆明鼠建立纤维肉瘤动物模型，分别采用外照射治疗和 125粒子植入内照射治疗进行对比研究，探讨不同时间、不同剂量 125粒子内照射的疗效以及从分子和基因水平探讨其治疗机制。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 细胞株鼠纤维肉瘤株（S180 株）,由黑龙江省肿瘤医院研精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询究所提供。1.1.2 动物雄性昆明小鼠，体重 1820g，由黑龙江省肿瘤研究所动物室提供。1.1.3 放射性 125粒子源放射活度 0.50.75mci，直径 0.8mm，长度 4.5mm，由宁波君安药业科技有限公司提供。1.1.4 主要试剂
11、 p53 免疫组化试剂盒（一抗：免 IgG；二抗：封闭山羊血清） ，购于博士德生物工程有限公司，原位末端标记法（TUNEL）凋亡检测试剂盒（北京中山生物技术有限公司） 。1.1.5 主要仪器直线加速器 ELKTA Pricinel (瑞典)，MJ188型石蜡切片机（HISTKRYOTOM 产品） ，日本 Olympus 公司普通光学显微镜。1.2 实验方法精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.2.1 动物与肿瘤模型制作纯系健康雄性昆明小鼠 36 只，体重1820 g，收集 S180 纤维肉瘤细胞悬液，计数后制成 1.5106 个/ml，与每只昆明小鼠右后肢皮下接种 0.2ml
12、(3105 个)S180 纤维肉瘤细胞，接种后 5 d，即可触及皮下肿瘤结节，成功率 100%。1.2.2 实验分组待肿瘤长至 1cm2 时，将 36 只昆明小鼠随机分成3 组：对照组、外照射组、放射性 125粒子植入内照射组，每组12 只。对照组：饲养环境相同，不给实验处理。外照射组：采用直线加速器，4MVX ，源皮距 100cm，小鼠用戊巴比妥纳 30 mg/kg 麻醉后，将荷瘤小鼠后肢放于照射野内，2Gy/次，剂量率为 210 cGy/次，1 次/d，共 3 次。125粒子植入内照射治疗组：125粒子长4.5mm，直径 0.8mm，外壳用钛金属封闭，每粒活度为0.50.75mci，半衰期
13、为 59.6d，能量为 27.431.5kev，通过专用的特制长穿刺针将 125粒子经皮插进小鼠右后肢内，其中 6 只小鼠各植入 1 个 125粒子，另外 6 只小鼠各植入 2 个 125粒子。1.3 取材实验处理完毕后，外照射组于照射 6、30、50h 取材，内照射组于 125粒子植后 4、8d 取材，颈椎脱臼处死小鼠，摘除精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询皮下肿瘤，制备标本。瘤体标本用甲醛固定，用于免疫组化检验p53 蛋白和 TUNEL 法测定凋亡细胞。1.4 末端脱氧核苷酸原位标记法（TUNEL）测定凋亡细胞检测方法：组织切片常规石蜡脱水；3%双氧水（H2O2） ，洗
14、3 次；蛋白酶K（20g/ml）溶于 Tris/HCL 中，pH7.48.0，37消化后再次洗涤；标本经保湿处理后，每张切片取末端脱氧核糖核酸转移酶和DigdUTP 各 1l，加入 18l 标记缓冲液中混匀，甩去切片上多余液体后，加标记液 20l/片，置样品于湿盒中，37标记2h，PBS 洗 3 次；加酶标抗荧光素抗体，37、30 min，PBS 洗 3 次；加 DAB 显色 1030 min，水洗；加苏木精轻度复染；脱水，透明，封片，镜检。观察标准：光镜下见细胞核内有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞，细胞凋亡定量法：每张切片染色后，随机取5 个典型的高倍视野（400） ，不少于 1000
15、个细胞，阳性细胞数以百分数表示，即为凋亡指数（AI）2。1.5 免疫组化方法检测 p53 蛋白正常 p53 蛋白在细胞中易水解，半衰期为 20 min，因而用免疫组织化学方法不能检测到 p53 蛋白，而突变型 p53 蛋白构型发生改变，蛋白稳定性增加，导致半衰期延长，可达 212 h，可通过免疫组化检出，故 p53 阳性即提示突变型精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询p53 基因存在3。检测方法：载玻片防脱片处理；切片常规脱蜡入水；3%双氧水，室温 510 min，蒸馏水洗 3 次；将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（pH6.0） ，微波炉加热至沸腾后，断电间隔510 min
16、 后，反复 12 次；滴加正常山羊血清封闭液，室温 20 min，甩去多余液体，不洗；滴加适当稀释的一抗（免 IgG）4过夜，PBS 洗 3 次；滴加生物素化山羊抗兔 IgG，2030，20 min，PBS 洗 3 次；滴加试剂 SABC，2037，20 min，PBS 洗 5 min4 次；DAB 显色，镜下见阳性或背景略显黄色，水洗终止；苏木素轻度复染，脱水，透明，封片，镜检。结果评估：p53 蛋白染色阳性细胞为核内染成棕黄色，阴性细胞核为兰色，胞浆不着色。1.6 统计学处理采用 SPSS 软件包对数据进行处理，数据比较采用 t 检验。上一页 1 2 下一页2 结果2.1 外照射治疗与 125粒子植入治疗致纤维肉瘤细胞凋亡的变化（TUNEL 检测结果）以细胞出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片选择 5 个 400 倍视野，计数 1 000 个细胞，阳性
