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1、结核分枝杆菌耐链霉素和乙胺丁醇基因的突变特征分析由结核分枝杆菌（Mycobacterium Tuberculosis，MTB）引起的结核病是目前世界上最普遍的传染病之一，特别是耐药菌株的大量出现给结核病的诊断和治疗带来严峻的挑战。链霉素（Streptomycin，SM）和乙胺丁醇（Ethambutol，EMB）均为重要的一线抗结核药物，据全国第五次结核病流行病学抽样调查显示，SM的耐药率位居第二（19.6%），EMB相对比较低（6.8%）【1】。因此，对耐药结核的快速诊断和治疗已成为目前国内外亟需解决的难题。本研究通过基因芯片法检测对SM和EMB耐药的MTB的突变情况，并分析不同突变类型体外最
2、小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）的差异，为临床上快速有效诊断治疗结核提供依据。1 材料与方法1.1 一般材料1.1.1 菌株来源 选择自笔者所在医院临床分离后保存的MTB菌株共140株为研究对象，其中SM耐药菌株40株，敏感菌株20株；EMB耐药菌株60株，敏感菌株20株，菌种鉴定皆为人型MTB。质控MTB菌株H37Rv（ATCC 27294）由中国食品药品检定研究院提供。1.1.2 试剂 SM、EMB药敏罗氏培养管购于珠海贝索生物技术有限公司，使用罗氏培养基的药物临界浓度为SM：4 μg/ml，EMB：2 μg/ml；结核分枝
3、杆菌SM和EMB的MIC快速测定试剂盒购于深圳市怡百世生物技术有限公司；显色法耐药基因检测芯片试剂盒由中国科学院上海微系统与信息技术研究所提供。1.2 方法1.2.1 药物敏感试验 MTB的耐药性检测用的是改良罗氏比例法：按照中国防痨协会制定的结核病诊断细菌学检验规程进行，同时接种含药培养基和不含药的对照培养基，37 孵育4周观察并报告结果【2】。耐药标准：采用WHO推荐药敏比例法，含药培养基菌落数/不含药对照培养基菌落数≥1为耐药，0.05）。由此可见，即使有突变基因的检出，结核菌株也未必有耐药性，同样的，耐药菌株也未必就一定检测到突变基因。过去有研究发现耐药株的突变率要高于敏感株，而
4、本次研究结果与之不同，可能是由于选择的检测方法不同，或者是地域差异而导致的。由于乙胺丁醇本身的耐药情况不稳定，所以未对其体外MIC进行检测。同时笔者还将embB306位点的突变情况和药敏试验做了比较，众所周知，药敏试验是耐药结核检测的金标准，同金标准比较，用基因芯片法对embB306突变位点进行检测的灵敏度只有46.7%，特异度为60.0%，可见该方法的准确性并不是很高；而阳性预测值为77.8%，可见如果检测到突变的菌株，其为耐药菌株的可能性还是比较大的，其预测价值相对较高，但是阴性预测值只有27.3%，则说明未检测到突变的菌株为敏感株的可能性也很低，其预测价值很低；两者的一致率为50%，说明
5、该方法的可靠性不太好；而且Kappa值只有0.05，说明两种方法的一致性很差。以往研究则发现芯片法对EMB检测的真实性和可靠性及预测值都很好，与笔者的研究结果相差甚远。可能是因为以往的研究进行了测序分析，将所有的位点都检测出来，而本研究仅对一个位点进行检测，造成了准确性和可靠性及预测值都比较低的现象。总之，芯片法目前以其快速、有效、准确而被很多研究者大量应用于耐药结核的诊断，如果将其与传统药敏试验结合对于耐药结核的诊断肯定有很大的帮助。MIC的测定则可对传统比例法确定的耐药浓度以及耐药基因进一步明确，从而为临床上选择合适的药物提供参考，为进一步有效治疗结核提供一定的理论依据。参考文献【1】全国
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